Streptococcus y Enterococcus

1. PRÁCTICA No. 3
Streptococcus y Enterococcus
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
ACADEMIA DE BACTERIOLOGÍA MÉDICA
Equipo: 3 Grupo: 7QV1
19/ago./2019

2. Taxonomía

3. Localización de Streptococcus en el
cuerpo humano

4. Streptococcus y
Enterococcus
❖ griego: στρεπτό κοκκος; grano trenzado
y ἔντερον κόκκος; grano del intestino.
❖ Cocos gram positivos
❖ Arreglo en pares o cadenas
❖ Inmóviles
❖ Anaerobios facultativos
❖ No esporulados
❖ Metabolismo fermentativo
(Producen ácido láctico a partir
de glucosa)
❖ Crecimiento óptimo a 37°C
❖ Catalasa negativa
❖ algunos crecen únicamente en una atmósfera
enriquecida con dióxido de carbono

5. Clasificación del género Streptococcus

6. Características
de estreptococos
de importancia
médica

8. Streptococcus α-
hemolíticos
Resistente Susceptible
Streptococcus
pneumoniae*
Streptococcus
Viridans**
NACl 6.5%
Optoquina
Enterococcus Streptococcus
Grupo D
-
Bilis esculina
*Crecimiento en bilis esculina yNaCl 6.5%Negativos
**Crecimiento en NaCl 6.5% Negativo
Identificación de Streptococcus y Enterococcus α-
hemolíticos
+
+ -

9. *Las pruebas de CAMP e hidrólisis
son negativas.
Streptococcus
β-Hemolíticos
SusceptiblesResistentes
Streptococcus
agalactiae
Grupo B
Streptococcus
β-hemolíticos
Diferentes al
grupo A y B
Streptococcu
s pyogenes
(Grupo A)*
Bacitracina
Identificación de Streptococcus β-hemolíticos
(CAMP, Hipurato)
+ -

10. Identificación de Streptococcus y Enterococcus
no hemolíticos
Bilis esculina
Streptococcus
no Hemolíticos
NaCl 6.5%
Enterococcus
Streptococcus
Grupo D
Estreptococos
no hemolíticos
+ -
+ -

11. Enterococos
-Son patógenos oportunistas y causan infecciones en las vías urinarias,
bacteriemias, endocarditis. Infecciones: intraabdominales, pélvicas, de piel, del
conducto respiratorio y raramente del sistema nervioso central
E. faecalis y E. faecium, son las especies más frecuentemente aisladas, en
estas han surgido cepas resistentes a vancomicina (VRE) lo que ha provocado
que sean una amenza de la salud.

12. Murray, P., Rosenthal, K., Pfaller, M., Di_Francesco, P. and Angiolella, L. (2017). Microbiologia
medica. 24th ed. Milano: Edra. 205-208pp

13. Medios de crecimiento
-Caldo enriquecido Pike (azida de sodio 1:16000, cristal violeta 1:500 000) que
posteriormente se resiembra en agar sangre de carnero al 5%, o gelosa sangre
selectiva (medio Columbia con colistina) y ácido nalidíxico o gelosa sangre
adicionada adicionada con alcohol fenil etílico al 0.25% (S. agalactiae y S.
Pyogenes).
-Caldo de Todd-Hewitt para aislar Streptococcus del Grupo B.
-En caso de enterococos se pueden emplear para muestras estériles agar soya
tripticaseina, agar Todd-Hewitt o agar sangre,
-Para muestras que puedan tener biota normal, se pueden usar medios
selectivos con sales biliares, esculina y azida de sodio (medio Pfizer).
-

14. Hemolisis en Estreptococo y enterococo
-Las colonias de S. Pneumoniae son alfa hemolíticas, pero cuando se incuban en
aerobiosis pueden ser gamma hemolíticas o en anaerobiosis beta hemolíticas.
-S. agalactiae puede ser beta o gamma hemolítica.
-Las colonias de estreptococos del grupo Viridans son alfa hemolíticas y otras
gamma hemolíticas.
-La mayoría de los enterococos son gamma hemolíticas pero cuando se incuban
de 48 a 72 horas pueden aparecer con una alfa hemolisis.

15. Identificación definitiva
-En la identificación definitiva de los estreptococo beta, alfa y gamma
hemolíticos se utilizan pruebas como Voges Proskauer, hidrólisis de arginina, y
la utilización de carbohidratos.
-En el caso de los enterococos, se pueden diferenciar por pruebas bioquímicas
citadas más adelante.

17. Desarrollo
3)
Incubar a 37°C/ 24h
en atmósfera de CO2
al 5%
asdasdsssssssss
sssssssdsdssds
1)
2)
3)

18. Pruebas bioquímicas de acuerdo a la hemólisis

19. En caso de sospechar de un
Enterococcus
utilización de:
Tolerancia
al
incubar 37°C / 24 h

20. Identificación de las especies de Enterococcus Faecalis y
Enterococcus faecium

21. Bibliografía
•Jawetz, E., Melnick, J., Adelberg, E., Morse, S., Brooks, G., Toni, M. and Butel, J.
(2003). Jawetz, Melnick, Adelberg's Microbiologia medica. 25th ed. Padova:
Piccin. Capítulo 14.
•Murray, P., Rosenthal, K., Pfaller, M., Di_Francesco, P. and Angiolella, L. (2017).
Microbiologia medica. 24th ed. Milano: Edra. Capítulo 18 y 20.
•Stitt, E., Clough, P. and Clough, M. (1945). Practical bacteriology, haematology
and animal parasitology. 6th ed. London: H.K. LEwis and Co., Ltd.

22. Medios de cultivo y
pruebas bioquímicas
Fundamentos

23. Prueba de la optoquina
Se realiza con un disco impregnado con 5 µg de optoquina (clorhidrato de
etilhidrocupreína) y tiene por objeto diferenciar las cepas de S. pneumoniae de
las del grupo de Streptococcus viridans. Las cepas susceptibles a optoquina
corresponden a S. pneumoniae.
en agar gelosa sangre al 5%
incubar a 37°C /24 h en atmósfera de
CO2 al 5%
x ≥ 14 mm

25. Agar bilis esculina
la prueba de bilis esculina proporcionaba un medio confiable para identificar los
estreptococos del grupo D (Enterococcus sp) y diferenciarlos de los estreptococos
que no son del grupo D.
Las cepas de Enterococcus son capaces de crecer e hidrolizar esculina, mientras
que otros estreptococos no.

26. Composición y fundamento
Las sales biliares son el ingrediente selectivo, mientras que la
esculina es el componente diferencial. Los Enterococcus hidrolizan
la esculina en unos subproductos que reaccionan con el citrato
férrico que contiene el medio, produciendo sales insolubles de
hierro que resultan en un ennegrecimiento del medio.

28. Prueba de CAMP
La prueba (reacción) CAMP se basa en el hecho de que los estreptococos del
grupo B (S. agalactiae) producen un factor (factor CAMP) que actúa de manera
sinérgica con la ~B-hemolisina de S. aureus subesp. aureus en un medio de agar
con sangre ovina o bovina.
El sinergismo es una acción coordinada o correlacionada por dos o más
microorganismos; el sinergista, factor CAMP, es un adyuvante de la acción de
otro microorganismo.

29. Determinar la capacidad de un microorganismo para producir y elaborar el
factor CAMP, que actúa de manera sinérgica con la B-hemolisina estafilocócica
(0-lisina) sobre eritrocitos ovinos (oveja) o bovinos (buey) para producir un
fenómeno lítico (23) en la unión de los dos microorganismos.
El fenómeno lítico se denomina prueba o reacción CAMP por las iniciales de los
apellidos de sus autores originales: Christie, Atkins yMunch-Petersen. Con
posterioridad, el término se utilizó para otros procedimientos. Murphy y col.
denominaron fenómeno lítico a la reacción CAMP y definieron la prueba
CAMP como una manera de determinar la capacidad de los estreptococos de
producir un agente lítico (factor CAMP) que se manifiesta como una zona
hemolítica con la 0-lisina estafilocócica; de allí,la sigla CAMPo

30. Diferenciar e identificar de manera presuntiva cepas humanas o animales de
Streptococcus agalactiae del grupo B (+) de otras especies de Streptococcus (-)
cuando se incuban en aerobiosis o en condiciones reducidas de oxígeno (jarra
para extinción de la vela)
Con Rhodococcus equi (antes Corynebacterium equi)para identificar Listeria
ivanovii(+)

31. La prueba (reacción) CAMP se basa en el hecho de que los estreptococos del
grupo B producen un
factor (factor CAMP) que actúa de manera sinérgica con la ~-hemolisina de S.
aureus subesp. aureus en
un medio de agar con sangre ovina o bovina (18,23). El sinergismo es una acción
coordinada o correla-
cionada por dos o más microorganismos; el sinergista, factor CAMP, es un
adyuvante de la acción de otro
. .
mlcroorgamsmo.

32. Para cultivar todas las especies de Streptococcus deben utilizarse como medio
de cultivo placas de agar
con sangre (BA) ya que son microorganismos exigentes que requieren
enriquecimientos adicionales pa-
ra el desarrollo. Debe utilizarse sangre citratada o desfibrinada de oveja o de
buey ya que no ocurre reac-
ción con la sangre de caballo, conejo, cobaya ni humana (18). La presencia de
l3-antitoxina en algunos
lotes de sangre de oveja inhibe la producción de l3-toxina estafilocócica; para
evitar esta posibilidad uti-
lizar sólo células (71).

33. Prueba de la bacitracina
La bacitracina es un antibiótico que inhibe la síntesis de pared celular bacteriana,
y a la concentración que se encuentra en los discos (0,04 U) inhibe el crecimiento
de los estreptococos beta hemolíticos del grupo A( Streptococcus pyogenes) de
Lancefield pero no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta hemolíticos.

34. Prueba de Tolerancia al telurito de
potasio
La gelosa Telurito de Potasio es un medio destinado a la diferenciación de los
enterococos.
FUNDAMENTO
La selectividad de este medio se basa en la presencia de telurito de potasio que
inhibe la mayoría de los microorganismos asociados a los enterococos.
▶ La diferenciación de los enterococos se basa en su capacidad para reducir el
telurito de potasio en teluro. El teluro producido colorea las colonias de
negro.

35. Composicion
Extracto de carne 8 g/l
Extracto de levadura 5,5 g/l
Peptona 9,5 g/l
Cloruro de sodio 5 g/l
Glucosa 5 g/l
Agar 15 g/l
Suplemento: telurito de potasio (0,8%) : 1ml / 20ml de medio

36. Siembra
Sembrar en estrías muy juntas en un medio gelosado, a partir de un cultivo puro
y recién obtenido. Incubación: Incubar durante 24 a 48 horas a 37°C.
Lectura
Telurito (+): colonias negras (Enterococcus faecalis) ·
Telurito (-): ausencia de colonias o colonias blancas (Enterococcus faecium u
otros enterococos)

37. Control de calidad

38. Prueba de hidrólisis de hipurato
La prueba de hidrólisis de hipurato determina la capacidad que tienen los
estreptococos del grupo B, así como otras bacterias, de hidrolizar
enzimáticamente el hipurato sódico.
La hidrólisis del hipurato dará como producto final glicina, que reaccionará con la
Ninhidrina provocando un cambio de color a púrpura.

39. Procedimiento
1. Poner 0,1 ml de agua desmineralizada estéril en un pequeño tubo de ensayo
de plástico.
2. Tomar 1-3 colonias de un aislamiento reciente y emulsionarlas en el agua.
3. Con unas pinzas, dejar caer el disco de hipurato en la suspensión.
4. Incubar en medio aerobio durante 2 horas a 35-37°C.
5. Dispensar 2 gotas del reactivo ninhidrina o 3 gotas de BactiDrop ninhidrina, en
cada tubo de ensayo, mezclar y reincubar en medio aerobio durante 30 minutos
a 35-37°C.
6. Observar el desarrollo de un color entre azul y púrpura.

40. Control de calidad

41. Caldo todd Hewitt con NaCl 6.5%
El subgrupo Enterococos hace parte de los Estreptococos fecales, los cuales
están conformados por: S. faecalis, S. faecium, S. gallinarum, S. avium, S. bovis
y S. equinus. Las 4 primeras especies son considerados como Enterococos y se
diferencian del resto de Estreptococos por su capacidad de crecer en cloruro de
sodio al 6.5%, a un pH de 9.6 y a temperaturas de 10 y 45°C;

42. Fundamento
la fuente nutritiva del medio de cultivo que estimula el crecimiento
microbiano está constituido por la infusión de cerebro corazón y la peptona los
cuales proveen nitrógeno, vitaminas y aminoácidos. La glucosa es el hidrato de
carbono fermentable y el cloruro de sodio al 6.5% hace selectivo al medio
Por fermentación de la glucosa se generan productos ácidos que son
neutralizados por las sales fosfato de sodio y carbonato de sodio, evitando así
la destrucción de las hemolisinas.

44. Prueba de PYR-A-ENT
Es una prueba rápida y simples utilizada fundamentalmente para la
identificación de Streptococcus pyogenes, Enterococcus y microorganismos
similares a Streptococcus.

45. Fundamento

46. Procedimiento
A partir de un cultivo puro en agar sangre del microorganismo en estudio del
cual se ha identificado que son cocos Gram +, catalasa negativos, hacer una
suspensión densa en 50 microlitros de sol. fisiologica esteril y agregar un disco
de PYR-A-ENT
INCUBACIÓN
En aerobiosis, de 35 a 37°C por 30 minutos, posteriormente se lee resultado
Negativo:Solución alcalino o incoloro (Ausencia de PYR-asa)
Positivo:Solucion o disco rojo-rosa (acción enzimática de la PYR-asa

48. Medio con base CTA con Arabinosa
CTA Medium ™ (Medio de agar Cystine BD Trypticase ™) es un
medio simple y básico para el mantenimiento y la detección de la
motilidad de un amplia variedad de microorganismos. Con
carbohidratos agregados, es útil para la determinación de reacciones
de fermentación.

51. Prueba de CAMP
CAMP es un acrónimo para Christie, Atkins y Munch Petersen, quienes son los
tres investigadores que descubrieron el fenómeno.