1. PRACTICA Nº2<br />TEMA: DETERMINACION DEL TIEMPO DE PROTROMBINA Y TROMBOPLASTINA.<br />OBJETIVOS<br />Objetivo General<br />Determinar el Tiempo de Protrombina y Tromboplastina para el análisis de enfermedades hematológicas.<br /> <br />Objetivos Específicos<br />Analizar las causas que producen aumento en el tiempo de protrombina.<br />Determinar la utilidad del Tiempo parcial de Tromboplastina en la detección de alteraciones hemostáticas.<br />MATERIALES:<br />Tubos vacutainer de tapa celeste<br />Torniquete <br />Torundas de Alcohol<br />Lápiz graso<br />Tubos de ensayo pequeños<br />Micropipetas de 100 y 200 ul<br />Papel absorbente<br />Gradilla<br />Puntas desechables para micropipeta<br />Equipo de Bioseguridad: Mascarilla, gorro, mangas plásticas, guantes, camiseta y pantalón de color azul marino, zapatos blancos cerrados y mandil.<br />EQUIPOS<br />Cronometro<br />Baño María<br />Centrifuga<br />REACTIVOS<br />Reactivo de TP <br />Reactivo de TTP<br />MUESTRA<br />Sangre venosa<br />MARCO TEORICO<br />Protrombina<br />La protrombina es una proteína del plasma sanguíneo, forma parte del proceso de coagulación mediante la reacción de ésta con la enzima quot;
tromboplastinaquot;
, una enzima ubicada en el interior de los trombocitos, liberada al romperse la frágil membrana celular de los trombocitos. En esta etapa también participa el Ca++ (calcio), actuando como factor coenzimático.<br />La protrombina es creada en el hígado al igual que la mayoría de los factores coagulantes, también se denomina factor II de la coagulación. Se ha descubierto que un porcentaje reducido de personas sufren una mutación al gen de la protrombina, siendo más propensos a una trombosis.<br />Alteraciones del Tiempo de Protrombina<br />El tiempo de Protrombina puede aumentar debido a diferentes causas entre las más mencionadas tenemos:<br />Enfermedades Hepáticas, como la cirrosis hepática y la insuficiencia hepática aguda<br />Déficit de vitamina K, esto debido a una mala absorción o a la ingesta de antibióticos.<br />Monitorización a pacientes con anticoagulantes<br />Hepatopatías<br />Antes de Cirugías<br />Valores Normales<br />Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios.<br />EdadValores NormalesAdultos10 – 14 segundosNiños Prematuros12 – 21 segundosRecién nacidos12 – 20 segundos<br />Patologías<br />Se produce un aumento en el tiempo de Protrombina cuando existe:<br />Deficiencia de factores V, VII y X<br />Deficiencia de vitamina K<br />Hepatitis <br />Alcoholismo<br />Medicamentos<br />Se produce disminución en el tiempo de Protrombina cuando existe:<br />Hiperfunción ovárica<br />Dieta rica en grasas<br />Tromboplastina<br />Es un examen que mide la capacidad de la sangre para coagular, específicamente la vía intrínseca (que implica al factor IX y cofactores) y la vía común (factores X y II, y cofactores) de la coagulación. Está enfocado en un paso específico del proceso de coagulación.<br />Además de detectar anormalidades de la coagulación, el TTP se usa también para controlar el efecto del tratamiento con heparina, uno de los anticoagulantes más utilizados. Se usa conjuntamente con el tiempo de protrombina (PT), que mide la vía extrínseca (que implica al factor VII y el factor tisular)<br />Cuando se realiza<br />Este examen que va junto al tiempo de protrombina se utiliza para:<br />Detectar problemas de sangrado<br />Vigilar personas con tratamientos de anticoagulante<br />Antes de realizar cirugías<br />Valores Normales<br />Los tiempos de coagulación dependen de numerosos factores, entre los que se incluyen la temperatura, la calidad del agua, el pH, la carga iónica, el anticoagulante, la toma de muestras, la conservación de muestras y la población de pacientes. Cada laboratorio ha de establecer límites específicos normales para cada prueba. <br />EdadValores NormalesAdultos30 – 45 segundos<br />Patologías <br />Se produce un aumento del tiempo parcial de tromboplastina cuando existe:<br />Cirrosis<br />Coagulación Intravascular diseminada<br />Deficiencia del factor XII<br />Hemofilia A y B<br />Hipofibrinogenemia<br />Mala Absorción<br />Enfermedad de Von Willebrand<br />Tiempo de Protrombina<br />Principio<br />El PT de un paso mide el tiempo de coagulación del plasma después de adicionar una fuente de factor tisular (Tromboplastina) y calcio. La recalcificación del plasma en la presencia del factor tisular genera la activación del factor Xa con la consecuente formación de trombina y por ultimo un coagulo de fibrina.<br />Tiempo Parcial de Tromboplastina<br />Principio<br />El Tiempo parcial de Tromboplastina activada se realiza por la adición a la muestra del reactivo de aPTT que contiene un activador de plasma y fosfolípidos. Los fosfolípidos sirven como un sustituto de las plaquetas. Esta mezcla se incuba para una activación, después se recalcificación cloruro de calcio y se contabiliza el tiempo de formación del coagulo.<br />PROCEDIMIENTO<br />Reactivo de TP<br />Extracto de cerebro de conejo……………… 2.6 %<br />CaCl2…………………………………………………….. 0.13 %<br />Sales y estabilizadores<br />Método de TP<br />Una vez seleccionada la vena se procede a limpiar el sitio de punción.<br />Se realiza una pequeña punción y se extrae con vacutainer 4.5 ml de sangre en un tubo con citrato de sodio.<br />Después se lleva a centrifugar la sangre y se separa el plasma.<br />Luego como reactivo de TP viene liofilizado, es decir en polvo, para utilizarlo se coloca 2ml de agua destilada, se agita suavemente hasta que se disuelva completamente y se lo deja incubar por 15 minutos.<br />Colocar en un tubo de ensayo el plasma ya separado.<br />En otro tubo colocar 200ul de reactivo de TP.<br />Estos dos tubos se los lleva al baño María a 37ºC de 3 a 5 minutos.<br />Transcurrido este tiempo se añade 100ul de plasma en el tubo que contiene reactivo de TP, apenas se añade el plasma se activa el cronometro y mezclo sin sacar del baño María.<br />Pasado unos 7 segundos aproximadamente luego de ver activado el cronometro se saca el tubo y se observa hasta que se forme la red de fibrina.<br />Reactivo de TTP<br />Extracto de cerebro y fosfolípidos…………………………………… 0.007 %<br />Ácido Elágico………………………………………………………………… 0.0037 %<br />Bufferes, sales y estabilizadores<br />Método de TTP<br />Una vez seleccionada la vena se procede a limpiar el sitio de punción.<br />Se realiza una pequeña punción y se extrae con vacutainer 4.5 ml de sangre en un tubo con citrato de sodio.<br />Después se lleva a centrifugar la sangre y se separa el plasma.<br />Se enumeran 2 tubos uno para reactivo de TTP y otro para Cloruro de Calcio.<br />En un tubo se colocan 100ul de reactivo de TTP a este mismo tuvo le adiciona 100ul de plasma y se mezcla suavemente.<br />En otro tubo colocamos el cloruro de calcio.<br />A los dos tubos se los lleva al baño María a 37ºC de 3 a 5 minutos.<br />Luego se coloca 100ul de cloruro de calcio en el tubo que contiene plasma y reactivo de TTP, apenas coloco el cloruro de calcio activo el cronometro y mezclo el tubo dentro del baño María por 25 segundos.<br />Transcurrido este tiempo saco el tubo y observo hasta que se formen los filamentos de fibrina.<br />Resultados<br />ResponsablesTPTTPDoctora11 segundos44 segundosDaniela13 segundos41 segundos<br />Interpretación de Resultados<br />Tiempo de Protrombina (PT)<br />En este examen el rango de error establecido por la docente fue de ± 1 por lo que comparando el resultado obtenido por la docente que es de 11 segundos con el resultado obtenido por mi persona que es de 13 segundos y tomando en cuenta el rango de error mi valor esta fuera del rango establecido por la doctora. Cabe destacar que ambos valores se encuentran dentro de los valores de referencia que son de 10 a 14 segundos.<br />Tiempo Parcial de Tromboplastina (TTP)<br />En este examen el rango de error establecido por la docente fue de ± 1 por lo que comparando el resultado obtenido por la docente que es de 44 segundos con el resultado obtenido por mi persona que es de 41 segundos y tomando en cuenta el rango de error mi valor esta fuera del rango establecido por la doctora. Cabe destacar que ambos valores se encuentran dentro de los valores de referencia que son de 30 a 45 segundos<br />GRAFICOS<br />Procedimiento para TP<br />Procedimiento de TTP<br />CONCLUSIONES<br />El tiempo de Protrombina puede aumentar debido a diferentes causas entre las más mencionadas tenemos:<br />Enfermedades Hepáticas, como la cirrosis hepática y la insuficiencia hepática aguda<br />Déficit de vitamina K, esto debido a una mala absorción o a la ingesta de antibióticos.<br />Monitorización a pacientes con anticoagulantes<br />Hepatopatías<br />Antes de Cirugías<br />El tiempo parcial de Tromboplastina se utiliza para detectar anormalidades de la coagulación, el TTP se usa también para controlar el efecto del tratamiento con heparina, uno de los anticoagulantes más utilizados. Se usa conjuntamente con el tiempo de protrombina (PT), que mide la vía extrínseca (que implica al factor VII y el factor tisular)<br />LIMITACIONES<br />No se encontró ninguna limitación <br />RECOMENDACIONES<br />Homogenizar bien la sangre con el anticoagulante, para evitar la coagulación de la misma.<br />Tener mucha atención en el momento en que empieza a formarse el coagulo de fibrina en caso del TP y los filamentos de fibrina en caso de TTP para evitar dar resultados erróneos.<br />Pipetear adecuadamente para que los resultados no se alteren.<br />Evitar que el tiempo en que están los tubos en el baño María sea mayor a 5 minutos.<br />BIBLIOGRAFIA <br />Burneo, R. Principios de Laboratorio Clínico. 1era Edicion. Loja-Ecuador.Cientifica Medica. 1992. Págs. 182-183<br />YOVISNA, “Manual Básico de Laboratorio Clínico”, disponible en, http://www.monografias.com/trabajos14/labclinico/labclinico.shtml<br />