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III) La información celular                                                                                                                                 5) Replicación del ADN




   5) LA REPLICACIÓN DEL ADN


   )CÓMO ES EL PROCESO DE REPLICACIÓN DEL ADN?

     El ADN es una molécula formada por dos
   hebras complementarias y antiparalelas. Una
   de las primeras dudas que se plantearon fue                                                                      Replicación



   la de cómo se replicaba el ADN. A este
   respecto había dos hipótesis:
                                                                                                   ADN original                             ADN original             ADN copia
   10) El ADN se replica de manera conserva-
   tiva. Esto es, cada hebra de ADN forma una                                                   Fig. 1            Replicación conservativa.
   copia y una célula hija recibe la molécula
   original y la otra célula recibe la copia.
   20) El ADN se replica de manera semiconser-
   vativa. Cada hebra de ADN forma una hebra                                                                            Replicación

   complementaria y cada célula hija recibe una
   molécula de ADN que consta de una hebra
   original y de su complementaria sintetizada
   de nuevo.                                                                                         ADN original                             ADN copia
                                                                                                                                              y original
                                                                                                                                                                    ADN original
                                                                                                                                                                      y copia



      Esta controversia    fue                                         resuelta por             Fig. 2            Replicación semiconservativa.
   MESELSON y STAHL con                                               una serie de
   elegantes experiencias.


   EXPERIENCIAS DE MESELSON Y STAHL.


                                                                                                                                                                3
                                                              3



                                                              2                                                                                                 2



                                                              1
                                                                                                                                                                1

                            15 N- 15N

                                                                                                            15 N- 15N             14 N- 14N




      Se cultivan bacterias E. coli en un medio con                   15
                                                                           N (nitrógeno    A continuación, se cultivan las bacterias en nitrógeno 14 (14N)
     pesado) durante cierto tiempo para que todo el ADN esté                              más ligero durante 30 minutos, lo que dura un ciclo de replica-
     formado por dos hebras de          15
                                             N (15 N-15 N) más pesadas. Si se             ción. Si la hipótesis de la síntesis conservativa fuese la co-
     centrifu ga, este ADN más pesado migra hacia el fondo del tubo                       rrecta, se debería obtener lo que se ve en la figura, una banda
     y se obtiene el resultado que se observa en la figura.                               de ADN pesado (15 N-15 N) y otra con ADN ligero (14 N-14 N) pero...


                                                                  3                                                                                                      3



                                                                  2                                                                                                      2



                                                                  1                                                                                                      1


                      14N -15N          15N -14N                                                      14N -15N
                                                                                                                  14N- 14N        14N- 14N       15N -14N




     .. lo que se obtiene en realidad es lo que se observa en la                           Además, si se da otro ciclo de replicación en                        14
                                                                                                                                                                     N, se obtiene
     figura: una sola banda en posición intermedia, pues está                             una banda de ADN mixto ( N- N) y otra de ADN (14 N-14 N), lo
                                                                                                                                  14   15


     formada por ADN mixto (15 N-14 N). Esto es, todas las células hijas                  que también está de acuerdo con la hipótesis de la síntesis
     tienen un ADN con una hebra con               15
                                                        N y otra con        14
                                                                                 N. La    semiconservativa.
     hipótesis de la síntesis semiconservativa es la correcta.




J. L. Sánchez Guillén                                                                                                                                                        Página III-5-1
III) La información celular                                                                                          5) Replicación del ADN


   LA REPLICACIÓN SEMICONSERVATIVA DEL
   ADN EN EUCARIOTAS

    Cuando una célula se divide, o cuando se
   originan los gametos, las nuevas células que           Cromosoma: arriba, en procariotas, abajo, en eucariotas.



   se forman deben contener la información
   genética que les permita sintetizar todas las
   enzimas y el resto de las proteí nas
   necesarias para realizar sus funciones vitales.
   Ésta es la principal razón por la que el ADN
   debe replicarse.                                   Fig. 3 Replicación del ADN en procariotas
                                                      y en eucariotas. En procariotas sólo hay un
                                                      ojo de replicación, mientras que en eucariotas
     La replicación del ADN es el proceso según       hay varios.
   el cual una molécula de ADN de doble hélice
   da lugar a otras dos moléculas de ADN con
   la misma secuencia de bases.

     En la célula procariótica la replicación parte
   de un único punto y progresa en ambas
   direcciones hasta completarse. En la célula
   eucariótica el proceso de replicación del          Fig. 4 Microfotografía al MET de un
   ADN no empieza por los extremos de la              fragmento de la doble hélice de un cromosoma
                                                      de eucariota replicándose.
   molécula sino que parte de varios puntos a
   la vez y progresa en ambas direcciones
   formando los llamados ojos de replicación.
   Primero se separan las dos hebras y, una                        Ojos de replicación


   vez     separadas,      van     entrando     los
   nucleótidostrifosfato     complementarios     de
   cada uno de los de las hebras originales del                                                                             Cromosoma
                                                                                                                            (doble hélice de ADN)
   ADN. Las enzimas ADN polimerasas los                                                        replisomas


   unen entre sí formando una hebra de ADN
   complementaria de cada una de las hebras           Fig. 5 Cromosoma de eucariota
                                                      replicándose. El replisoma es un complejo
   del ADN original. Se dice que la síntesis de       formado por todas las enzimas que intervienen
   ADN es semiconservativa porque cada una            en el proceso de replicación.
   de las moléculas de ADN " hijas" está forma-
   da por una hebra de ADN original y otra
   complementaria sintetizada de nuevo.                             Hebra de ADN
                                                      A
                                                           C                        ATP asa
                                                               T

    Es de destacar que la dirección en la que                                                        Helicasa


   progresa la replicación es la misma en
   ambas hebras. Ahora bien, las enzimas que
   unen los nucleótidos sólo pueden efectuar la
   unión en dirección 5' 3'. Esto nos indica
   que ambas hebras, al ser antiparalelas,                     A                              Proteínas
                                                                                                                     Topoisomerasa


   deben de sintetizarse de diferente manera.             G                                   estabilizadoras
                                                      T                    ADN polimerasas




   a) Síntesis continua de la hebra en dirección      Fig. 6      Enzimas y otras proteínas que
   5' 3'. La síntesis de esta hebra no plantea       forman el replisoma. Se muestra en este
   ningún problema. Así, una vez separadas            esquema un detalle del recuadro de la figura
                                                      anterior.
   ambas hebras, la ADN pol. III (una de las



J. L. Sánchez Guillén                                                                                                                    Página III-5-2
III) La información celular                                                                                                                  5) Replicación del ADN


   enzimas que unen los nucleótidos) va a
   elongar la cadena en dirección 5' 3' a partir
   de un primer o fragmento de ARN que
   después será eliminado.                                          A

                                                                     U
                                                                         T

                                                                         A
                                                                             C

                                                                             G
                                                                                     G

                                                                                     C
                                                                                             A

                                                                                             T
                                                                                                     A

                                                                                                     T
                                                                                                         C

                                                                                                         G
                                                                                                             C

                                                                                                             G
                                                                                                                 G

                                                                                                                 C
                                                                                                                     T

                                                                                                                     A
                                                                                                                         T

                                                                                                                         A
                                                                                                                             G

                                                                                                                             C
                                                                                                                                 C
                                                                                                                                 G
                                                                                                                                     A
                                                                                                                                     T
                                                                                                                                             C
                                                                                                                                             G
                                                                                                                                                 C       G       T   T   G   C    A   C




   b) Síntesis discontinua. La hebra comple-
   mentaria no se va a replicar en sentido
   3' 5' sino que se replica discontinuamente                     Fig. 7                        Síntesis continua.
   en dirección 5' 3'. Los diferentes fragmen-
   tos sintetizados, llamados fragmentos de
   Okazaki, son posteriormente unidos entre sí.

     El proceso es complejo y consiste en lo si-
   guiente: En primer lugar se sintetiza un pe-
   queño fragmento de ARN, fragmento deno-
   minado primer. Partiendo de este primer se                        A   T       C       G       A       A   C   C   G   T   T   G       C   A       C       C       G   T   T   G    C


   sintetiza un fragmento de ADN en dirección                        T   A       G C             T       U   G   G C             C       G   T       G G             C   A   A



   5' 3'. Al llegar al primer del fragmento                                 1er fragmento sintetizado                               2º fragmento sintetizado


                                                                                                                         A       A
   anteriormente sintetizado, éste es degradado
   y se rellena el hueco con ADN. Se dice que
                                                                   Fig. 8                        Síntesis discontinua.
   la replicación es discontinua porque el ADN
   se va a ir sintetizando en fragmentos que,
   posteriormente, son soldados uno al otro.




             A    T   C   G   A   T   C   G   G   G   C

             T    A   G   C   T   A   G   C   C   C   G




                                                                         A           T           C           G       A       T       C           G       G
                                                                         T           A               G       C       T       A       G           C           C




             A    U   C   G   A   T   C   G   G   G

              T   A   G   C   T   A   G   C   C   C




      Fig. 9      Replicación del ADN. Acontecimientos que se dan en un replisoma.




J. L. Sánchez Guillén                                                                                                                                                            Página III-5-3

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Replicacion del ADN

  • 1. III) La información celular 5) Replicación del ADN 5) LA REPLICACIÓN DEL ADN )CÓMO ES EL PROCESO DE REPLICACIÓN DEL ADN? El ADN es una molécula formada por dos hebras complementarias y antiparalelas. Una de las primeras dudas que se plantearon fue Replicación la de cómo se replicaba el ADN. A este respecto había dos hipótesis: ADN original ADN original ADN copia 10) El ADN se replica de manera conserva- tiva. Esto es, cada hebra de ADN forma una Fig. 1 Replicación conservativa. copia y una célula hija recibe la molécula original y la otra célula recibe la copia. 20) El ADN se replica de manera semiconser- vativa. Cada hebra de ADN forma una hebra Replicación complementaria y cada célula hija recibe una molécula de ADN que consta de una hebra original y de su complementaria sintetizada de nuevo. ADN original ADN copia y original ADN original y copia Esta controversia fue resuelta por Fig. 2 Replicación semiconservativa. MESELSON y STAHL con una serie de elegantes experiencias. EXPERIENCIAS DE MESELSON Y STAHL. 3 3 2 2 1 1 15 N- 15N 15 N- 15N 14 N- 14N Se cultivan bacterias E. coli en un medio con 15 N (nitrógeno A continuación, se cultivan las bacterias en nitrógeno 14 (14N) pesado) durante cierto tiempo para que todo el ADN esté más ligero durante 30 minutos, lo que dura un ciclo de replica- formado por dos hebras de 15 N (15 N-15 N) más pesadas. Si se ción. Si la hipótesis de la síntesis conservativa fuese la co- centrifu ga, este ADN más pesado migra hacia el fondo del tubo rrecta, se debería obtener lo que se ve en la figura, una banda y se obtiene el resultado que se observa en la figura. de ADN pesado (15 N-15 N) y otra con ADN ligero (14 N-14 N) pero... 3 3 2 2 1 1 14N -15N 15N -14N 14N -15N 14N- 14N 14N- 14N 15N -14N .. lo que se obtiene en realidad es lo que se observa en la Además, si se da otro ciclo de replicación en 14 N, se obtiene figura: una sola banda en posición intermedia, pues está una banda de ADN mixto ( N- N) y otra de ADN (14 N-14 N), lo 14 15 formada por ADN mixto (15 N-14 N). Esto es, todas las células hijas que también está de acuerdo con la hipótesis de la síntesis tienen un ADN con una hebra con 15 N y otra con 14 N. La semiconservativa. hipótesis de la síntesis semiconservativa es la correcta. J. L. Sánchez Guillén Página III-5-1
  • 2. III) La información celular 5) Replicación del ADN LA REPLICACIÓN SEMICONSERVATIVA DEL ADN EN EUCARIOTAS Cuando una célula se divide, o cuando se originan los gametos, las nuevas células que Cromosoma: arriba, en procariotas, abajo, en eucariotas. se forman deben contener la información genética que les permita sintetizar todas las enzimas y el resto de las proteí nas necesarias para realizar sus funciones vitales. Ésta es la principal razón por la que el ADN debe replicarse. Fig. 3 Replicación del ADN en procariotas y en eucariotas. En procariotas sólo hay un ojo de replicación, mientras que en eucariotas La replicación del ADN es el proceso según hay varios. el cual una molécula de ADN de doble hélice da lugar a otras dos moléculas de ADN con la misma secuencia de bases. En la célula procariótica la replicación parte de un único punto y progresa en ambas direcciones hasta completarse. En la célula eucariótica el proceso de replicación del Fig. 4 Microfotografía al MET de un ADN no empieza por los extremos de la fragmento de la doble hélice de un cromosoma de eucariota replicándose. molécula sino que parte de varios puntos a la vez y progresa en ambas direcciones formando los llamados ojos de replicación. Primero se separan las dos hebras y, una Ojos de replicación vez separadas, van entrando los nucleótidostrifosfato complementarios de cada uno de los de las hebras originales del Cromosoma (doble hélice de ADN) ADN. Las enzimas ADN polimerasas los replisomas unen entre sí formando una hebra de ADN complementaria de cada una de las hebras Fig. 5 Cromosoma de eucariota replicándose. El replisoma es un complejo del ADN original. Se dice que la síntesis de formado por todas las enzimas que intervienen ADN es semiconservativa porque cada una en el proceso de replicación. de las moléculas de ADN " hijas" está forma- da por una hebra de ADN original y otra complementaria sintetizada de nuevo. Hebra de ADN A C ATP asa T Es de destacar que la dirección en la que Helicasa progresa la replicación es la misma en ambas hebras. Ahora bien, las enzimas que unen los nucleótidos sólo pueden efectuar la unión en dirección 5' 3'. Esto nos indica que ambas hebras, al ser antiparalelas, A Proteínas Topoisomerasa deben de sintetizarse de diferente manera. G estabilizadoras T ADN polimerasas a) Síntesis continua de la hebra en dirección Fig. 6 Enzimas y otras proteínas que 5' 3'. La síntesis de esta hebra no plantea forman el replisoma. Se muestra en este ningún problema. Así, una vez separadas esquema un detalle del recuadro de la figura anterior. ambas hebras, la ADN pol. III (una de las J. L. Sánchez Guillén Página III-5-2
  • 3. III) La información celular 5) Replicación del ADN enzimas que unen los nucleótidos) va a elongar la cadena en dirección 5' 3' a partir de un primer o fragmento de ARN que después será eliminado. A U T A C G G C A T A T C G C G G C T A T A G C C G A T C G C G T T G C A C b) Síntesis discontinua. La hebra comple- mentaria no se va a replicar en sentido 3' 5' sino que se replica discontinuamente Fig. 7 Síntesis continua. en dirección 5' 3'. Los diferentes fragmen- tos sintetizados, llamados fragmentos de Okazaki, son posteriormente unidos entre sí. El proceso es complejo y consiste en lo si- guiente: En primer lugar se sintetiza un pe- queño fragmento de ARN, fragmento deno- minado primer. Partiendo de este primer se A T C G A A C C G T T G C A C C G T T G C sintetiza un fragmento de ADN en dirección T A G C T U G G C C G T G G C A A 5' 3'. Al llegar al primer del fragmento 1er fragmento sintetizado 2º fragmento sintetizado A A anteriormente sintetizado, éste es degradado y se rellena el hueco con ADN. Se dice que Fig. 8 Síntesis discontinua. la replicación es discontinua porque el ADN se va a ir sintetizando en fragmentos que, posteriormente, son soldados uno al otro. A T C G A T C G G G C T A G C T A G C C C G A T C G A T C G G T A G C T A G C C A U C G A T C G G G T A G C T A G C C C Fig. 9 Replicación del ADN. Acontecimientos que se dan en un replisoma. J. L. Sánchez Guillén Página III-5-3