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Bioquímica genética
TRANSCRIPCIÓN
Pérez Martínez Marlene Rubí.
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
Licenciatura en químico Farmacobiólogo
Departamento de alimentos
BIOQUIMICA II
Conceptos necesarios
• Intrón: secuencias no codificadoras de ADN que son separadas por
los exones.
• Exón: secuencias codificadoras de DNA en genes
• Operón: un grupo de genes cuya expresión ésta controlada por un
único operador.
• Promotor: una región del DNA a la que puede unirse la RNA
polimerasa para comenzar la transcripción.
La transcripción del DNA es un mecanismo fundamental para el control
celular y para la expresión de la información genética.
Este mecanismo permite
que la información del DNA
llegue al resto de orgánulos
celulares y salga del núcleo
en el caso de los eucariotas.
Para ello esa información debe copiarse en forma de RNA.
La transcripción es…
el proceso mediante el cual una secuencia de nucleótidos de DNA es
utilizada como molde para la síntesis de una molécula de RNA
La ARN polimerasa empareja A,C,G y T del ADN con A,C,G y U de la cadena de ARN
que va creciendo. Así la secuencia de bases del ARN es complementaria a la
secuencia de la cadena codificadora e igual a la secuencia de la cadena estabilizadora
del ADN, cambiando T por U.
La transcripción es asimétrica: solamente se trascribe para
cada gen una de las dos cadenas del ADN. La cadena trascrita
se llama codificadora, y la cadena de ADN que no se
transcribe se denomina estabilizadora
Elementos que intervienen
Para que se lleve a cabo la transcripción del DNA en las células se
requieren los siguientes elementos:
• DNA original que servirá de molde para ser copiado
• RNA-polimerasa que sintetiza el RNA a partir del molde del DNA
• Ribonucleótidos trifosfato para llevar a cabo la copia
• Poli-A polimerasa, ribonucleoproteína pequeña nuclear, RNA-ligasa
RNA polimerasa DNA dirigida
En procariontes existe un solo tipo de ARN polimerasa, constituida por
las subunidades proteicas α, β, β’ y σ. Cada subunidad cumple una
función específica
70 kDa, Interacciona con
secuencias del promotor
para determinar el sitio de
inicio de la transcripción
37 kDa, Regula la frecuencia
de iniciación
156 kDa y 151 kDa
respectivamente, son las
Subunidades catalíticas
Aproximadamente 3.000 moléculas por
célula y 1.500 transcribiendo, las otras
1.500 asociadas débilmente al DNA,
moviéndose al azar hasta encontrar una
secuencia promotora
RNA polimerasas
En eucariontes, el sistema es más complejo. Existen tres tipos de ARN
polimerasa, específicas para los distintos tipos de ARN que se sintetizan
Las RNA
polimerasas de
mitocondrias y
cloroplastos de
menor tamaño y se
asemejan a la
bacteriana
• Las 3 ARN pol son
similares a las
subunidades β de la
ARN pol procariota
• 5 subunidades son
comunes
Están conformadas por 8 a 14 cadenas
polipeptídicas. Estas enzimas son proteínas
aparecen como agregados de 500 kDa.
La unión de RNA polimerasas a los moldes de
DNA es eucariotas depende de numerosas
proteínas que modulan el reconocimiento de
los promotores y el inicio de la transcripción
RNA polimerasa I
• Se localiza en el nucléolo
• Transcribe los principales genes de RNA ribosómico (un solo
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• Necesita al menos 2 factores de transcripción para iniciar el proceso.
• UBF1 es un polipéptido que se une a una región rica en G-C tanto en el núcleo
del promotor como en UCE.
• SL1 está formada por 4 proteínas, una de estas es la TBP (binding protein),
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RNA polimerasas II
• Se encuentra en el nucleoplasma y sintetiza el RNAhn (RNA
heterogéneo nuclear), el precursor del RNAm, también sintetiza
algunos RNAsn.
• Transcribe genes estructurales (los que se traducen a proteínas)
• ESTRUCTURA: Contiene entre 8 y 12 subunidades. Dos grandes
subunidades de 240 kD = RPB1 (β) y 140 Kd = RPB2 (β´).
• Utiliza al menos 7 factores de transcripción: TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE,
TFIIF, TFIIH y TFIIJ.
• Los promotores de la RNApol lI se localizan en el extremo 5’ del
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RNA polimerasa III
• Se encuentra en el nucleoplasma del núcleo.
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reconoce secuencias
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usados para cada tipo de ARNpol
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regulado en eucariotas, ya que los genes están muy
distanciados y existen muchos tramos de ADN con
elementos reguladores
Elongación
Es importante resaltar, sin embargo, que las histonas del
octámero del nucleosoma nunca se llegan a disociar del
ADN que se está transcribiendo.
Una vez que la transcripción
ha comenzado, algunos de los
FTs permanecen en el
promotor y otros en la
ARNpol y los restantes son
separados de la ARNpol
el complejo de iniciación de
la transcripción, que quedará
unido al promotor
si una nueva enzima lo
vuelve a reconocer
comenzará la síntesis sin
necesidad de haber
reclutado a todos los
factores de iniciación.
Terminación de la transcripción
Este proceso es poco preciso en los organismos eucariotas, ya que no hay señales de terminación
exactas o consenso tal y como ocurre en procariotas.
La ARN polimerasa sigue la transcripción del gen incluso en la secuencia no codificante de la porción
3' Posteriormente el ARN ya separado de la cadena de ADN será procesado por otras enzimas que
modifican el extremo 3'.
El DNA se transcribe en tramos muy largos
que pueden contener uno o varios genes
Monocistrónico
Solo tiene un codón de inicio AUG, que es
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da lugar a varias proteínas. Se dice que lleva
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Algunos virus poseen
RNA como molécula
responsable de su
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permanencia realizan la
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inversa
• El proceso de transcripción inversa es muy
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que las mutaciones pueden ocurrir
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Eucariotas
• La polimerasa codificadora de
ADN de la célula huésped por
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como un iniciador y sintetiza un
ADN de doble cadena.
Procariotas
• Las transcriptasa inversas
también se encuentran en las
bacterias Retron se utilizan en la
síntesis de msDNA.
Esquematización de la transcripción inversa
Proceso de transcripción
inversa en el virus de clase VI
1. Un tRNA específico celular actúa como un primer y se mezcla en una parte
complementaria del genoma del virus (sitio de unión del primer o PBS).
2. ADN complementario se une a la región no codificante y la región R (una
repetición directa que se encuentra en ambos extremos de la molécula de ARN
viral).
3. Un dominio de la enzima transcriptasa inversa llamada RNAsa H degrada el
extremo 5 'del ARN que elimina la región no codificante y la región R.
4. El primer salta al extremo 3' del genoma viral y las hebras de ADN recién
sintetizado hibrida con la región R complementarias en el ARN.
5. La primera hebra de ADN complementario es extendida y la mayoría de ARN
viral es degradado por la RNasa H.
6. Una vez que la cadena se completa, la síntesis de la segunda hebra se inicia
desde el ARN viral.
7. Hay otra 'salto' en el PBS de la segunda cadena se mezcla con el PBS
complementario de la primera hebra.
8. Ambas corrientes se extienden más allá y pueden incorporarse al genoma del
huésped gracias a la enzima integrasa.
Bibliografía
1. Blog de biología, ARN polimerasa, consultado el 10 de abril del 2017 de: https://www.blogdebiologia.com/arn-polimerasa.html
2. Khanacademy, Etapas de la transcripción, consultado el 10 de abril del 2017 de:
https://es.khanacademy.org/science/biology/gene-expression-central-dogma/transcription-of-dna-into-rna/a/stages-of-
transcription
3. La guía de biología (2016), ARN polimerasa, consultado el 12 de abril del 2017 de:
http://biologia.laguia2000.com/citologia/arn-polimerasa
4. Departamento de bioquímica y biología molecular de la universidad de Alcalá, La RNA Polimerasa en Procariotas, consultado el
13 de abril del 2017 de: http://www3.uah.es/biomolq/BM/Esquemas/Tema10.htm
5. Departamento de bioquímica y biología molecular de la universidad de Alcalá, Las RNA polimerasas en Eucariotas, consultado
el 13 de abril del 2017 de: http://www3.uah.es/biomolq/BM/Esquemas/Tema12.htm
6. Feduchi, Blasco, Romero, Yánez. 2010. Bioquímica. Conceptos esenciales. Editorial Médica Panamericana.
7. Servei de Recursos Audiovisuals de Microbiologia. Clasificacion del geneoma viral, consultado el 15 de abril del 2017 de:
http://seramix.blogs.uv.es/2013/02/28/david-baltimore-creando-orden-en-el-caos/
8. Transcripción del dna y modificaciones postranscripcionales , consultado el 16 de abril del 2017 de:
http://fbio.uh.cu/sites/genmol/confs/conf2/p03.htm
9. Jeremy Mark Berg,Lubert Stryer,John L. Tymoczko Bioquímica Capitulo 4 DNA y RNA y el flujo de la información genética
10. https://www.dspace.espol.edu.ec/bitstream/123456789/6545/3/TRANSCRIPCION%20ADN.pdf
11. https://adn-bio-wiki.wikispaces.com/file/view/TRANSCRIPCION.pdf

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Transcripcion

  • 1. Bioquímica genética TRANSCRIPCIÓN Pérez Martínez Marlene Rubí. BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Licenciatura en químico Farmacobiólogo Departamento de alimentos BIOQUIMICA II
  • 2. Conceptos necesarios • Intrón: secuencias no codificadoras de ADN que son separadas por los exones. • Exón: secuencias codificadoras de DNA en genes • Operón: un grupo de genes cuya expresión ésta controlada por un único operador. • Promotor: una región del DNA a la que puede unirse la RNA polimerasa para comenzar la transcripción.
  • 3. La transcripción del DNA es un mecanismo fundamental para el control celular y para la expresión de la información genética. Este mecanismo permite que la información del DNA llegue al resto de orgánulos celulares y salga del núcleo en el caso de los eucariotas. Para ello esa información debe copiarse en forma de RNA.
  • 4. La transcripción es… el proceso mediante el cual una secuencia de nucleótidos de DNA es utilizada como molde para la síntesis de una molécula de RNA
  • 5. La ARN polimerasa empareja A,C,G y T del ADN con A,C,G y U de la cadena de ARN que va creciendo. Así la secuencia de bases del ARN es complementaria a la secuencia de la cadena codificadora e igual a la secuencia de la cadena estabilizadora del ADN, cambiando T por U. La transcripción es asimétrica: solamente se trascribe para cada gen una de las dos cadenas del ADN. La cadena trascrita se llama codificadora, y la cadena de ADN que no se transcribe se denomina estabilizadora
  • 6. Elementos que intervienen Para que se lleve a cabo la transcripción del DNA en las células se requieren los siguientes elementos: • DNA original que servirá de molde para ser copiado • RNA-polimerasa que sintetiza el RNA a partir del molde del DNA • Ribonucleótidos trifosfato para llevar a cabo la copia • Poli-A polimerasa, ribonucleoproteína pequeña nuclear, RNA-ligasa
  • 7. RNA polimerasa DNA dirigida En procariontes existe un solo tipo de ARN polimerasa, constituida por las subunidades proteicas α, β, β’ y σ. Cada subunidad cumple una función específica 70 kDa, Interacciona con secuencias del promotor para determinar el sitio de inicio de la transcripción 37 kDa, Regula la frecuencia de iniciación 156 kDa y 151 kDa respectivamente, son las Subunidades catalíticas Aproximadamente 3.000 moléculas por célula y 1.500 transcribiendo, las otras 1.500 asociadas débilmente al DNA, moviéndose al azar hasta encontrar una secuencia promotora
  • 8. RNA polimerasas En eucariontes, el sistema es más complejo. Existen tres tipos de ARN polimerasa, específicas para los distintos tipos de ARN que se sintetizan Las RNA polimerasas de mitocondrias y cloroplastos de menor tamaño y se asemejan a la bacteriana • Las 3 ARN pol son similares a las subunidades β de la ARN pol procariota • 5 subunidades son comunes Están conformadas por 8 a 14 cadenas polipeptídicas. Estas enzimas son proteínas aparecen como agregados de 500 kDa. La unión de RNA polimerasas a los moldes de DNA es eucariotas depende de numerosas proteínas que modulan el reconocimiento de los promotores y el inicio de la transcripción
  • 9. RNA polimerasa I • Se localiza en el nucléolo • Transcribe los principales genes de RNA ribosómico (un solo transcrito, el RNAr 45s, precursor del RNAr 18s, 28s, y 5.8s). • Contiene 13 subunidades • Necesita al menos 2 factores de transcripción para iniciar el proceso. • UBF1 es un polipéptido que se une a una región rica en G-C tanto en el núcleo del promotor como en UCE. • SL1 está formada por 4 proteínas, una de estas es la TBP (binding protein), esta proteína se une a la secuencia TATA.
  • 10. RNA polimerasas II • Se encuentra en el nucleoplasma y sintetiza el RNAhn (RNA heterogéneo nuclear), el precursor del RNAm, también sintetiza algunos RNAsn. • Transcribe genes estructurales (los que se traducen a proteínas) • ESTRUCTURA: Contiene entre 8 y 12 subunidades. Dos grandes subunidades de 240 kD = RPB1 (β) y 140 Kd = RPB2 (β´). • Utiliza al menos 7 factores de transcripción: TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF, TFIIH y TFIIJ. • Los promotores de la RNApol lI se localizan en el extremo 5’ del centro de iniciación de la transcripción
  • 11. Factores de transcripción de RNA pol II
  • 12. RNA polimerasa III • Se encuentra en el nucleoplasma del núcleo. • Transcribe los principales genes de RNA de transferencia, RNA ribosomal 5s y RNA pequeños nucleares (RNAsn). • Contiene 14 subunidades. • Utiliza los factores transcripcionales: • TFIIA: proteína con motivos de dedos de cinc. • TFIIB: complejo formado por 3 proteínas, una TBP y dos proteínas más. • TFIIC: complejo proteínico de mas de 500 kDa
  • 13. El proceso de transcripción se divide en 3 etapas. . . • Iniciación • Alargamiento • Terminación
  • 15. Iniciación de la transcripción Para que se inicie la transcripción, el factor ∂ debe estar unido al núcleo central de la ARN polimerasa, porque es el responsable de la enzima reconozca al promotor y se una a el. A continuación comienza a separar las dos cadenas de ADN y comienza la transcripción La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias, que suelen estar cerca de las promotoras y pueden ser estimuladoras o atenuadoras TATA No requiere extremo cebador y por lo tanto el nucleótido inicial mantiene sus tres grupos fosfatos
  • 16. Elongación La región del ADN que se está transcribiendo se va desenrollando Una vez iniciada las transcripción, el factor sigma se suelta El núcleo central de la ARN polimerasa comienza a sintetizar ARN en el sentido 5´ 3´ a partir de los ribonucleótidos trifosfato libres
  • 17. Terminación de la transcripción El factor proteico rho (ρ), que reconoce una secuencia específica del ARN y se une a ella para tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa Unas secuencias terminadoras que por autoapareamiento forman un lazo en el ARN, que es una señal para que el ARN polimerasa se separe del ADN y termine la transcripción
  • 18. Transcripción en eucariotas • Ocurre en el núcleo y no esta acoplada a la traducción • Requiere de la remodelación de la cromatina • En la regulación intervienen secuencias y silenciadoras aparte de las promotoras. • Todas las ARN pol eucariotas necesitan Factores de transcripción basales (TF) para reconocer los promotores e iniciar la transcripción. Los factores de transcripción se unen a secuencias del ADN y modulan la fijación de la ARNpol al promotor. • El uso de promotores alternativos permite regular la expresión génica
  • 19. Iniciación de la transcripción Un complejo de ARN polimerasa con varios factores de transcripción se unen al promotor Cada tipo de ARN reconoce secuencias especificas de promotores Mas complejos que los procarioticos Diferentes juegos de FTs son usados para cada tipo de ARNpol El control de la iniciación es un proceso mucho más regulado en eucariotas, ya que los genes están muy distanciados y existen muchos tramos de ADN con elementos reguladores
  • 20. Elongación Es importante resaltar, sin embargo, que las histonas del octámero del nucleosoma nunca se llegan a disociar del ADN que se está transcribiendo. Una vez que la transcripción ha comenzado, algunos de los FTs permanecen en el promotor y otros en la ARNpol y los restantes son separados de la ARNpol el complejo de iniciación de la transcripción, que quedará unido al promotor si una nueva enzima lo vuelve a reconocer comenzará la síntesis sin necesidad de haber reclutado a todos los factores de iniciación.
  • 21. Terminación de la transcripción Este proceso es poco preciso en los organismos eucariotas, ya que no hay señales de terminación exactas o consenso tal y como ocurre en procariotas. La ARN polimerasa sigue la transcripción del gen incluso en la secuencia no codificante de la porción 3' Posteriormente el ARN ya separado de la cadena de ADN será procesado por otras enzimas que modifican el extremo 3'.
  • 22. El DNA se transcribe en tramos muy largos que pueden contener uno o varios genes Monocistrónico Solo tiene un codón de inicio AUG, que es reconocido por los ribosomas para iniciar la traducción, por lo que solo da lugar a una proteína. Habitual en eucariotas. Policistrónico Tiene varios codones de inicio AUG, por lo que da lugar a varias proteínas. Se dice que lleva información de varios genes. Habitual en procariotas
  • 24. Diferencias entre la transcripción procariota y eucariota Procariota Eucariota
  • 26. Fármacos Inhibidores de la transcripción Actinomicina Transcripción Rifamicinas Estreptolidigina Tetraciclina Doxorrubicina Rifabutina Fluoroquinolonas Cloranfenicol Sulfonamida
  • 27. Transcripción inversa Algunos virus poseen RNA como molécula responsable de su información genética y para asegurar sus permanencia realizan la transcripción inversa Síntesis del ADN a partir del ARN
  • 28. transcriptasa inversa • Enzima de tipo ADN-polimerasa • Tiene como función sintetizar ADN de doble cadena utilizando como molde ARN monocatenario • Utilizada por los virus en la transcripción inversa • El proceso de transcripción inversa es muy propenso a errores y es durante este paso que las mutaciones pueden ocurrir • Algunos virus las traen consigo
  • 29. Eucariotas • La polimerasa codificadora de ADN de la célula huésped por error confunde al ARN del virus como un iniciador y sintetiza un ADN de doble cadena. Procariotas • Las transcriptasa inversas también se encuentran en las bacterias Retron se utilizan en la síntesis de msDNA.
  • 30. Esquematización de la transcripción inversa
  • 31. Proceso de transcripción inversa en el virus de clase VI 1. Un tRNA específico celular actúa como un primer y se mezcla en una parte complementaria del genoma del virus (sitio de unión del primer o PBS). 2. ADN complementario se une a la región no codificante y la región R (una repetición directa que se encuentra en ambos extremos de la molécula de ARN viral). 3. Un dominio de la enzima transcriptasa inversa llamada RNAsa H degrada el extremo 5 'del ARN que elimina la región no codificante y la región R. 4. El primer salta al extremo 3' del genoma viral y las hebras de ADN recién sintetizado hibrida con la región R complementarias en el ARN. 5. La primera hebra de ADN complementario es extendida y la mayoría de ARN viral es degradado por la RNasa H. 6. Una vez que la cadena se completa, la síntesis de la segunda hebra se inicia desde el ARN viral. 7. Hay otra 'salto' en el PBS de la segunda cadena se mezcla con el PBS complementario de la primera hebra. 8. Ambas corrientes se extienden más allá y pueden incorporarse al genoma del huésped gracias a la enzima integrasa.
  • 32. Bibliografía 1. Blog de biología, ARN polimerasa, consultado el 10 de abril del 2017 de: https://www.blogdebiologia.com/arn-polimerasa.html 2. Khanacademy, Etapas de la transcripción, consultado el 10 de abril del 2017 de: https://es.khanacademy.org/science/biology/gene-expression-central-dogma/transcription-of-dna-into-rna/a/stages-of- transcription 3. La guía de biología (2016), ARN polimerasa, consultado el 12 de abril del 2017 de: http://biologia.laguia2000.com/citologia/arn-polimerasa 4. Departamento de bioquímica y biología molecular de la universidad de Alcalá, La RNA Polimerasa en Procariotas, consultado el 13 de abril del 2017 de: http://www3.uah.es/biomolq/BM/Esquemas/Tema10.htm 5. Departamento de bioquímica y biología molecular de la universidad de Alcalá, Las RNA polimerasas en Eucariotas, consultado el 13 de abril del 2017 de: http://www3.uah.es/biomolq/BM/Esquemas/Tema12.htm 6. Feduchi, Blasco, Romero, Yánez. 2010. Bioquímica. Conceptos esenciales. Editorial Médica Panamericana. 7. Servei de Recursos Audiovisuals de Microbiologia. Clasificacion del geneoma viral, consultado el 15 de abril del 2017 de: http://seramix.blogs.uv.es/2013/02/28/david-baltimore-creando-orden-en-el-caos/ 8. Transcripción del dna y modificaciones postranscripcionales , consultado el 16 de abril del 2017 de: http://fbio.uh.cu/sites/genmol/confs/conf2/p03.htm 9. Jeremy Mark Berg,Lubert Stryer,John L. Tymoczko Bioquímica Capitulo 4 DNA y RNA y el flujo de la información genética 10. https://www.dspace.espol.edu.ec/bitstream/123456789/6545/3/TRANSCRIPCION%20ADN.pdf 11. https://adn-bio-wiki.wikispaces.com/file/view/TRANSCRIPCION.pdf