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Universidad Central del Ecuador
     Facultad de Medicina
      Biología Molecular
El ARN mensajero obtenido
   después de la transcripción se
conoce como transcrito primario
 o ARN precursor (pre-ARN), que
  en la mayoría de los casos no se
       libera del complejo de
transcripción en forma totalmente
    activa, sino que ha de sufrir
modificaciones antes de ejercer su
    función (procesamiento o
       maduración del ARN).
Maduración
Procariotas: Si el ARN formado es ARNm, no
hay maduración; si se trata de ARNr o ARNt,
hay un transcrito primario que sufre un
proceso de 'cortes y empalmes.

Eucariotas: Maduración se produce en el
núcleo y la hace un enzima llamada RNPpn,
que elimina los nuevos intrones (I) formados.
Comienza a modificarse poco            Se trata de una modificación covalente
 después de la trascripción                que implica 3 tipos de enzimas




   Esta modificación conduce a la
    incorporación singular de un                Las enzimas son la fosfatasa,
nucleótido protector sobre el NPT en           guanililtranferasa, y la metilasa
  la posición 5’ terminal del ARN




                        Este nucleótido es
                      normalmente purínico,
                        ATP, el mismo que
                       actuó como cebador
                        en la transcripción
Se da en 2 fases
a) Una desfosforilación previa
b) guanililación a costa del GTP
El conjunto de estas 2 reacciones es la
  En la segunda reacción se
                                         incorporación al ARNm de tan solo un
transfiere un grupo guanililo
                                                 residuo de guanosina




                                                     La estructura terminal
Esta caperuza tiene una estructura                 resultante se conoce como
singular que no se la encuentra en                   caperuza de guanina o
      ningún otro nucleótido                               caperuza 5’




Además ejerce un efecto protector de la molécula frente a las
   exonucleasas, marca el pre ARNm para su empleo como
 sustrato en otras reacciones de procesamiento del núcleo y
  sirve como punto de union del ARNm a los ribosomas al
                  iniciar la síntesis proteica
Los 3 primeros nucleótidos de la            Estas enzimas emplean el S- adenosil – L
  5’ son modificados por las                 - metionina como coenzima donadora
        metiltranferasas                               del grupo metilo




                                                          La estructura terminal
        Esta metilacion puede tener                     resultante se conoce como
       lugar sobre varias posiciones                      caperuza de guanina o
                                                                caperuza 5’




  En el n7 de la guanosina         En el 2’- OH de la ribosa    En el 2’ OH de la ribosa
  terminal para formar la             adyacente forma la           siguiente reacción
  caperuza 0, la reacción          caperuza 1 la reacción       forma la caperuza 2 la
    la cataliza la ARNm              la cataliza la ARNm           cataliza la ARNm
       (guanina – N7-                   (nucleosido -2’-            (nucleosido -2’-
      )metiltranferasa                O)metiltranferasa            O)metiltranferasa
0 Otra peculiaridad del ARNm eucariotico es que el
 extremo 3’ del ARNm no corresponde a la posición
 donde se termina la transcripción si no que deriva de
 la molécula de pre – ARNm o hetero ARN
Sobre el extremo 3’-OH
    resultante del corte por              Como consecuencia de esto se añade al
 endonucleasa actúa una ARN                ARN un gran número de residuos de
polimerasa especial que no usa               adelinato formando la cola de
molde y acepta como sustrato                  poliadenilato o cola poli (A)
      solo al ATP POLI (A)
         POLIMERASA




   Participa en procesos como en el               Esta estructura que permanece
transporte del ARNm al citoplasma y               intacta hasta la formación final
la determinación y la estabilidad de la                       del ARN
         vida media del ARNm
Poliadenilación
Poliadenilación del extremo 3’
 • Sobre el extremo 3’ OH del       • Esta estructura permanece
   corte por la endonucleasa
   actúa, poli (A) polimerasa,        intacta hasta la formación
   que no usa molde y usa como        final de ARNm
   sustrato al ATP.
 • Como consecuencia, se añade
                                    • Puede      participar   en
   al ARNm un gran número de          procesos de tan gran
   residuos de adenilato (AMP),       significado     como     el
   tomando una “cola” de
   poliadenilato o poli (A), de       transporte de ARNm al
   longitud típica entre 40 y 250     citoplasma        y      la
   nt (como excepción los ARNm        determinación, en parte,
   de histonas carecen de esta
   cola).                             de la estabilidad y vida
                                      media del ARNm
SITIOS DE POLIADENILACIÓN
         ALTERNATIVA
0 Puede ocurrir algo similar     0 Dependiendo del sitio 3’
  a la ocurrencia de sitios       poliadenilado, la
  alternativos de inicio de la
  transcripción pero en el        proteína resultante
  extremo 3’.                     puede anclarse a
0 En este caso hallándose         membrana o ser
  sobre un mismo gen varios       secretada, de acuerdo al
  sitios susceptibles de ser      estadío de desarrollo en
  poliadenilados como es el       que se encuentra la
  caso del gen para la cadena
  pesada m de                     célula.
  inmunoglobulina.
Eliminación de intrones y empalme de
               exones
             (SPLICING)
• La etapa inicial de la maduración postranscripcional
  del transcrito primario hasta dar el ARNm eucariótico
  consiste en la eliminación de los intrones y la unión o
  empalme de los exones.
• En el núcleo de las células eucariotas existen
  partículas ribonucleoproteicas, los espliceosomas,
  formados por ARN pequeño nuclear (ARNsn =”small
  nuclear”) y proteínas, cuyas moléculas de ARN
  catalizan el corte de intrones y el empalme de exones.
Magnitud de los intrones
• Lo mas frecuente es que la longitud total de los
  intrones supere ampliamente a la suma de los exones,
  por lo que el tamaño del gen depende fuertemente del
  número y longitud de sus intrones.
• Aunque las cifras son variables, se habla de hasta 40
  intrones por gen y de una longitud de hasta 20 kb por
  intron. Los exones son de tamaño mucho más
  pequeño, típicamente inferior a 1 kb.
Secuencias que delimitan el
          intrón
• La eliminación de un intrón está determinada por su
  secuencia, y no por su tamaño.
• Solo intervienen 2 secuencias específicas, que definen
  los extremos del intrón, y otra de su interior,
  conocidas en su conjunto como sitios o centros de
  corte y empalme o de splicing.
• Todos los sitios de corte y empalme parecen ser
  equivalentes, mientras que la secuencia del resto del
  intrón no tiene trascendencia sobre el proceso.
SPLICING ALTERNATIVO
                           0 Puede ocurrir que uno más
0 Es un mecanismo muy        exones sean removidos (dando
 difundido, que permite      una proteína más corta), o que
                             uno o más intrones no sean
 que un solo gen pueda       removidos (dando una
 codificar para más de       proteína más larga).
                           0 Una familia de 6 proteínas
 una proteína.               llamadas ASF (factores de
0 Los cortes sobre el        splicing alternativo)
                             responsables de reconocer y
 RNAhn deben                 seleccionar los lugares para los
                             cortes alternativos, contienen
 producirse con absoluta     serina y arginina por lo que se
 precisión                   las llama también proteinas
                             SR.
Secuencias que delimitan el
          intrón
• Un cambio en el sitio de corte (por ejemplo, por
  mutación de uno de los nucleótidos consenso
  esenciales) daría lugar a un ajuste erróneo: se
  utilizaría para el corte y empalme la siguiente
  secuencia consenso, si la hubiera, con lo que el intrón
  o parte de él quedaría incluido en el ARNm.
• Esto conduciría a la síntesis de un polipéptido
  alterado, con una inserción grande en su secuencia de
  aminoácidos, o incluso con cambio de tosa la
  secuencia a partir del punto de alteración debido a un
  desplazamiento del marco de lectura.
0 Posteriormente las ARN ligasas empalman los exones
 (E) y forman el ARNm
Maduración ARNr y ARNt
         PROCARIOTAS


                               -3 RNAr
Transcrito   Reacciones de                   1.Adición de    2.Modificación
 primario    corte (RNAsas)   -1 o varios   grupos metilos   de nucleótidos.
                                 RNAt
Silenciado
 de genes
 asociado
  al ARN     Post-
             Transcripción
Vías de silenciado asociado al ARN
     Interfiere un elemento básico (ARN de
     interferecnia que es un ARN báscio de unos
     21-27 nucleótidos:


     Se distinguen:



     Los micro ARNs (miRNAs)


     Los RNA interferentes pequeños
     (siRNAs)


     Los RNA interferentes asociados a
     repeticiones (rasiRNAs)
Micro RNAs (miRNAs)
0 Son transcitos por la RNA Polimerasa II como mirARNas
 primarios (pri-mirARNas).
Micro RNAs humanos
miRNAs y siRNAs
Vías en las que interviene el ARNi en el
                 núcleo:
  Metilación del
 ADN dirigida por
      ARN.


  Formación de
 heterocromatina
   dirigina por
      ARNi.



  Eliminación de
       ADN.



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 ADN no apareado
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Mecanismos de regulación post transcripcional

  • 1. Universidad Central del Ecuador Facultad de Medicina Biología Molecular
  • 2. El ARN mensajero obtenido después de la transcripción se conoce como transcrito primario o ARN precursor (pre-ARN), que en la mayoría de los casos no se libera del complejo de transcripción en forma totalmente activa, sino que ha de sufrir modificaciones antes de ejercer su función (procesamiento o maduración del ARN).
  • 3. Maduración Procariotas: Si el ARN formado es ARNm, no hay maduración; si se trata de ARNr o ARNt, hay un transcrito primario que sufre un proceso de 'cortes y empalmes. Eucariotas: Maduración se produce en el núcleo y la hace un enzima llamada RNPpn, que elimina los nuevos intrones (I) formados.
  • 4.
  • 5.
  • 6. Comienza a modificarse poco Se trata de una modificación covalente después de la trascripción que implica 3 tipos de enzimas Esta modificación conduce a la incorporación singular de un Las enzimas son la fosfatasa, nucleótido protector sobre el NPT en guanililtranferasa, y la metilasa la posición 5’ terminal del ARN Este nucleótido es normalmente purínico, ATP, el mismo que actuó como cebador en la transcripción
  • 7.
  • 8. Se da en 2 fases a) Una desfosforilación previa b) guanililación a costa del GTP
  • 9. El conjunto de estas 2 reacciones es la En la segunda reacción se incorporación al ARNm de tan solo un transfiere un grupo guanililo residuo de guanosina La estructura terminal Esta caperuza tiene una estructura resultante se conoce como singular que no se la encuentra en caperuza de guanina o ningún otro nucleótido caperuza 5’ Además ejerce un efecto protector de la molécula frente a las exonucleasas, marca el pre ARNm para su empleo como sustrato en otras reacciones de procesamiento del núcleo y sirve como punto de union del ARNm a los ribosomas al iniciar la síntesis proteica
  • 10.
  • 11. Los 3 primeros nucleótidos de la Estas enzimas emplean el S- adenosil – L 5’ son modificados por las - metionina como coenzima donadora metiltranferasas del grupo metilo La estructura terminal Esta metilacion puede tener resultante se conoce como lugar sobre varias posiciones caperuza de guanina o caperuza 5’ En el n7 de la guanosina En el 2’- OH de la ribosa En el 2’ OH de la ribosa terminal para formar la adyacente forma la siguiente reacción caperuza 0, la reacción caperuza 1 la reacción forma la caperuza 2 la la cataliza la ARNm la cataliza la ARNm cataliza la ARNm (guanina – N7- (nucleosido -2’- (nucleosido -2’- )metiltranferasa O)metiltranferasa O)metiltranferasa
  • 12.
  • 13.
  • 14. 0 Otra peculiaridad del ARNm eucariotico es que el extremo 3’ del ARNm no corresponde a la posición donde se termina la transcripción si no que deriva de la molécula de pre – ARNm o hetero ARN
  • 15.
  • 16.
  • 17. Sobre el extremo 3’-OH resultante del corte por Como consecuencia de esto se añade al endonucleasa actúa una ARN ARN un gran número de residuos de polimerasa especial que no usa adelinato formando la cola de molde y acepta como sustrato poliadenilato o cola poli (A) solo al ATP POLI (A) POLIMERASA Participa en procesos como en el Esta estructura que permanece transporte del ARNm al citoplasma y intacta hasta la formación final la determinación y la estabilidad de la del ARN vida media del ARNm
  • 19. Poliadenilación del extremo 3’ • Sobre el extremo 3’ OH del • Esta estructura permanece corte por la endonucleasa actúa, poli (A) polimerasa, intacta hasta la formación que no usa molde y usa como final de ARNm sustrato al ATP. • Como consecuencia, se añade • Puede participar en al ARNm un gran número de procesos de tan gran residuos de adenilato (AMP), significado como el tomando una “cola” de poliadenilato o poli (A), de transporte de ARNm al longitud típica entre 40 y 250 citoplasma y la nt (como excepción los ARNm determinación, en parte, de histonas carecen de esta cola). de la estabilidad y vida media del ARNm
  • 20. SITIOS DE POLIADENILACIÓN ALTERNATIVA 0 Puede ocurrir algo similar 0 Dependiendo del sitio 3’ a la ocurrencia de sitios poliadenilado, la alternativos de inicio de la transcripción pero en el proteína resultante extremo 3’. puede anclarse a 0 En este caso hallándose membrana o ser sobre un mismo gen varios secretada, de acuerdo al sitios susceptibles de ser estadío de desarrollo en poliadenilados como es el que se encuentra la caso del gen para la cadena pesada m de célula. inmunoglobulina.
  • 21. Eliminación de intrones y empalme de exones (SPLICING)
  • 22. • La etapa inicial de la maduración postranscripcional del transcrito primario hasta dar el ARNm eucariótico consiste en la eliminación de los intrones y la unión o empalme de los exones. • En el núcleo de las células eucariotas existen partículas ribonucleoproteicas, los espliceosomas, formados por ARN pequeño nuclear (ARNsn =”small nuclear”) y proteínas, cuyas moléculas de ARN catalizan el corte de intrones y el empalme de exones.
  • 23. Magnitud de los intrones • Lo mas frecuente es que la longitud total de los intrones supere ampliamente a la suma de los exones, por lo que el tamaño del gen depende fuertemente del número y longitud de sus intrones. • Aunque las cifras son variables, se habla de hasta 40 intrones por gen y de una longitud de hasta 20 kb por intron. Los exones son de tamaño mucho más pequeño, típicamente inferior a 1 kb.
  • 24. Secuencias que delimitan el intrón • La eliminación de un intrón está determinada por su secuencia, y no por su tamaño. • Solo intervienen 2 secuencias específicas, que definen los extremos del intrón, y otra de su interior, conocidas en su conjunto como sitios o centros de corte y empalme o de splicing. • Todos los sitios de corte y empalme parecen ser equivalentes, mientras que la secuencia del resto del intrón no tiene trascendencia sobre el proceso.
  • 25. SPLICING ALTERNATIVO 0 Puede ocurrir que uno más 0 Es un mecanismo muy exones sean removidos (dando difundido, que permite una proteína más corta), o que uno o más intrones no sean que un solo gen pueda removidos (dando una codificar para más de proteína más larga). 0 Una familia de 6 proteínas una proteína. llamadas ASF (factores de 0 Los cortes sobre el splicing alternativo) responsables de reconocer y RNAhn deben seleccionar los lugares para los cortes alternativos, contienen producirse con absoluta serina y arginina por lo que se precisión las llama también proteinas SR.
  • 26. Secuencias que delimitan el intrón • Un cambio en el sitio de corte (por ejemplo, por mutación de uno de los nucleótidos consenso esenciales) daría lugar a un ajuste erróneo: se utilizaría para el corte y empalme la siguiente secuencia consenso, si la hubiera, con lo que el intrón o parte de él quedaría incluido en el ARNm. • Esto conduciría a la síntesis de un polipéptido alterado, con una inserción grande en su secuencia de aminoácidos, o incluso con cambio de tosa la secuencia a partir del punto de alteración debido a un desplazamiento del marco de lectura.
  • 27. 0 Posteriormente las ARN ligasas empalman los exones (E) y forman el ARNm
  • 28. Maduración ARNr y ARNt PROCARIOTAS -3 RNAr Transcrito Reacciones de 1.Adición de 2.Modificación primario corte (RNAsas) -1 o varios grupos metilos de nucleótidos. RNAt
  • 29. Silenciado de genes asociado al ARN Post- Transcripción
  • 30. Vías de silenciado asociado al ARN Interfiere un elemento básico (ARN de interferecnia que es un ARN báscio de unos 21-27 nucleótidos: Se distinguen: Los micro ARNs (miRNAs) Los RNA interferentes pequeños (siRNAs) Los RNA interferentes asociados a repeticiones (rasiRNAs)
  • 31. Micro RNAs (miRNAs) 0 Son transcitos por la RNA Polimerasa II como mirARNas primarios (pri-mirARNas).
  • 34. Vías en las que interviene el ARNi en el núcleo: Metilación del ADN dirigida por ARN. Formación de heterocromatina dirigina por ARNi. Eliminación de ADN. Silenciado del ADN no apareado durante la meiosis.