MICROPROPAGACIÓN

1. PROPAGACIÓN ASEXUAL
2ª PARTE:
MICROPROPAGACIÓN
PROF.: DIEGO C. CUELLO
MÓDULO 2022
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUCUMÁN
FACULTAD DE AGRONOMÍA Y ZOOTECNIA

2. • PROPAGACIÓN ASEXUAL 2A PARTE
• MICROPROPAGACIÓN: DEFINICIÓN. BASES FISIOLÓGICAS.
INSTALACIONES UTILIZADAS. EQUIPAMIENTO.
DIFERENTES MEDIOS. PREPARACIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO. ELECCIÓN Y DESINFECCIÓN DEL EXPLANTE.
SIEMBRA EN CÁMARA DE FLUJO LAMINAR. CRECIMIENTO.
ACLIMATACIÓN. EJEMPLOS DE INTERÉS AGRONÓMICO.
RECONOCIMIENTO DE MATERIAL E INSTALACIONES-DE
LABORATORIO DE CULTIVOS VEGETALES.

3. APLICACIONES

4. UTILIZACIÓN DE ORGANISMOS VIVOS (MICROORGANISMOS, ANIMALES, PLANTAS) O
SUS DERIVADOS (CÉLULAS, TEJIDOS, PRODUCTOS BIOLÓGICOS, ETC.) PARA OBTENER O
MEJORAR BIENES (POR EJEMPLO MEDICAMENTOS, VACUNAS, ALIMENTOS) Y/O SERVICIOS
(DIAGNÓSTICO, TRATAMIENTO DE RESIDUOS, CONTROL DE CONTAMINACIÓN, ETC.) ÚTILES PARA
EL HOMBRE.
BIOTECNOLOGÍA
RAMA INTERDISCIPLINARIA DE LAS CIENCIAS BIOLÓGICAS

5. APLICACIONES:
1) ESTUDIOS BÁSICOS DE FISIOLOGÍA, GENÉTICA, BIOQUÍMICA, ÉTC.
2) BIOCONVERSIÓN Y PRODUCCIÓN DE COMPUESTOS ÚTILES
3) INCREMENTO DE LA VARIABILIDAD GENÉTICA
4) OBTENCIÓN DE PLANTAS LIBRES DE PATÓGENOS
5) PROPAGACIÓN MASIVA DE PLANTAS
6) CONSERVASIÓN E INTERCAMBIO DE GERMOPLASMA

6. MICROPROPAGACIÓN
Es el conjunto de técnicas y métodos de cultivo
de tejidos utilizados para multiplicar plantas
asexualmente de forma rápida, eficiente y en
grandes cantidades.

7. 1902 – HABERLANDT. PRINCIPIO DE LA TOTIPOTENCIALIDAD CELULAR
“CUALQUIER CÉLULA VEGETAL LLEVA INTRÍNSECA LA POTENCIALIDAD DE
REPRODUCIR A PARTIR DE SÍ, UN INDIVIDUO IDÉNTICO A AQUEL QUE LE DIO
ORIGEN”
FUNDAMENTOS DEL CULTIVO DE TEJIDOS
En plantas incluso en células con alto grado de madurez y
diferenciación, retienen su capacidad para regresar a un estado
meristemático, siempre y cuando tengan un sistema de membranas
intacto y un núcleo viable. (Gautheret1966)

8. • DESDIFERENCIACIÓN / REDIFERENCIACIÓN: CONSISTE EN LA
TRANSFORMACIÓN Y PÉRDIDA DE LAS CARACTERÍSTICAS DE
ESPECIALIZACIÓN DE UN TIPO CELULAR PARA DAR LUGAR A
CÉLULAS DE TIPO MERISTEMÁTICO. LUEGO SIGUE LA
REDIFERENCIACIÓN EN NUEVOS TIPOS CELULARES.
• TODO PROCESO DE DIFERENCIACIÓN ESTÁ REGULADO POR EL
BALANCE ENTRE DIFERENTES TIPOS DE HORMONAS O
REGULADORES DEL CRECIMIENTO, FUNDAMENTALMENTE DE
AUXINAS Y CITOCININAS (SKOOG ET AL, 1957).

9. • ASEPSIA: (TERM. MÉDICA) CONDICIÓN EN LA QUE
ESTÁN AUSENTES MICROORGANISMOS PATÓGENOS.
• EN CTV, ASÉPTICO= ESTÉRIL
• ESTERILIZACION: PROCESOS MEDIANTE EL CUAL
CUALQUIER MATERIAL, SITIO O SUPERFICIE SE
LIBERA COMPLETAMENTE DE CUALQUIER
MICROORGANISMO VIVO O ESPORA.

10. EL EXPLANTE ES UN TEJIDO VIVO SEPARADO DE SU
ÓRGANO PROPIO Y TRANSFERIDO A UN MEDIO
ARTIFICIAL DE CRECIMIENTO.
• (SEMILLAS, EMBRIONES, DIF. ÓRGANOS, CÉLULAS Y
PROTOPLASTOS, ÓVULOS Y ANTERAS DE PLANTAS
SUPERIORES)

12. ETAPAS DE LA MICROPROPAGACIÓN
Fase 0) Pre-establecimiento o preparativa
Fase 3) Enraizamiento
Fase 2) Multiplicación de brotes
Fase 4) Aclimatación
Fase 0) Pre-establecimiento o
preparativa
Fase 1) Establecimiento del cultivo

13. Requisitos básicos para la obtención de cultivares confiables: Identidad
Genética, Vigor ,Sanidad, Nutrición y edad.
ETAPA 0: PREPARACIÓN
DE PLANTA DONANTE
• PARA PODER ESTABLECER EL CULTIVO EN CONDICIONES
DE ASEPSIA, SE DEBEN OBTENER EXPLANTES CON UN
NIVEL NUTRICIONAL Y UN GRADO DE DESARROLLO
ADECUADO.
• IMPORTANCIA DEL CUIDADO SANITARIO DE LAS PLANTAS
MADRES (SUSTRATO, HUMEDAD, LUZ, CONTROL
MICROORG.

15. ELECCIÓN DEL EXPLANTO
Se deben obtener explantes con un nivel nutricional y
un grado de desarrollo adecuado. Escogida la planta
madre o donante, se extraerán los fragmentos, los
cuales son desinfectados para luego obtener los
explantes.
El cultivo de meristemas es un método efectivo para la eliminación de infecciones
virales y es el material preferido para la conservación de germoplasma

16. ES LA COMBINACIÓN SÓLIDA O LÍQUIDA DE NUTRIENTES
Y AGUA. INCLUYE SALES INORGÁNICAS, CARBOHIDRATOS,
VITAMINAS Y AMINOÁCIDOS. SE LE DENOMINA MEDIO
BASAL Y PUEDE SER SUPLEMENTADO CON ALGÚN
REGULADOR DE CRECIMIENTO Y OCASIONALMENTE CON
OTRAS SUSTANCIAS, SEGÚN LAS NECESIDADES DE LA
ETAPA DE CULTIVO. AG, KINETINA, BAP, ANA, IBA ETC.
LOS NUTRIENTES SON ESENCIALES PARA EL
CRECIMIENTO Y DESARROLLO DE LA PLANTA: SIN AGUA Y
NUTRIENTES MINERALES UNA PLANTA NO PUEDE VIVIR.
MEDIOS DE CULTIVOS

19. ETAPA 1: ESTABLECIMIENTO DEL
CULTIVO
• EL OBJETIVO DE ESTA ETAPA ES ESTABLECER CULTIVOS VIABLES Y
AXÉNICOS.
• LAVADO DEL MATERIAL CON AGUA CORRIENTE, ELIMINACIÓN DE LAS
PARTES MUERTAS E INFECTADAS DE LA PLANTA.
• INTRODUCCIÓN DE LA PORCIÓN DE PLANTA EN ALCOHOL DILUIDO AL
70% DURANTE UNOS SEGUNDOS.
• SUMERGIR LA PLANTA EN UNA SOLUCIÓN DE HIPOCLORITO DE SODIO O
CA CON UN AGENTE HUMECTANTE DURANTE 10-30 MINUTOS.
• ENJUAGUE DEL MATERIAL CON AGUA ESTÉRIL PARA ELIMINAR LA
SOLUCIÓN DE HIPOCLORITO DE SODIO. EL ENJUAGUE DEBE TENER
LUGAR BAJO CONDICIONES DE ASEPSIA, Y SUELE REALIZARSE EN TRES
VECES SUCESIVAS DE UNOS 2 MINUTOS CADA UNA.

20. COMIENZA GENERALMENTE CON UNA INMERSIÓN O UNA
ASPERSIÓN CON ALCOHOL 70%, LUEGO CON UN LAVADO CON
DETERGENTE, UNA INMERSIÓN EN HIPOCLORITO DE SODIO
DEL 1 - 20 % PARA ELIMINAR ASÍ LOS PATÓGENOS
SUPERFICIALES. EL TRATAMIENTO CON EL HIPOCLORITO
PUEDE NECESITAR DE UNOS TREINTA MINUTOS DE
INMERSIÓN CON AGITACIÓN.
DESINFECCIÓN

21. Lavado del material con
detergentes y agua corriente

22. • Alcohol 70%
• Lavandina 1-20%
• Enjuague del material con agua estéril

25. RESPUESTA NO DESEADA DURANTE
EL PROCESO: CONTAMINACIÒN

26. SE PROCEDE A DESPEJAR EL EXPLANTE DE ALGUNAS CAPAS DE
HOJAS, PRIMORDIOS U OTRAS CAPAS QUE LO RODEAN. FINALMENTE
SE LAVAN CON AGUA DESTILADA ESTÉRIL, SE SIEMBRA EN EL MEDIO
DE CULTIVO Y SE COLOCA EN CÀMARA DE INCUBACIÓN.
SIEMBRA EN CÁMARA DE FLUJO

27. ETAPA 2: DESARROLLO Y MULTIPLICACIÓN
• EL OBJETIVO ES MANTENER Y AUMENTAR LA CANTIDAD
DE BROTES PARA LOS NUEVOS CICLOS DE
MULTIPLICACIÓN SUCESIVOS Y PODER DESTINAR PARTE
DE ELLOS A LA SIGUIENTE ETAPA DE PRODUCCIÓN
(ENRAIZAMIENTO, CONSERVACIÓN, ETC.)
• LA RESPUESTA DE LOS EXPLANTES CAMBIA CON EL
MEDIO DE CULTIVO, EL NÚMERO DE SUBCULTIVOS, EL
TIPO DE EXPLANTE Y EL MÉTODO DEL REPIQUE.
• POR ESTO MISMO, EL MEDIO DE CULTIVO DEBE
OPTIMIZARSE.

36. ETAPA 3: ENRAIZAMIENTO
• LOS BROTES OBTENIDOS CRECEN, CON EL BALANCE HORMONAL
Y NUTRICIONAL ADECUADO, HASTA FORMAR PLANTAS
COMPLETAS CON SU SISTEMA RADICULAR. LUEGO SERÀ VIABLE
EL TRASPLANTE A UN SUSTRATO EN CONDICIONES DE VIVERO O
INVERNÁCULO.

40. ETAPA 4: ACLIMATACIÓN DE LAS PLÁNTULAS
• DURANTE EL TRASPLANTE A INVERNÁCULO EL
PRINCIPAL PROBLEMA ESTÁ RELACIONADO CON LA
MUERTE POR DESECACIÓN Y POR ENFERMEDADES DE
LOS PLANTINES
• OPTIMIZAR LA TRANSFERENCIA DEL AMBIENTE IN
VITRO A CONDICIONES DE INVERNÁCULO O CAMPO.
• MINIMIZAR PÉRDIDAS Y ACELERAR EL PROCESO.

41. PLANTAS OBTENIDAS IN VITRO:
Hojas delgadas
Tallos débiles
Raíces débiles y poco funcionales
Conexión tallo-raíz incompleta
Baja tasa fotosintética
REQUIEREN PROCESO GRADUAL:
Disminución de la HR
Crecimiento autotrófico
Condiciones sépticas.

44. EXISTEN DIFERENTES TIPOS DE INSTALACIONES DE ACUERDO A
SU PROPÓSITO:
• INVESTIGACIÓN
• MULTIPLICACIÓN COMERCIAL A GRAN ESCALA (BIOFÁBRICAS)
• FINES COMERCIALES O DE INVESTIGACIÓN.
INSTALACIONES Y EQUIPAMIENTOS

46. • SE LIMPIAN OBJETOS DE VIDRIO
• SE PREPARAN Y ESTERILIZAN LOS MEDIOS DE CULTIVO
• SE ALMACENAN Y SUMINISTRAN LOS MATERIALES DE
VIDRIO.
• DEBERÍA CONTAR CON: REFRIGERADOR PARA
CONSERVACIÓN DE SUSTANCIAS QUÍMICAS EN ESPECIAL
HORMONAS O REGULADORES DE CRECIMIENTO,
VITAMINAS Y PEQUEÑAS CANTIDADES DE MEDIOS DE
CULTIVO. BALANZA ANALÍTICA. AUTOCLAVE.
PEACHÍMETRO. CALENTADORES DE GAS O ELÉCTRICOS.
DESTILADOR PARA PROVISIÓN DE AGUA.
AREA DE PREPARACIÓN

47. SE REALIZAN LAS OPERACIONES PARA LA SIEMBRA DE LOS
EXPLANTES EN LOS MEDIOS DE CULTIVO.
CÁMARA DE FLUJO LAMINAR: FILTRA EL AIRE HASTA
ELIMINAR SUS IMPUREZAS.
LUZ ULTRAVIOLETA : ESTERILIZACIÓN
AREA DE TRANSFERENCIA

48. • CON CONTROL LUMINOSO TANTO DE LA INTENSIDAD
(APROX. 1000 LUX DE LUZ FRÍA) COMO DE LA DURACIÓN
DEL FOTOPERIODO (GENERALMENTE DE 16 HORAS).
• CONTROL DE LA TEMPERATURA (25 °C).
• HUMEDAD AMBIENTE SUPERIOR AL 50%.
• TAMBIÉN SHAKER O AGITADORES PARA LA AIREACIÓN
DE LOS MEDIOS DURANTE EL CULTIVO EN MEDIOS
LÍQUIDOS.
• RITA
AREA DE CRECIMIENTO

49. AREA DE ACLIMATACIÓN
CONTROL DE:
• TEMPERATURA
• HUMEDAD
• IRRADIANCIA
• PRESENCIA DE PATÓGENOS

50. EJEMPLOS DE INTERÉS AGRONÓMICO
CAÑA DE AZÚCAR, PAPA, BANANERO, AJO,
BATATA, ORNAMENTLALES Y ORQUÍDEAS.
FORESTALES
HORTÍCOLAS

51. VENTAJAS QUE OFRECE EL CULTIVO IN VITRO
• ES UNO DE LOS MÉTODOS CONOCIDOS MÁS UTILIZADO
ACTUALMENTE PARA ERRADICAR PATÓGENOS.
• PROPAGACIÓN CLONAL MASIVA DE PLANTAS LIBRES DE
ENFERMEDADES EN CORTO TIEMPO.
• REDUCE LOS COSTOS DE LABORES AGRONÓMICAS EN EL
MANTENIMIENTO DE GERMOPLASMA.
• LOS MATERIALES PUEDEN SER PROPAGADOS EN
CUALQUIER ÉPOCA DEL AÑO.
• FACILITA EL INTERCAMBIO DE MATERIAL GENÉTICO.
• REDUCE EL RIESGO DE PÉRDIDAS GENÉTICAS AL EVITAR
LA MEZCLA DEL MATERIAL POR CRUZAMIENTO.