BIOMETANO SÍ, PERO NO ASÍ. LA NUEVA BURBUJA ENERGÉTICA
PRUEBAS DE LABORATORIO DE LIPIDOS.pptx
1. 7° “C”
Universidad Autónoma de Campeche
Facultad de Ciencias Químico Biológicas
LÍPIDOS
ABC 2
Docente: Baldemar Ake Canche
PRUEBAS DELABORATORIO DE
INTEGRANTES DEL EQUIPO:
- CAUICH CAUICH ÁNGEL FERNANDO
- HUCHIN CAN HELMER EDUARDO
3. MEDICIÓN LIPÍDICA
El perfil lipídico mide las concentraciones de distintos tipos
de grasas en sangre. El colesterol total, que es la suma de los
distintos tipos de colesterol. El cuerpo necesita algo de
colesterol. Pero un exceso de colesterol puede causar
problemas de salud.
La determinación se realiza a partir
de una muestra de sangre venosa
del brazo. En ocasiones, se puede
utilizar una muestra de sangre
obtenida por punción en el dedo
(sangre capilar).
4. MEDICIÓN DE COLESTEROL
El estudio diagnóstico de lípidos
suele comenzar con la medición
de colesterol sérico total. Las
lipoproteínas se cuantifican
también en general con base en
su contenido de colesterol. En los
primeros métodos analíticos se
empleaban ácidos fuertes (p. ej.,
ácido sulfúrico o acético) a veces
junto con otros compuestos
químicos (como anhídrido
acético o cloruro férrico) para
producir un color mensurable
con colesterol.
5. MEDICIÓN DE COLESTEROL
La enzima hidrolasa de éster de
colesterilo se emplea para romper el
residuo de ácido graso de ésteres de
colesterilo, que comprenden cerca de
dos tercios de colesterol circulante, y los
ésteres de colesterilo se convierten en
colesterol no esterificado o libre. El
colesterol libre se hace reaccionar
mediante la segunda enzima, oxidasa
de colesterol, y se produce peróxido de
hidrógeno, que es el sustrato para una
segunda reacción de color enzimática
con peroxidasa de rábano para acoplar
dos compuestos químicos incoloros en
un compuesto coloreado.
6. MEDICIÓN DE COLESTEROL
La intensidad del color resultante, proporcional a la cantidad de colesterol, se
puede medir mediante un espectrofotómetro, por lo general a una longitud de
onda alrededor de 500 nm. Las enzimas y reactivos han mejorado de modo que
se pueda esperar que los reactivos comerciales calibrados de manera apropiada
den resultados confiables.
7. MEDICIÓN DE TRIGLICÉRIDOS
La medición de triglicéridos
séricos junto con el colesterol
es útil para detectar ciertos
trastornos genéticos y otros
tipos de trastornos
metabólicos, así como para
caracterizar el riesgo de
desarrollar enfermedad
coronaria. El valor de
triglicérido se emplea
también por lo común en la
estimación de colesterol LDL
mediante la ecuación de
Friedewald.
8. MEDICIÓN DE TRIGLICÉRIDOS
Las secuencias
enzimáticas de reacción
de triglicéridos también
reaccionan con glicerol
libre endógeno, que está
universalmente presente
en el suero y constituye
una fuente importante
de interferencia.184185
En casi todas las
muestras, el glicerol libre
endógeno contribuye
con una sobrestimación
de triglicéridos de 10 a 20
mg/dl.
Cerca de 20% de las
muestras tendrán alto
contenido de glicerol,
con concentraciones
incrementadas en
ciertas condiciones
como diabetes y
hepatopatía o por
medicaciones basadas
en glicerol libre
endógeno, pero esta
práctica es poco
común en los
laboratorios clínicos.
9. MÉTODOS PARA LIPOPROTEÍNAS
Se han empleado varios métodos para la
separación y cuantificación de lipoproteínas
séricas, que aprovechan las propiedades
físicas como densidad, tamaño, carga y
contenido de apolipoproteínas. El intervalo
de densidad observado entre las clases de
lipoproteínas es una función del contenido
relativo de lípidos y permite el
fraccionamiento por ultracentrifugación.
Las separaciones electroforéticas
aprovechan las diferencias de carga y
tamaño. Los métodos de precipitación
químicos, que son más comunes en
laboratorios clínicos, dependen del tamaño
de partícula, carga y diferencias en el
contenido de apolipoproteína.
10. MÉTODOS PARA LIPOPROTEÍNAS
En el laboratorio de investigación se han empleado muchos métodos de
ultracentrifugación, pero ésta es poco común en el laboratorio clínico.189 El
método más común, llamado ultracentrifugación preparativa, emplea ajustes
de densidad sucesivos de suero para fraccionar las clases de lipoproteína
mayores y menores. Los métodos de gradiente de densidad, ya sea técnicas de
no equilibrio en las que las separaciones se basan en la tasa de flotación, o
técnicas de equilibrio en las que las lipoproteínas se separan con base en su
densidad, permiten el fraccionamiento de varias de las subclases en una sola
corrida.
11. MÉTODOS PARA HDL
La medición de colesterol HDL ha asumido cada vez más importancia en las
normas de tratamiento NCEP ATP III,liberadas en 2001. En las primeras normas,
el colesterol HDL se medía como factor de riesgo pero de otro modo no se
consideraba en las decisiones de tratamiento.
12. MÉTODOS PARA HDL
En el primer método de precipitación
común se empleaba heparina en
combinación con manganeso para
precipitar las lipoproteínas que
contenían apo B. Debido a que el
manganeso interfiere con los ensayos
enzimáticos, se elaboraron otros
reactivos.219 El fosfotungstato de sodio,
con magnesio se volvió común en el uso
rutinario pero, como resultado de su
sensibilidad a condiciones de reacción y
mayor variabilidad, fue reemplazado en
gran medida por sulfato de dextrano
(una heparina sintética) con magnesio.
14. El método de investigación más común para cuantificación de colesterol LDL y la
base para el método de referencia ha sido designado betacuantificación, donde
beta se refiere al término electroforético para LDL. La betacuantificación combina
ultracentrifugación y precipitación química. La ultra- centrifugación de suero en la
densidad nativa de 1.006 g/L se emplea para hacer flotar VLDL y quilomicrones
para separación. Las fracciones se recuperan pipeteando después de separar las
fracciones al cortar en secciones el tubo. La centrifugación ha sido preferida para
separación de VLDL porque otros métodos, como la precipitación, no son
específicos para VLDL y pueden estar sujetos a interferencia de quilomicrones.
MÉTODOS PARA LDL
15. MÉTODOS PARA LDL
Un método más común que evita la ultracentrifugación, que se emplea tanto en
los laboratorios de investigación como los de rutina, es el cálculo de Friedewald
o betacuantificación derivada. El colesterol HDL se cuantifica ya sea después de
la precipitación o por medio de uno de los métodos directos, y el colesterol total
y los triglicéridos se miden en el suero. El colesterol VLDL se estima como
triglicéridos divididos entre 5 (cuando se emplean unidades de mg/dl), una
aproximación que funciona bastante bien en la mayor parte de las muestras
normolipémicas.
16. Los lípidos y lipoproteínas comunes
se pueden medir con sistemas de
análisis compactos diseñados para
uso en las pruebas realizadas en el
lugar de la atención al lado de la
cama del paciente, en el consultorio
médico, en centros de salud e incluso
en el hogar. Las separaciones de HDL
que conllevan pretratamiento fuera
de línea se desarrollaron después. Los
sistemas posteriores se volvieron más
pequeños y complejos, y ofrecían la
separación integrada de HDL y
análisis de colesterol y triglicéridos al
mismo tiempo a partir de sangre
obtenida por punción digital.
ANALIZADORES COMPACTOS
17. MÉTODOS PARAAPOLIPOPROTEÍNAS
En la investigación suelen medirse apolipoproteínas, y
algunos laboratorios de especialidades capaces de
llevar a cabo prácticas cardiovasculares o estudios
clínicos las miden de manera rutinaria además de las
lipoproteínas. Para propósitos de diagnóstico clínico,
tres apolipoproteínas en particular han sido de interés.
La apo B, la proteína principal de LDL y VLDL, es un
indicador de concentración combinada de LDL y VLDL
que se puede medir de manera directa en el suero de
inmunoensayo.
18. La Apo A-I, es la mejor proteína de HDL, puede medir de forma
directa en suero en lugar de la separación y análisis de colesterol
HDL; sin embargo, debido a que la cuantificación en términos del
contenido de colesterol es más común, esta última práctica ha
prevalecido. La Lp(a), la variante de LDL, que se ha mostrado es
un indicador independiente de riesgo de CC, se determina a
veces para tratar a los pacientes. La medición de estas tres
apolipoproteínas puede ser útil cuando médicos expertos tratan
al paciente, pero no ha sido aceptada o recomendada en alguna
de las normas de consenso para uso en la práctica rutinaria.
MÉTODOS PARAAPOLIPOPROTEÍNAS
19. MEDICIÓN DE FOSFOLÍPIDOS
La medición cuantitativa de
fosfolípidos es rara en la práctica
clínica rutinaria. A veces en la
investigación se miden
fosfolípidos (p. ej., en estudios de
influencias dietéticas). Los
fosfolípidos lecitina, lisolecitina y
esfingomielina que contienen
colina, que explican por lo
menos 95% de los fosfolípidos
totales en el suero, se pueden
medir mediante una secuencia
de reacción enzimática con
fosfolipasa D, oxidasa de colina y
peroxidasa de rábano.
20. MEDICIÓN DE ÁCIDOS GRASOS
Aunque los estudios indican que los ácidos grasos tienen potencial para evaluar
el riesgo de CC, el análisis se emplea principalmente en laboratorios de
investigación para estudios de dieta. Menos común es su medición en el
diagnóstico de condiciones genéticas raras.
21. MEDICIÓN DE ÁCIDOS GRASOS
Por lo general, los ácidos
grasos se analizan mediante
cromatografía gas-líquido,
después de la extracción,
alcalina y
a ésteres de
diazometano. Un
hidrólisis
conversión
metilo de
estándar de referencia
contiene por lo general
laurato, miristato, palmitato,
palmitoleato, fitanato,
estearato, oleato, linoleato,
araquidato y araquidonato.
23. La precisión es un requisito para la exactitud; un método
puede no tener error sistemático o sesgo global; sin
embargo, si es impreciso, será inexacto en mediciones
individuales. Con el cambio a analizadores automatizados
modernos, la variación analítica se ha vuelto por lo general
menos interesante que la biológica y otras fuentes de
variación preanalítica. Las concentraciones de colesterol
son afectadas por muchos factores que pueden ser
clasificados en fuentes biológicas, clínicas y de muestreo.
Los cambios en el estilo de vida que afectan los patrones
usuales de dieta, ejercicio, peso y hábito de fumar pueden
dar como resultado fluctuaciones en los valores
observados de colesterol y triglicéridos, y la distribución de
lipoproteínas.
PRECISIÓN
24. EXACTITUD
La exactitud se asegura al demostrar rastreo o acuerdo a
través de la calibración para el método de referencia
respectivo. Con el colesterol, el sistema de referencia es
avanzado y completo, habiendo servido como modelo para
la estandarización de otros analitos de laboratorio.
El método de referencia desarrollado y aplicado en el
CDC, y calibrado por un estándar de referencia
primario aprobado para el método definitivo,
proporciona un enlace de referencia práctico,
transferible. El método de referencia se ha hecho
accesible de manera conveniente a través de una red
de laboratorios estandarizados, la Red de laboratorios
para el método de referencia de colesterol.
25. CONTROL DE CALIDAD (QC)
El desempeño analítico aceptable alcanzable requiere el uso de materiales de control
de calidad confiables, que de preferencia deben emular las muestras reales del
paciente. En la actualidad, los mejores materiales se preparan a partir de suero del
paciente recién recolectado, del cual se toman alícuotas que se depositan en viales
bien sellados, se congelan con rapidez y se almacenan a -70°C. Esta clase de fondos
comunes de suero congelado nuevo están menos sujetos a interacciones matriciales
que los materiales comerciales usuales, más importante es monitorear la exactitud
en la separación y análisis de lipoproteínas, y preferible para monitorear colesterol y
otras mediciones de lípidos. Se deben analizar por lo menos dos fondos comunes, de
preferencia con concentraciones en o cerca de los puntos de decisión para cada
analito.
26. RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA
El suero, recolectado por lo general
en tubos al vacío con separador de
suero con intensificadores de
coagulación, ha sido el líquido de
elección para medición de
lipoproteínas en el laboratorio clínico
rutinario. El plasma con ácido
etilendiaminotetracético (EDTA) era
la elección tradicional en los
laboratorios de investigación de
lípidos, especialmente para
separaciones de lipoproteínas,
porque el anticoagulante incrementa
la estabilidad mediante la quelación
de iones metálicos.
27. RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA
El EDTA tiene desventajas
potenciales que desalientan el uso
rutinario. Los microcoágulos, que se
forman en el plasma durante el
almacenamiento, taponan las
sondas de muestreo de los
analizadores químicos modernos. El
EDTA extrae osmóticamente agua
de los glóbulos rojos, de modo que
se diluyen los constituyentes, y el
efecto de dilución puede variar
dependiendo de factores como el
volumen de llenado, el analito que
se está midiendo y el grado de
mezcla.
28. BIBLIOGRAFÍA
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