Este documento describe los procedimientos para determinar el colesterol total en una muestra de sangre utilizando el método enzimático de la colesterol oxidasa. Se prepararon un patrón y un blanco y se midió la absorbancia de la muestra y el patrón. Usando las fórmulas provistas, la concentración de colesterol en la muestra fue calculada en 206 mg/dl, lo que está por encima del rango normal. Esto podría deberse a defectos genéticos o a una dieta rica en grasas.

1. LABORATORIO D BIOQUIMICA
DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL
Sanchez M; Rendon V; Gomez R; Posada L.
INTRODUCCION
Análisis de colesterol o análisis de colesterol total es un
análisis de sangre que da una medida aproximada de todo
el colesterol y triglicéridos en el suero.
El colesterol es un lípido complejo derivado del fenantreno
que se encuentra en todas partes del cuerpo, en la dieta
humana y la biosíntesis, la cual curre en el hígado a partir
de la acetil CoA. El cuerpo necesita un poco de colesterol para funcionar
adecuadamente; pero demasiado colesterol puede obstruir las arterias y llevar a
cardiopatía.
Una parte del colesterol se considera “buena” y otra se considera “mala”. Se
necesitan exámenes de sangre diferentes para medir cada tipo de colesterol
individualmente. El colesterol es absorbido parcialmente por el intestino delgado
en forma de quilomicrones
PALABRAS CLAVES
Lipoproteinas Plasmaticas, quilomicrones, densidad, lípido, biosistesis.
OBJETIVOS
1. Conocer los fundamentos de la determinación de colesterol total en sangre
por el método enzimático del colesterol oxidasa.
2. Manejar los valores de referencia para el colesterol total en sangre y su
utilidad diagnostica.
3. Desarrollar destreza en el manejo del espectrofotometro.
4. Determinar la concentración de colesterol total en la muestra problema.
5. Interpretar los resultados obtenidos.

2. 6. Investigar las posibles interferencias de la prueba.
7. Aplicar las normas de bioseguridad para el manejo de muestra de sangre y
reactivos químicos.
MATERIALES Y REACTIVOS
Pipetas graduadas de 1ml y 5ml.
Pipeteador manual.
Micropipetas
Puntas desechables.
Tres tubos de ensayo de 7ml.
Gradilla para tubos de ensayo.
Centrifuga de tubos.
Guantes desechables.
Papel absorbente.
Espectrofotometro.
Reactivo enzimático.
Patrón acuoso de Colesterol.
Suero o plasma obtenido mediante procedimiento estándar.
PROCEDIMIENTOS Y RESULTADOS.
1. Preparamos un patrón y un blanco para cada serie de determinaciones.
2. Mezclamos cada tubo y los dejamos durante 15 minutos a temperatura
ambiente, luego leímos la absorbancia de la muestra y el patrón llevando a
cero el espectrofotómetro con el blanco del reactivo.
El Blanco: tuvo un color amarillo claro.
El patrón: un color muy característico, un naranja claro o color guayaba.
Y la Muestra, en este caso un color muy parecido al del patrón.

3. 3. Calculamos la concentración plasmática de colesterol con la ayuda de las
siguientes formulas:
Colesterol (mg/dl)= 200 x (Absorbancia muestra/ Absorbancia estándar)
Colesterol (mmol/L) = 5,17 x (Absorbancia muestra/ absorbancia estándar)
En este caso utilizamos la primera de la siguente forma: 200 x (0,494/0,478) =
206mg/dl.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Complete la siguiente tabla.
REACTIVO
Muestra
Patron
ABSORBANCIA
0,494 Ab
0,478 Ab
2. ¿Cuál es el resultado de la concentración de colesterol en la muestra
analizada?
200 x (0,494/0,478) = 206mg/dl.
3. ¿El resultado esta dentro de los valores de referencia? En caso de que
su respuesta sea negativa, proponga una justificación a su resultado.
Nuestra muestra no estuvo dentro de esos valores. En general, un valor de
colesterol total por encima de 200 mg/dL puede significar que usted está en mayor
riesgo de sufrir una cardiopatía. Sin embargo, los niveles de LDL son una mejor
manera de predecir la cardiopatía y determinan cómo se debe tratar el colesterol
alto. En ocasiones la causa de la suba del colesterol puede ser un defecto
genético (Hipercolesterolemia Familiar), que provoca un aumento descontrolado
en la producción de colesterol y una disminución de su eliminación desde el
torrente sanguíneo.
Sin embargo la principal causa de un aumento de colesterol es una dieta
demasiado rica en Grasas Saturadas y Ácidos Grasos Trans (AGT).

4. CONCLUSION
Poniendo en práctica la aplicación de las normas de bioseguridad dentro del
laboratorio para la extracción de una prueba sanguínea; desarrollamos habilidades
para el manejo del espectrofotómetro y determinamos con los resultados de
absorbancia la concentración del colesterol en sangre.
BIBLIOGRAFIA Y WEBGRAFIA.
KRUPP, Marcus et al. Manual de Diagnostico Clinico y de Laboratorio,
Mexico: Editorial El manual moderno editorial medica panamericana, 1986.
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www.clinicadam.com