INFORME Endonucleasas de Restricción Utilizadas en Biotecnología STEFANI BRILLY AREVALO NAVARRO.pdf

UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
INFORME:
Endonucleasas de
Restricción
Utilizadas en
Biotecnología
Integrantes:
Arévalo Navarro, Stefani Brilly
Docente:
Dr. Hebert Hernán Soto Gonzales
Ilo, Moquegua, Perú
2022

Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental
INFORME: Endonucleasas de Restricción Utilizadas en
Biotecnología
Biotecnología
Asesor:
Dr. Hebert Hernán Soto Gonzales
Responsables:
Arevalo Navarro, Stefani Brilly
VII Ciclo
Ilo, Moquegua, Perú
2022

INTRODUCCION
Una enzima de restricción es una proteína aislada a partir de bacterias que cortan
secuencias de ADN en sitios específicos de la secuencia, lo que produce fragmentos de
ADN con una secuencia conocida en cada extremo. El uso de enzimas de restricción es
sumamente importante para determinados métodos de laboratorio, tales como la
tecnología de ADN recombinante y la modificación genética. (Genome.gov, 2022)
En la actualidad el análisis de estas enzimas de restricción es de fácil manejo,
ya que existen diferentes programas bioinformáticos, siendo una de estas BioLabs, que
permiten manejar, editar y analizar las enzimas elegidas, permitiéndonos conocer a
profundidad cada una de ellas.
1. OBJETIVOS
1.1. OBJETIVO GENERAL
- Realizar un levantamiento de 30 endonucleasas de restricción
1.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
- Conocer que es una enzima de restricción
- Escoger 30 enzimas endonucleasas de restricción
- Analizar las características de cada enzima endonucleasas de restricción
- Analizar las funciones de cada enzima endonucleasas de restricción
2. MARCO TEÓRICO
- ¿QUÉ SON LAS ENZIMAS?
Las enzimas son los directores de orquestra de nuestras células (y de las de los
otros seres vivos), pues se encargan de ordenar, dirigir y estimular a todos los otros
componentes celulares para que desarrollen su parte en la “obra”.

Las enzimas son moléculas intracelulares que activan cualquier ruta metabólica
de la fisiología de un organismo. Es decir, todas aquellas reacciones bioquímicas para
que la célula (y el conjunto de células) se mantenga viva, obtenga energía, crezca, se
divida y se comunique con el entorno son posibles gracias a estas moléculas
activadoras.
En este sentido, las enzimas son proteínas que actúan como catalizadores
biológicos, cosa que significa, básicamente, que aceleran (para que sucedan
rápidamente) y dirigen (para que sucedan en el orden correcto) todas aquellas
reacciones de conversión de un metabolito a otro, que es en lo que se basa el
metabolismo.
Sin estas enzimas, las reacciones metabólicas serían demasiado lentas (y algunas
ni siquiera podrían existir) y/o no ocurrirían en el orden adecuado. Intentar que alguna
reacción metabólica suceda sin acción de la enzima que la controla sería como intentar
prender un petardo sin encender su mecha con un mechero. En este sentido, el mechero
sería la enzima. (Prieto, 2020).
- ¿CÓMO FUNCIONAN LAS ENZIMAS?
Una enzima es una proteína, lo que significa que es, en esencia, una sucesión de
aminoácidos. Existen 20 aminoácidos distintos y estos pueden unirse con
combinaciones increíblemente variadas para dar lugar a “cadenas”. En función de cómo
sea la serie de aminoácidos, la enzima adquirirá una estructura tridimensional concreta,
cosa que, junto con la clase de aminoácidos que contenga, determinará a qué
metabolitos puede unirse.
En este sentido, las enzimas disponen de lo que se conoce como zona de unión, una
región de unos pocos aminoácidos con afinidad por una molécula concreta, que es el
sustrato de la reacción bioquímica que estimula. Cada enzima tiene una zona de unión
diferente, por lo que cada una atraerá a un sustrato (o metabolito inicial) concreto.
Una vez el sustrato se ha enganchado a la zona de unión, como este está incluido
dentro de una región mayor conocida como sitio activo, empiezan a estimularse las
transformaciones químicas. En primer lugar, la enzima modifica su estructura
tridimensional para englobar perfectamente el sustrato en su interior, formando lo que
se conoce como complejo enzima/sustrato.
IMAGEN 1. Enzimas

Una vez se ha formado, la enzima realiza su acción catalítica (después veremos
cuáles pueden ser) y, consecuentemente, las propiedades químicas del metabolito que
se ha unido cambian. Cuando la molécula obtenida es diferente a la inicial (el sustrato),
se dice que se ha formado el complejo enzima/productos.
Estos productos, a pesar de que proceden de una transformación química del
sustrato, ya no tienen las mismas propiedades que este, por lo que no tienen la misma
afinidad por la zona de unión de la enzima. Esto provoca que los productos salgan de
la enzima, listos para realizar su función en la fisiología de la célula o preparados para
funcionar como sustrato de otra enzima.
- CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS
1. Oxidorreductasas
Las oxidorreductasas son enzimas que estimulan las reacciones de oxidación y
reducción, conocidas “popularmente” como reacciones redox. En este sentido, las
oxidorreductasas son proteínas que, en una reacción química, permiten la
transferencia de electrones o de hidrógeno de un sustrato a otro.
Pero, ¿qué es una reacción redox? Una reacción de oxidación y reducción es una
transformación química en la que un agente oxidante y un agente reductor se alteran
mutuamente su composición química. Y es que un agente oxidante es una molécula
con la capacidad de sustraer electrones a otra sustancia química conocida como
agente reductor. (Prieto, 2020)
2. Hidrolasas

Las hidrolasas son enzimas que, a grandes rasgos, tienen la función de romper
enlaces entre moléculas mediante un proceso de hidrólisis en el cual, como
podemos deducir por su nombre, está involucrada el agua. En este sentido, partimos
de una unión de dos moléculas (A y B). La hidrolasa, en presencia de agua, es capaz
de romper esta unión y obtener las dos moléculas por separado: una se queda con
un átomo de hidrógeno y la otra con un grupo hidroxilo (OH).
Estas enzimas son imprescindibles en el metabolismo, pues permiten la
degradación de moléculas complejas en otras de más sencilla asimilables para
nuestras células. Existen muchos ejemplos. Para enumerar algunos nos quedamos
con las lactasas (rompen los enlaces de la lactosa para dar lugar a glucosa y
galactosa), las lipasas (degradan los lípidos complejos en grasas más simples), las
nucleotidasas (degradan los nucleótidos de los ácidos nucleicos), las peptidasas
(degradan las proteínas en aminoácidos), etc. (Prieto, 2020)
3. Transferasas
Las transferasas son enzimas que, como su propio nombre indica, estimulan la
transferencia de grupos químicos entre moléculas. Son distintas a las
oxidorreductasas en el sentido que estas transfieren cualquier grupo químico
excepto el hidrógeno. Un ejemplo son los grupos fosfato.
Y a diferencia de las hidrolasas, las transferasas no forman parte del
metabolismo catabólico (degradación de moléculas complejas para conseguir
simples), sino del anabólico, que consiste en gastar energía para sintetizar, a partir
de moléculas simples, moléculas más complejas. (Prieto, 2020)
4. Ligasas
Las ligasas son enzimas que estimulan la formación de enlaces covalentes entre
moléculas, los cuales son el “pegamento” más fuerte de la biología. Estos enlaces
covalentes se establecen entre dos átomos, los cuales, al unirse, pasan a compartir
electrones.
Esto hace que sean uniones muy resistentes y especialmente importantes, en el
ámbito celular, para establecer las uniones entre los nucleótidos. Estos nucleótidos
son cada una de las piezas que conforman nuestro ADN. De hecho, el material
genético es “simplemente” una sucesión de moléculas de este tipo.

En este sentido, una de las ligasas más conocidas es la DNA ligasa, una enzima que
establece los enlaces fosfodiéster (un tipo de enlace covalente) entre los distintos
nucleótidos, impidiendo que haya roturas en la cadena de ADN, cosa que tendría
consecuencias catastróficas para la célula. (Prieto, 2020)
5. Liasas
Las liasas son enzimas muy similares a las hidrolasas en el sentido que su
función es la de romper enlaces químicos entre moléculas y que, por lo tanto, son
pieza fundamental de las reacciones catabólicas, pero en este caso, las liasas no
requieren de la presencia de agua.
Además, no solo son capaces de romper enlaces, sino de formarlos. En este
sentido, las liasas son enzimas que permiten estimular reacciones químicas
reversibles, por lo que de un sustrato complejo se puede pasar a uno más simple
rompiendo sus enlaces, pero también se puede pasar de este sustrato sencillo a otra
vez el complejo volviendo a establecer su unión. (Prieto, 2020)
6. Isomerasas
Las isomerasas son unas enzimas que ni rompen enlaces ni los forman y que
tampoco estimulan la transferencia de grupos químicos entre moléculas. En este
sentido, las isomerasas son proteínas cuya acción metabólica se basa en alterar la
estructura química de un sustrato.
Cambiando su forma (sin añadir grupos químicos ni modificando sus enlaces),
se puede conseguir que una misma molécula desempeñe una función totalmente
distinta. Por lo tanto, las isomerasas son enzimas que estimulan la obtención de
isómeros, es decir, nuevas conformaciones estructurales de una molécula que,
gracias a esta modificación de su estructura tridimensional, se comportan de forma
diferente. (Prieto, 2020)
- ¿CÓMO SE CORTA Y PEGA EL ADN?
En la clonación de ADN, los investigadores hacen muchas copias de un
fragmento de ADN específico, como un gen. En muchos casos, la clonación consiste

en introducir el gen en un fragmento de ADN circular llamado plásmido que puede
copiarse en bacterias.
¿Cómo se pueden unir fragmentos de ADN de diferentes fuentes (como un gen
humano y un plásmido bacteriano) para hacer una sola molécula de ADN? Un método
común utiliza enzimas de restricción y ADN ligasa.
Una enzima de restricción es una enzima que corta ADN y que reconoce sitios
específicos en él. Muchas enzimas de restricción hacen cortes escalonados en o cerca
de su sitio de reconocimiento y producen extremos sobresalientes de cadena sencilla.
Si dos moléculas de ADN tienen extremos complementarios, la enzima ADN
ligasa puede unirlos. El ADN ligasa sella el espacio entre las moléculas para formar un
solo fragmento de ADN.
Las enzimas de restricción y el ADN ligasa se suelen usar para insertar genes y
otros fragmentos de ADN en plásmidos durante la clonación de ADN. (Khan Academy,
2022)
- ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Las enzimas de restricción son una herramienta primordial para la ejecución de
diversos ensayos útiles en investigación clínica, desde la determinación de
polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (restriction fragment length
polymorphism, RFLP), así como en la construcción de vectores con ADN recombinante
y clonación de secuencias de ADN provenientes de humano, virus, bacterias y demás
microorganismos de interés para la generación de conocimiento o para su aplicación en
el área de la medicina. Entre las enzimas que modifican los ácidos nucleicos se
encuentran las nucleasas, es decir, aquellas capaces de cortar los enlaces fosfodiéster
que unen los nucleótidos de una cadena de ácidos nucleicos. Las nucleasas se
denominan endonucleasas si son capaces de cortar el enlace fosfodiéster en nucleótidos
localizados dentro de la cadena del ácido nucleico, y reciben el nombre de exonucleasas
si cortan los enlaces fosfodiéster de los nucleótidos en los extremos de las cadenas. Así,
existen 3’exonucleasas las que escinden enlaces en el extremo 3’ de la cadena, y
5’exonucleasas que rompen enlaces fosfodiéster en el extremo 5’ de la cadena.
Las enzimas de restricción presentan actividad endonucleasa, son de origen
bacteriano y cortan los enlaces fosfodiéster del ADN en una secuencia específica

denominada secuencia diana. El uso de estas enzimas como herramienta biotecnológica
surgió de la necesidad de cortar las largas cadenas de ADN genómico para manipularse
y analizarse en fragmentos más pequeños. El empleo de las enzimas de restricción y
otras enzimas que modifican ácidos nucleicos, como la ligasa, permitió desarrollar la
metodología del ADN recombinante.
Estas endonucleasas se denominan enzimas de restricción debido a que
restringen la permanencia de un ADN exógeno en la célula bacteriana que produce
dicha enzima. Las enzimas de restricción empleadas con más frecuencia en la
metodología del ADN recombinante suelen reconocer una secuencia única de 4 a 8
nucleótidos, donde realizan el corte. (Mhmedical, 2022)
- ORIGEN DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Las endonucleasas de restricción forman parte de la maquinaria con la que
cuenta la bacteria para defenderse de infecciones virales. El ADN de la bacteria que
produce la enzima de restricción no se ve afectado por su propia enzima, ya que las
bacterias metilan determinadas secuencias a su propio ADN para diferenciarlo del ADN
viral por medio de una enzima metiltransferasa en bases específicas, que generalmente
son las reconocidas por sus propias enzimas de restricción. (Mhmedical, 2022)
- CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
De acuerdo a su función las enzimas de restricción se han clasificado en tipo I, II,
III.
• Tipo I
Las enzimas que pertenecen a este grupo reconocen una secuencia específica de
nucleótidos y hacen un corte aleatorio en la doble cadena en cualquier secuencia
del ADN y a una distancia aproximada de 1000 pb del sitio de corte; además tienen

la función de metilar su propio genoma. Estas enzimas necesitan adenosín trifosfato
(ATP) para moverse a lo largo de la molécula de ADN desde el lugar de
reconocimiento hasta el sitio de corte. (Mhmedical, 2022)
• Tipo II
Son enzimas que reconocen secuencias específicas y hacen el corte de la doble
cadena de ADN en el mismo sitio de reconocimiento. Estas enzimas sólo tienen
actividad de restricción no de metilación y son las utilizadas en ingeniería genética,
ya que cortan el ADN en secuencias específicas reconocidas. Requieren Mg2+
como cofactor y no requieren de ADN. Las secuencias de reconocimiento de estas
enzimas son palindrómicas, es decir, son secuencias que se leen igual en las dos
cadenas de ADN. (Mhmedical, 2022)
• Tipo III
Estas enzimas reconocen una secuencia específica y cortan el ADN de doble
cadena fuera de la secuencia diana (aproximadamente de 25 a 27 pares de bases
corriente abajo del sitio de reconocimiento). Tienen, al igual de las de tipo I,
actividad de metilasa y requieren de ATP para desplazarse a lo largo de la molécula
de ADN. (Mhmedical, 2022)
✓ Características de las enzimas de restricción tipo III
- APLICACIONES DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Las enzimas de restricción son una herramienta básica en clonación e ingeniería
genética; se utilizan, entre otros fines, para hacer mapas de restricción de plásmidos o
genomas. Un mapa de restricción se define como la serie de fragmentos que se generan
por el corte con determinada(s) enzima(s), específicos en tamaño (y secuencia) y que
permiten emplearlos para la caracterización de dicho ADN. Esta herramienta es
sumamente importante para la clonación con vectores. También, en estudios de
determinación de polimorfismos, como la técnica de RFLP, según se presente o no el
sitio de corte de una enzima de restricción, se puede establecer la variante alélica, ya
que el peso molecular del fragmento o fragmentos de ADN generado(s) permitirá la
IMAGEN 2. Características de las enzimas de restricción tipo III

caracterización de la secuencia. Asimismo, la construcción de moléculas de ADN
recombinante implica el obvio empleo de las enzimas de restricción para definir y
delimitar las secuencias que se insertarán en el constructo recombinante. De la misma
manera, el corte de ADN genómico que suele ser, según el organismo, del orden de
millones de pb, es más manipulable cuando es digerido por estas enzimas en fragmentos
más pequeños. Esto permite un manejo adecuados sin el riesgo de degradación y
manipulación lación para la construcción de bibliotecas genómicas, que se discuten en
el capítulo de vectores de clonación. (Mhmedical, 2022)
- TIPOS DE CORTES PRODUCIDOS POR LAS ENZIMAS DE
RESTRICCIÓN
Los cortes que realizan las enzimas de restricción sobre la cadena de ADN
pueden generar dos estructuras o formas: cohesivas o romas. Los cortes cohesivos,
también llamados pegajosos, se generan porque la enzima corta en cada cadena de ADN
entre nucleótidos localizados en posiciones diferentes respecto al eje de simetría de la
secuencia de diana. Estos cortes generan extremos monocatenarios en un segmento de
3 a 5 bases de longitud, por lo que en esta fracción la falta de cadena complementaria
facilita su interacción con otro fragmento en monocadena con secuencia
complementaria. Los extremos así generados propician la unión específica entre
segmentos diferentes de ADN, pero cortados por la misma enzima, lo que origina
condiciones idóneas de unión específica para la producción de ADN recombinante. Los
extremos romos se generan porque la enzima corta en ambas cadenas de ADN sobre un
mismo eje, por lo que dichos extremos son de doble cadena, y la unión entre fragmentos
de ADN con extremos romos es más inespecífica, ya que no depende de la
complementariedad de regiones monocadena.
- FAMILIAS DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Una familia de enzimas de restricción está formada por aquellas que no
necesariamente reconocen la misma secuencia diana, pero producen extremos
cohesivos similares. Un ejemplo de familia es: BamHI y BclII, que reconocen las

secuencias diana 5’GGATCC3’ y 5’AGATCT3’, respectivamente, pero que generan
extremos cohesivos idénticos: 5’GATC3’.
Esta característica favorece que dos fragmentos cortados con estas enzimas
puedan recombinarse de manera específica gracias a la complementariedad de sus bases
en los extremos cohesivos generados. (Mhmedical, 2022)
- FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LAS
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Entre los factores que más afectan la actividad de las enzimas de restricción se
encuentran:
• La pureza biológica del ADN. Contaminación de la muestra con otros ADN
impide el buen funcionamiento de las enzimas.
• Los contaminantes como detergentes y estabilizadores (docedil sulfato de sodio
–SDS–, ácido etilendiaminotetraacético –EDTA–), ya que concentraciones
elevadas de sales y detergentes inhiben la actividad enzimática.
• Modificaciones en el pH y temperatura de incubación. Variaciones leves en estos
parámetros inhiben enormemente la actividad de las enzimas.

• El grado de metilación del ADN, ya que algunas enzimas son inhibidas por
metilación en ciertas secuencias. (Mhmedical, 2022)
- CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y CONSERVACIÓN
DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Las enzimas de restricción, al igual que muchas otras proteínas, pueden
disminuir su vida media y en consecuencia su actividad, al ser conservadas y manejadas
de forma inadecuada fuera de su rango ideal de temperatura; deben conservarse a -20ºC,
así que para evitar su congelamiento y su consecuente pérdida de actividad son diluidas
en un volumen determinado de glicerol. Para usarlas se requiere un contenedor que
asegure la menor variación de temperatura posible. (Mhmedical, 2022)
- EFICIENCIA EN EL USO DE LAS ENZIMAS DE
RESTRICCIÓN
Las hojas de instrucciones o insertos que facilita el proveedor incluyen las
características y descripción de las condiciones óptimas de actividad de las enzimas de
restricción disponibles comercialmente. Dichas condiciones están ajustadas para el
volumen de reacción requerido, de acuerdo a la tecnología que se requiere aplicar. Se
debe tener en cuenta la temperatura óptima de acción, presentación comercial de la
enzima (unidades de enzima por microlitro), tiempo de incubación, así como los
posibles requerimientos de aditivos, como albúmina, ATP, etcétera. (Mhmedical, 2022)
3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1.MATERIALES
- Laptop
- Página BioLabs
- Internet

3.2.MÉTODOS
Este es el método para tener las 30 endonucleasas aleatoriamente de la página BioLabs:
- Buscamos en Google la página BioLabs.
- Entramos a la página BioLabs.
- Vamos a Applications & Products, luego a Product Categories y al final a Restriction
Endonucleases.
- Una vez dentro le damos clic a Product Listing.

Bajamos y encontramos las Endonucleasas, donde escogeremos 30 para los
OBJETIVO:
OBJETIVO GENERAL:
OBJETIVO ESPECIFICO:

DESARROLLO
N
°
Restriction
Endonucleas
es
Código Información

1
Acc65I
Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen Acc65I clonado de
Acinetobacter calcoaceticus 65 (SK Degtyarev).
Reactivos suministrados
Los siguientes reactivos se suministran con este producto:
Este producto está relacionado con las siguientes categorías:
Endonucleasas de restricción: A, Productos de enzimas de
restricción calificados para ahorrar tiempo
Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones:
Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con
reactivos de NEB, Digestión de enzimas de restricción
PROPIEDADES Y USO
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para
digerir 1 µg de ADN de pBC4 en 1 hora a 37 °C en un volumen
de reacción total de 50 µl.
Condiciones de reacción
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
100 µg/ml Albúmina recombinante
(pH 7,9 a 25 °C)
Actividad en NEBuffers
NEBuffer™ r1.1: 10 %
Tampón rCutSmart™: 25 %
Compatibilidad de diluyente
• Diluyente A
Búfer de almacenamiento
Tris-HCl
10 mM NaCl 100 mM
DTT

1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Inactivación de calor
65°C durante 20 minutos
Sensibilidad a la metilación
Metilación de dam : No sensible
Metilación de dcm : Bloqueada por algunas combinaciones de
superposición
Metilación de CpG: Bloqueada por algunas combinaciones de
superposición
Isosquizómeros
Asp718I
KpnI
KpnI-HF
PRODUCTOS RELACIONADOS
NOTAS DEL PRODUCTOS
1. Acc65I es un neoesquizómero de KpnI.
2. Puede exhibir actividad estelar en NEBuffer 2.1.
3. Bloqueado por algunas combinaciones de superposición
de dcm y algunas combinaciones de superposición de
metilación de CpG.
2 ApeKI Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen ApeKI de Aeropyrum
pernix K1 (ATCC 700893).

PROPIEDADES Y USO
digerir 1 μg de ADN λ en 1 hora a 75 °C en un volumen de
reacción total de 50 μl.
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 75°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)
Diluyente B
10 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
500 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
No
Metilación de dam : No sensible Metilación de
dcm : No sensible
Metilación de CpG: Bloqueada por superposición

Isosquizómeros
TseI
Actividad a temperatura
@37°C: 10%
NOTAS DEL PRODUCTOS
1. ApeKI es un isosquizómero de TseI.
2. ApeKI es una enzima de restricción altamente
termoestable que puede sobrevivir a temperaturas de hasta
95°C. A esa temperatura, la vida media de la enzima es de
20 minutos.
3. Para las enzimas que no se pueden inactivar con calor,
recomendamos usar una columna para la limpieza (como
el kit de limpieza de ADN y PCR Monarch® ) o ejecutar
la reacción en un gel de agarosa y luego extraer el ADN
(recomendamos el kit de extracción de gel Monarch ) , o
realizando una extracción con fenol/cloroformo.
4. Bloqueado por metilación de CpG superpuesta.
3 AvrII Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen AvrII de Anabaena variabilis
UW (E. Rosenvold).
PROPIEDADES Y USO

digerir 1 µg de ADN λ (digerido con HindIII) en 1 hora a 37 °C
en un volumen de reacción total de 50 µl.
1X Tampón rCutSmart™
Incubar a 37°C
Tampón rCutSmart™ 1X
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
20 mM Acetato de magnesio 10 mM
(pH 7,9 a 25 °C)
• Diluyente B
•
Tris-HCl 10
mM NaCl 300 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
No
Metilación de dcm : No sensible
Metilación de CpG: No sensible
Isosquizómeros
AspA2I
BlnI
XmaJI

NOTAS DEL PRODUCTOS
1. Se escinde para producir una extensión CTAG 5' que se
puede ligar de manera eficiente a fragmentos de ADN
generados por NheI, SpeI o XbaI.
el Monarch® PCR & DNA Cleanup Kit ), o ejecutar la
reacción en un gel de agarosa y luego extraer el ADN
(recomendamos la extracción en gel Monarch ). Kit ), o
3. No es sensible a la metilación de CpG, dcm o dam.
4 BaeGI Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen BaeGI clonado de Bacillus
aestuarii GG790 (X. Pan)
Endonucleasas de restricción B, Productos de enzimas de
PROPIEDADES Y USO
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C

1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)
• Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50
mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
DTT 1 mM
pH 7,4 a 37 °C
Isosquizómeros
BseSI
BstSLI
NOTAS DEL PRODUCTOS
1. BaeGI es un isosquizómero de Bme1580I.

5 BanII Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen BanII clonado de Bacillus
aneurinolyticus (IAM 1077)
Endonucleasas de restricción B
Digestión de enzimas de restricción
PROPIEDADES Y USO
Una unidad se define como la cantidad de enzima requerida para
digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un volumen de
reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
• Diluyente A
Tris-HCl
10 mM NaCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C

Isosquizómeros
Eco24I
EcoT38I
FriOI
HgiJII+
NOTAS DEL PRODUCTOS
2. la actividad estelar puede resultar de una digestión
prolongada.
6 BceAI Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen BceAI clonado de Bacillus
cereus 1315 (C. Nkenfou)
PROPIEDADES Y USO

digerir 1 µg de ADN de pBR322 en 1 hora a 37 °C en un volumen
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)
• Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Metilación de CpG: Bloqueada
Isosquizómeros
BcefI+

NOTAS DEL PRODUCTOS
1. Puede exhibir actividad estelar en NEBuffer 1.1, 2.1 y
CutSmart Buffers.
2. Bloqueado por metilación de CpG.
3. la actividad estelar puede resultar de una digestión
prolongada, una alta concentración de enzimas o una
concentración de glicerol >5%
7 BcoDI Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen BcoDI clonado de
Bacteroides coprocola DSM 17136.
PROPIEDADES Y USO
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
• Diluyente B

Tris-HCl 10 mM
200 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 37 °C
No
Metilación de dam : No sensible Metilación de
dcm : No sensible
Metilación de CpG: Deteriorada por algunas combinaciones de
superposición
Isosquizómeros
Alw26I
BsmAI
BstMAI
NOTAS DEL PRODUCTOS
1. BcoDI es un isosquizómero de BsmAI.
3. Deteriorado por algunas combinaciones de metilación de
CpG superpuestas.

8 BCLI Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen BclI de Bacillus caldolyticus
(A. Atkinson).
PROPIEDADES Y USO
digerir 1 µg de ADN λ ( dam - ) en 1 hora a 50°C en un volumen
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 50°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)
• Diluyente A
•
Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C

No
Metilación de dam :
Metilación de dcm bloqueada : No sensible
Isosquizómeros
BclI-HF
FbaI
Ksp22I
@37°C: 50%
NOTAS DEL PRODUCTOS
1. Se escinde para dejar una extensión GATC de 5' que se
puede ligar de manera eficiente a los fragmentos de ADN
generados por BamHI, BglII, MboI, Sau3AI y BstYI.
2. Esta enzima está bloqueada por la metilación de la presa.
Se puede encontrar más información en Dam-Dcm y CpG
Metilación.
9 BglII Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen BglII de Bacillus globigii
(ATCC 49760).

PROPIEDADES Y USO
Una unidad se define como la cantidad de BglII requerida para
digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un volumen de
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)
Tampón rCutSmart™: <10 %
• Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
200 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C

No
NOTAS DEL PRODUCTOS
1
0
Bsp128
6I
Fuente del producto
Una cepa de E. Coli que porta el gen Bsp1286I clonado de
Bacillus sphaericus (IAM 1286)
PROPIEDADES Y USO
digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en 50 µl de tampón de
reacción.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato

(pH 7,9 a 25 °C)
Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
MhlI
SduI
NOTAS DEL PRODUCTOS
2. Bsp1286I reconoce seis secuencias distintas, GGGCCC,
GAGCCC (complemento GGGCTC), GTGCCC
(complemento GGGCAC), GAGCAC, GTGCAC y
GAGCTC (complemento GTGCTC).

3. No sensible a dam, dcm o metilación de CpG de
mamíferos.
4. la actividad estelar puede resultar de una concentración de
glicerol >5%
1
1
BclI-
HF
Las enzimas de restricción de alta fidelidad (HF) tienen una
actividad del 100 % en el tampón rCutSmart; la simplicidad de un
solo búfer significa un procesamiento de muestras más sencillo y
optimizado. Las enzimas HF también exhiben una actividad estelar
drásticamente reducida. Todas las enzimas HF están calificadas
para Time-Saver y, por lo tanto, pueden cortar el ADN del sustrato
en 5-15 con la flexibilidad de digerir durante la noche sin
degradarse a ADN. Diseñadas teniendo en cuenta el rendimiento,
las enzimas de restricción HF son completamente activas en una
gama más amplia de condiciones, lo que minimiza los productos
fuera del objetivo y ofrece flexibilidad en el diseño experimental.
Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen BclI clonado y modificado
de Bacillus caldolyticus (A. Atkinson).
Productos de endonucleasas de restricción de alta fidelidad
(HF®), Endonucleasas de restricción B, Productos de enzimas de
restricción calificados para ahorrar tiempo.
Este producto se puede utilizar en las siguientes aplicaciones
reactivos de NEB,
Digestión de enzimas de restricción.
PROPIEDADES Y USO

1
2
Bpu10I Fuente del producto
Dos cepas de E. coli que portan las subunidades clonadas de
Bpu10I de Bacillus pumilus 10 (SK Degtyarev)
Este producto se puede utilizar en las siguientes
aplicaciones:Digestión de enzimas de restricción.
PROPIEDADES Y USO

1
3
PI-SceI La inteína que codifica PI-SceI está presente en el gen VMA
ATPasa Saccharomyces cerevisiae (1,5). El gen ha sido modificado
para expresión independiente en E. coli utilizando un sistema de
expresión de polimerasa de ARN T7 (2).
Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen VMA1 ATPasa de
Saccharomyces cerevisiae (J. Thorner).
PROPIEDADES Y USO
escindir 1 μg de plásmido de control linealizado con pBSvdeX
XmnI en 3 horas a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl.
Suplemento 1X NEBuffer™ PI-SceI con BSA purificado
Incubar a 37 °C
1X NEBuffer™ PI-SceI
10 mM MgCl 2
1 mM DTT
10 mM Tris-HCl
100 mM KCl
(pH 8,6 a 25 °C)

Diluyente B
Tris-HCl
10 mM DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
500 µg/ml BSA
Glicerol al 50 %
NaCl 300 mM
pH 7,4 a 25 °C
1
4
BsiHK
AI
Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen BsiHKAI clonado
de Bacillus stearothermophilus (PC Shaw)
Digestión de enzimas de restricción.
PROPIEDADES Y USO

1
5
PstI PstI tiene una versión de alta fidelidad PstI- HF® (NEB #R3140).
en 5 a 15 minutos con la flexibilidad de digerir durante la noche sin
degradación del ADN. Diseñadas teniendo en cuenta el
rendimiento, las enzimas de restricción HF son completamente
activas en una gama más amplia de condiciones, lo que minimiza
los productos fuera del objetivo y ofrece flexibilidad en el diseño
experimental.
Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen PstI de Providencia stuartii
164 (ATCC 49762).

Los siguientes reactivos se suministran con este producto
PROPIEDADES Y USO
Una unidad se define como la cantidad de PstI requerida para
digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37°C en un volumen de reacción
total de 50 µl.
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)
Diluyente C
NaCl 250 mM
10 mM Tris-HCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
200 µg/ml BSA

50 % Glicerol
0,15 % Triton® X-100
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
BspMAI
PstI-HF
1
6
CviAII Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen CviAII del virus
Chlorella PBCV-1 (JL Van Etten).
Endonucleasas de restricción CG, Productos de enzimas de

PROPIEDADES Y USO
1
7
PvuII PvuII tiene una versión de alta fidelidad PvuII- HF® (NEB #R3151
).
en 5 a 15 minutos con la flexibilidad de digerir durante la noche sin
degradación del ADN. Diseñadas teniendo en cuenta el
rendimiento, las enzimas de restricción HF son completamente
activas en una gama más amplia de condiciones, lo que minimiza

los productos fuera del objetivo y ofrece flexibilidad en el diseño
experimental.
Fuente del producto
Una cepa de E.coli que porta el gen PvuII de Proteus vulgaris
(ATCC 13315).
PROPIEDADES Y USO
total de 50 µl.
1X NEBuffer™ r3.1
Incubar a 37°C
1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl 2
(pH 7,9 a 25 °C)

Diluyente B
10 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
500 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
No
Isosquizómeros
PvuII-HF
1
8
BtgZI Fuente del producto
Una cepa de E.coli que porta el gen BtgZI clonado de Bacillus
thermoglucosidasius (X. Pan)

PROPIEDADES Y USO
1
9
SalI-
HF

NEB realiza controles de calidad extensivos en todas las enzimas
de restricción estándar y de alta fidelidad (HF). A continuación, se
muestran ejemplos de estudios de contaminación por nucleasas
para algunas de nuestras enzimas de restricción HF.
Fuente del producto
Una
cepa
de E.
coli
que
porta
el gen
SalI
clonado y modificado de Streptomyces albus G (ATCC 49789)
Los siguientes reactivos se suministran con este producto
PROPIEDADES Y USO
digerir 1 μg de ADN λ (digerido con HindIII) en 1 hora a 37 °C en
un volumen de reacción total de 50 μl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato

(pH 7,9 a 25 °C)
Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50
mM DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50 %
300 µg/ml BSA
pH 7,5 a 25 °C
Isosquizómeros
SalI
2
0 FseI
Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen FseI clonado de la especie
Eul1b de Frankia (NRRL 18528).

Endonucleasas de restricción CG,
Productos de enzimas de restricción calificados para ahorrar
tiempo
reactivos de NEB,
PROPIEDADES Y USO

2
1
EcoNI Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen EcoNI clonado
de Escherichia coli CDC A-193 (ATCC 12041)
PROPIEDADES Y USO

2
2
SpeI-
HF
NEB realiza controles de calidad extensivos en todas las enzimas
de restricción estándar y de alta fidelidad (HF). A continuación, se
muestran ejemplos de estudios de contaminación por nucleasas
para algunas de nuestras enzimas de restricción HF.
Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen SpeI clonado y modificado de
la especie Sphaerotilus (ATCC 13923)

PROPIEDADES Y USO
digerir 1 μg de ADN de pXba-XbaI en 1 hora a 37 °C en un
volumen de reacción total de 50 μl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
Diluyente C
Tris-HCl 10 mM
250 mM NaCl
1 mM DTT
0,1 mM EDTA
0,15 % Triton® X-100
200 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C

Isosquizómeros
AhlI
BcuI
2
3
ClaI Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen ClaI de Caryophanon
latum L (ATCC 49862).

2
4
StyD4I Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen StyD4I clonado de Salmonella
typhi D4 (ES Anderson).
PROPIEDADES Y USO
total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
Diluyente B
10 mM Tris-HCl
300 mM NaCl

1 mM DTT
0,1 mM EDTA
500 µg/ml BSA
50 % Glicerol
pH 7,4 a 25 °C
Metilación de dcm : Bloqueada por superposición
Metilación de CpG: Deteriorada por superposición
Isosquizómeros
Bme1390I
BmrFI
BstSCI
MspR9I
ScrFI
2
5
CviKI-
1
CviKI-1 es una endonucleasa de restricción con 4 sitios de
reconocimiento esperados, así como hasta once sitios relajados no
afines (sitios estrella).
Fuente del producto
Una cepa de E. coli que lleva el gen de restricción CviKI clonado
y modificado derivado de CA-1A, un virus Chlorella .
Endonucleasas de restricción CG
digerir 1 µg de ADN de pBR322 en 1 hora a 37 °C en un volumen

PROPIEDADES Y USO
2
6
TspMI Fuente del producto
Especie Thermus (P. Sharma)
PROPIEDADES Y USO
digerir 1 µg de ADN de pBC4 en 1 hora a 75 °C en un volumen de
1X tampón rCutSmart™
Incubar a 75 °C

Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
Diluyente B
Tris-HCl 20 mM
300 mM NaCl
1 mM DTT
1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50 % Glicerol
0,1 % Triton® X-100
pH 8 a 25 °C
No
Isosquizómeros
Cfr9I
Pequeño
XmaI

@37°C: 10%
@65°C: 100%
2
7
2
8
XbaI Fuente del producto
Una cepa de E. coli que porta el gen XbaI de Xanthomonas badrii
(ATCC 11672).
PROPIEDADES Y USO
digerir 1 µg de ADN λ (digerido dam - /HindIII) en 1 hora a 37°C
en un volumen de reacción total de 50 µl.
Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
NEBuffer™ r1.1: <10 %

Diluyente A
Tris-HCl
10 mM NaCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Metilación de dam : bloqueada por superposición de metilación de
dcm : no sensible
Metilación de CpG: no sensible
2
9
3
0
XmnI Fuente del producto
Una cepa de E.coli que porta el gen XmnI de Xanthomonas
manihotis 7AS1 (ATCC 49764).
PROPIEDADES Y USO
total de 50 µl.

Incubar a 37°C
Acetato de potasio
50 mM Tris-acetato
(pH 7,9 a 25 °C)
NEBuffer™ r3.1: <10 %
Diluyente A
Tris-HCl
10 mM KCl 50 mM
DTT
1 mM EDTA 0,1 mM
Glicerol al 50 %
pH 7,4 a 25 °C
Isosquizómeros
asp700i
mroxi
pdmi

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