Este documento describe diferentes técnicas de fecundación in vitro utilizadas en la reproducción animal, incluyendo la inseminación artificial, la maduración y fecundación de ovocitos in vitro, y la transferencia de embriones. El objetivo es mejorar las características genéticas de las razas productivas y reducir costos para los ganaderos.

3.  El presente ensayo está destinado para el
aprendizaje de las nuevas técnicas de
inseminación, por las cuales se pueden
hacer mejoras genéticas de las distintas
razas que se utilizan para la producción de
leche, ya que se utilizan distintas
dependiendo de la zona ganadera en la
que se utilicen. Los ganaderos podrán ver
las mejoras genéticas de sus animales y al
mismo tiempo reducir gastos al no tener
que mantener tantos sementales.

4.  La fecundación in vitro es de gran apoyo en
el desarrollo de técnicas que tienen un
potencial importante en la reproducción
animal, tales como la micro manipulación de
embriones, producción de quimeras y
animales transgénicos. El desarrollo de esta
biotecnología permite la producción de
embriones avanzados compatibles con la
transferencia a hembras receptoras.

5.  En los últimos años con el desarrollo de
métodos que facilitan la colección de
ovocitos directamente de animales vivos, la
producción de embriones in vitro ha sido
introducida en los programas de selección. Es
importante destacar que esta técnica es la
única opción disponible para producir crías
de hembras valiosas que por causas no
genéticas son estériles y por lo tanto son
eliminadas de los sistemas productivos.

6.  Desde el punto de vista biológico, el
establecimiento de la fecundación in vitro es
una alternativa valiosa para la investigación
de los mecanismos celulares y moleculares
involucrados en las interacciones gaméticas,
fecundación y desarrollo embrionario
temprano. Es bien conocido que los cigotos
pueden ser co-cultivados in vitro con células
oviductales o en el medio previamente
condicionado por estas células desarrollando
hasta un 30% a blastocitos, no obstante, la
capacidad de implantación de los mismos es
variable luego de la transferencia en vacas
receptoras.

7.  Son escasos los antecedentes relacionados
con las tasas de desarrollo embrionario
obtenidos a partir de ovocitos
recolectados de vacas que van al
sacrificio. Risopatron y col. (1989),
obtuvieron una tasa de desarrollo de 42,6%
de embriones de 4-8 células mientras que
comunicaron la obtención de embriones
de 2-4 células a las 48 horas y blastocitos a
los 7 días pero no mencionan el porcentaje
de desarrollo obtenido.

8.  La inseminación artificial es un método en el
cual se lleva a cabo una reproducción asistida
que consiste en el depósito de espermatozoides
de manera no natural en la hembra mediante
instrumental especializado y utilizando técnicas
que reemplazan a la copulación, ya sea en
óvulos, en el útero, en el cérvix o en las trompas
de Falopio, con el fin de conseguir un
embarazo.

9.  Esta técnica es usada en animales para
propagar buenas cualidades de un macho en
muchas hembras. Es especialmente empleada
en caballos, vacas, cerdos, perros con pedigrí y
ovejas. El semen se recolecta atravez de la
técnica de pajillado, este se congela y se utiliza
cuando las hembras están en celo, así se
obtienen mayor numero de hembras preñadas.

10.  1.-Se aprovecha mejor a un macho con buenas
cualidades físicas.
 2.- Mejoramiento genético en las crías.
 3.-Evita transmisión de enfermedades entre los
animales de una misma raza.
 4.-Aumenta la fertilidad de las hembras.
 5.-Uso de sementales que están en malas
condiciones físicas que no afecten las cualidades
genéticas de los embriones.
 6.- Velocidad de cubrimiento de un solo macho a
varias hembras.
 7.- Reduce costos, ya que no se mantienen a varios
sementales.

12.  Existen diversas formas de fecundación
in vitro a estas las podemos dividir en dos
grupos:
 La fecundación de los ovocitos dentro
del útero de la madre por medio de
técnicas de súper ovulación, aspiración
e inseminación artificial, esta última
empleada para la fecundación de los
óvulos obtenidos de la donadora.

13.  Y la segunda técnica es la técnica de
aspiración de óvulos por medio de un
catéter adaptado a una bomba al vacío,
la cual va a aspirar a todos los óvulos
maduros de la donadora; para
consiguiente a esto, llevar a los óvulos
obtenidos al laboratorio para la
clasificación y su correcta Fecundación in
vitro. La técnica de fecundación in vitro es
una técnica muy segura tanto como para
las donantes como para las receptoras, ya
que investigaciones posteriores a estas los
resultados obtenidos son excelentes.

14.  Colección de ovarios y maduración in vitro de ovocitos. Los
ovarios fueron obtenidos en el matadero y transportados
dentro de una hora posterior al sacrificio de los animales,
en un termo a 35°C con una solución salina fisiológica al
0,85 %, suplementada con 100 UI/ml de penicilina y 100
µg/ml de estreptomicina. Los ovocitos fueron aspirados
mediante punción de folículos de 3 a 8 mm de diámetro
por medio de una aguja 18-g acoplada a una jeringa de
10 ml. El contenido de la aspiración fue colectado en tubos
plásticos de 15 ml, el cual se dejó decantar por 5 minutos
mantenido en un baño de agua a 39 °C. Luego con pipeta
Pasteur se aspiró el fondo del tubo colocando el material
en placas Petri plásticas Falcon 1007. Se procedió a la
búsqueda y selección de los complejos cúmulo-ovocito
(CCO) por medio de un microscopio estereoscópico a un
aumento de 15x. Solamente ovocitos rodeados por un
cúmulo compacto y citoplasma homogéneo fueron
utilizados para el cultivo.

15.  Previo a la maduración, los ovocitos fueron
lavados manualmente con pipeta Pasteur 3
veces en 2 ml de fosfato buffer salino (FBS)
suplementado con 100 UI/ml penicilina-100
µg/ml de estreptomicina y albúmina bovina
sérica 0,3 % (BSA fracción V2) y 3 veces con 2 ml
de medio de maduración constituido por TCM
199 (M199) suplementado con suero fetal bovino
inactivado 10 % (SFB), hormona folículo
estimulante 0,08 g/ml (NIH-FSH-P1); estradiol
1µg/ml; piruvato de sodio 0,2 mm; sulfato de
gentamicina 50 µg/ml (Saeki y Col. 1991).

16.  De 10 a 12 ovocitos fueron colocados en
gotas de 50µl de medio depositadas en una
placa de Petri plástica Falcón 1007, las cuales
fueron cubiertas con aceite mineral y
finalmente incubadas a 39 °C, CO2 al 5 % y
humedad relativa de 95 % durante 22 horas.
Luego de este período, una muestra de los
ovocitos fue teñida con orcina acética al 1 %
para verificar maduración nuclear (metafase
y primer corpúsculo polar).

17.  Esta técnica es utilizada por muchos
granaderos ya que así pueden mejoras las
características genéticas de sus animales
haciéndolos resistir algunas enfermedades o
mejorando su cuerpo para la supervivencia de
cierta raza, también de que reduce costos de
mantenimiento de sementales, ya que con
uno solo se pueden cubrir más hembras y por
lo mismo tener más crías. Aparte de que el
semen se puede mantener congelado para
próximas inseminaciones o se pude exportar y
hacer experimentos con él para mejorar la
genética y prevenir enfermedades genéticas.

18.  Herradón, P.G, Quíntela, L. A. Becerra, J, J.
Ruibal, S. y Fernández, M., Departamento de
Patología Animal (Unidad de Reproducción y
Obstetricia); Facultad de Veterinaria.
Universidad de Santiago de Compostela. .
Volumen 15 Lugo. España., 2007.
 Revista de la Facultad de Ciencias
Veterinarias. Universidad Central de
Venezuela., Facultad de Ciencias Veterinarias.
Universidad Central de Venezuela. Maracay,
Estado Aragua. Venezuela., 2012.