Tesis para optar por el Grados de MSc. Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad de Panamá.

1. Prof. Dr. Reinaldo de Armas PhD
BIOTECNOLOGÍA ANIMAL
LCPA - 405
Módulo. 5

2. Módulo 5. Empleo de las técnicas
de Biotecnología en la reproducción:
Programas MOET
Fecundación in vitro
Creación de bancos de germoplasma
Análisis de sexo y marcadores genéticos.
Técnicas de micro manipulación de gametos
y embriones

3. VIAS POSIBLES DE PRODUCCIÓN DE
EMBRIONES
 Superovulación.
 Producción in vitro:
a) Post mortem.
b) Hembras ovarectomizadas.
c) Aspiración folicular in vivo.

4. SUPEROVULACIÓN

5. FECUNDACIÓN DE LA HEMBRA
DONANTE

6. COLECTA DE EMBRIONES

7. BUSQUEDA Y SELECCIÓN DE
EMBRIONES

8. TRANSFERENCIA

9. PRODUCCIÓN IN VITRO DE EMBRIONES
a) Post mortem.
b) Animales vivos Hembras

10. MEDIOS EMPLEADOS EN LA FIV
•Medio de maduración (TCM 199 + FSH)
•TALP hepes (medio para procesamiento del semen)
•Medio de fertilización (TCM 199 + heparina)
•Medio de desarrollo (TCM 199 + IGF1 y otros aditivos o
OSF)

11. COLECTA Y SELECCIÓN DE LOS OVOCITOS

12. MADURACIÓN IN VITRO

13. Procesamiento
del semen

14. FERTILIZACIÓN
DE LOS
OVOCITOS

15. CULTIVO DE DESARROLLO

16. De acuerdo a los problemas planteados, los beneficios
son:
•Utilización en los programas de mejora genética a menor costo y/o con
resultados más rápidos que los logrados con las metodologías disponibles.
•A través de mellizos, producir 30-40% más de terneros por vaca y una
ganancia neta superior al 20% con respecto a un sistema clásico.
•Realizar un máximo aprovechamiento con el menor costo del semen de
mayor calidad y precio.
•Aprovechar vacas de alto valor descartadas de la reproducción que
actualmente significan una pérdida permanente de genética.
•Producir crías a partir de hembras gestantes, impúberes o que no
responden a la superovulación.
•Realizar cambios de raza, cruzamientos, etc. con bajos costos relativos y en
cortos períodos.
* Crear bancos de germoplasma con costos competitivos a nivel
internacional.

17. Congelación de Semen:
Diluentes crioprotectores:
Citrato yema
Glicerina leche
Biladyl
Triladyl
Andromed
Métodos de congelación:
Ámpulas
Pastillas
Pajuelas

21. Congelación de embriones y ovocitos:
En caso de que las receptoras no estén disponibles.
Transporte a largas distancias o intercambio
comercial.
Preservación de material genético.
Fuente de ovocitos para FIV u otras manipulaciónes.

22. - 7 0
C
- 32 0
C
- 196 0
C
t 0
C
min.
3 6
seeding
0. 3 0
C / min.
5 min.
Equipo de congelación programable
Equipo de congelación manual

23. Resultados de la transferencia de embriones congelados en glicerol (3 pases)
y en etilenglicol (transferencia directa).
Tratamiento de
congelación
Transferencias Preñeces a 60 días
# %
Glicerol 68 26 38.2 a
Etilenglicol 135 71 52.6 b
Letras diferentes difieren estadísticamente p >0.05

24. Sexaje de Espermatozoides
Principios importantes de la técnica:
El cromosoma X tiene 3,8% mas ADN (material genético) que el Y.
El colorante, H33342, se une al ADN cuantitativamente, lo que es decir,
entre mas ADN, mas cantidad se adhiere.
Cuando un has de luz a cierta longitud de onda es proyectada, el
colorante adherido al espermatozoide se hace fluorescente,
Así el espermatozoide X produce un 3,8% mas luz azul que el Y .
El citómetro de flujo clasificador de espermatozoides tiene los
componentes para llevar a cabo los pasos descritos, incluyendo un laser
para proporcionar la luz a la longitud de onda de correcta para excitar el
colorante Un detector para medir la cantidad de luz y un computador para
analizar la información.
Los espermatozoides son bombeados a través de un delgado tubo que
vibra saliendo en pequeñas gotas. Las gotas que contienen espermas X
reciben una carga eléctrica + y son desviados a un tubo colector de
espermatozoides hembras. Las gotas con espermas Y son cargados - y
desviados a un tubo colector de espermatozoides machos.
Los espermatozoides muertos y aquellos que no han podido ser sexados,
no son recogidos.

25. Diagrama del equipo de sexaje de
semen
Limitantes de la técnica:Limitantes de la técnica:
•Alto costo del equipamiento y
entrenamiento del personal.
•El procedimiento no ofrece
100% de separación.
•El tiempo que demora en
procesarse todo el eyaculado es
largo y es por esto que las
pajillas producidas son de baja
concentración (1 a 3 x 106
esp/ml).
•Alto costo de las pajillas.
•Resultados de preñez
ligeramente más bajos.

26. Sexado deSexado de
embrionesembriones

27. Inseminación intracitoplasmáticaInseminación intracitoplasmática

28. Diferentes métodos de transgénesisDiferentes métodos de transgénesis
Objetivo:Objetivo:
Modificación genética para producir proteínasModificación genética para producir proteínas
de interés (productivo, salud, medicina).de interés (productivo, salud, medicina).
Se logra a través de:Se logra a través de:
Mediado por retrovirusMediado por retrovirus
Mediado por espermatozoosMediado por espermatozoos
QuimerasQuimeras
Microinyección de ADNMicroinyección de ADN

29. Clonaje de embrionesClonaje de embriones

30. Clonaje de animales adultos
Células de la
Granulosa
Cultivo de Células Primarias
aspiradas de folículos >5mm
(células de la granulosa)
Fibroblastos
Adultos o jóvenes
Diferentes líneas celulares
Múltiples pases ( 10 a 11 Pases)

31. Bisección y selección del
citoplasma receptor * *
Pareo celular
1st
and 2nd
Fusión
Eliminación del cumulus y zona
pelúcida * **
Activación, cultivo
y transferencia

32. Electrofusión