Amilasa enzima vegetal amilaza enzima vehet

La amilasa es la enzima encargada de degradar el almidón
mediante un proceso enzimático de hidrolisis, la hidrolisis del
almidón es el paso inicial para obtener los azucares utilizados
en la fermentación.
A partir de la siguiente practica se permitió que el alumno
utilizara los conocimientos generados en el modulo de energía
y consumo de sustancias fundamentales, así como analizarlos
y correlacionarlos.
INTRODUCCION
INTRODUCCION
INTRODUCCION

• Determinar la presencia de
enzimas hidrolíticas durante la
germinación
por el método colorimétrico,
tomado como factor el tiempo de
actividad enzimática.
OBJETIVO
OBJETIVO
OBJETIVO

0
Germinación. El inicio del crecimiento de una
espora, semilla, yema o estructura similar.
Cinética enzimática. Estudio de la velocidad de
reacción generada por enzimas.
GENERALIDADES
GENERALIDADES
GENERALIDADES

11 TUBOS DE ENSAYE (16X150
MM)
MM)
MM)
1 GRADILLA
1 GRADILLA
1 GRADILLA

5 PIPETAS GRADUADAS DE 1 ML
2 PIPETAS DE 5 Ó 10 ML

2 VASOS DE PRECI PI TADOS DE
250 ML
250 ML
250 ML
1 MECHERO CON
1 MECHERO CON
1 MECHERO CON
MANGUERA
MANGUERA
MANGUERA

1 SOPORTE UNI VERSAL CON
ANILLO DE FI ERRO
ANILLO DE FI ERRO
ANILLO DE FI ERRO
1 EMBUDO DE TALLO
1 EMBUDO DE TALLO
1 EMBUDO DE TALLO
CORTO DE PLÁSTI CO
CORTO DE PLÁSTI CO
CORTO DE PLÁSTI CO

1 MORTERO DE PORCELANA CON PI STILO

Sol uci ón de gl ucosa al 1%
Agua desti l ada
Agua desti l ada
Agua desti l ada
Áci do 3, 5-di ni trosal i cí l i co (DNS) en frasco
ámbar
ámbar
ámbar
Sol uci ón yodo-yodurada: I -KI en una soluci ón
de HCl 0. 05 N, en frasco ámbar.
Sol uci ón de cl oruro de cal i co-cloruro de sodi o:
CaCl
CaCl
CaCl 20 mM-NaCl 200 mM
20 mM-NaCl 200 mM
20 mM-NaCl 200 mM
Sol uci ón de al mi dón al 0. 2%
Sol uci ón amorti guadora de acetatos pH=5.
2
2
2
2
2
2

EQUIPO DE
LABORATORIO
POR GRUPO DE TRABAJO

1 BALANZA GRANATARI A
2
2
2
ESPECTROFOTÓMETROS
ESPECTROFOTÓMETROS
ESPECTROFOTÓMETROS

8 CELDAS PARA ESPECTROFOTÓMETRO

10-15 SEMI LLAS DE MAÍZ (ZEA MAYS) O
FRIJO (PHASEOLUS VULGARIS) CON 7 A 8
DÍAS DE GERMI NACIÓN.
1 PLUMÓN I NDELEBLE
JABÓN Y FRANELA
3 SOBRES DE GASA
MASKI NG TAPE
5 LIGAS

NOTA
EL GERMINADO NO DEBE SER COMPRADO EN EL SUPERMERCADO.

CURVA ESTÁNDAR DE
ALMIDÓN:
1

2 ml de solución de almidón al 0.2% en
solución amortiguadora de acetatos a pH =
5.0.
2 ml de solución de CaCl2 20 mM-NaCl 200
mM
1 ml de agua destilada
1.1
Se Mezcló en un tubo de ensayo (16x150 mm)
etiquetado como “C” (curva estándar) los
siguientes reactivos:

1 ml de la mezcla del tubo “C” y se
adicionó 9 ml de agua destilada.
Se agitó
1.2 Se preparó una dilución 1:10 de la mezcla
anterior, es decir:
y etiquetó como Mezcla “C” dilución 1:10.

Para la elaboración de la curva estándar de
almidón: Se etiquetó 6 tubos de ensaye (16x150
mm) con números consecutivos (1-6)
Se adicionó los reactivos indicados
1.3
en la Tabla 1, y posteriormente se agitó.

1.4.
Se calibró el espectrofotómetro con la solución
blanco a una absorbancia de cero,
con una longitud de onda de 620 nm.
1.5.
Se determinó la absorbancia de los tubos 2 a 6.

2. PREPARACIÓN DE LA
MUESTRA DE PROTEÍNA:
2

2.1.
Se pesó 12 semillas germinadas de maíz con 7 días de
germinación, para obtener amilasa. (61.2 gr).
2.2.
Se molió las semillas en un mortero usando 3 ml de
agua destilada por cada gramo
de tejido.
2.3.
Se filtró la molienda con un embudo de plástico y
dos gasas.

2.4.
Se mantuvo el filtrado en un tubo de ensaye
de 16x150 mm hasta sedimentar
y posteriormente en baño de hielo.
2.5.
Se diluyó el filtrado 1:10 con la solución
amortiguadora de acetatos.
2.6.
Se preparó la mezcla de reacción en dos
tubos de ensaye (16x150 mm) de acuerdo
a la siguiente Tabla.

4.1.
Se prepararon 10 tubos de ensaye de
16x150 mm agregando a cada uno 1 ml
de DNS.
4.2.
Se adicionaron 3 ml de agua destilada a
un tubo, para calibrar el
espectrofotómetro a 100% de
transmitancia con una longitud de onda
de 575 nm.

4.3.
El primer tubo es tiempo 0, se hicieron
mediciones a intervalos de 5 minutos
durante 40 minutos a cada uno de los tubos
a intervalos de
5 minutos durante 40 minutos.
4.4.
Se calentaron los tubos durante 10 minutos a
baño María.

4.5.
Se agregó a cada tubo 8 ml de agua destililada.
4.6.
Se enfriaron los tubos en un vaso de precipitados de
250 ml con hielo.
4.7.
Se tomó la lectura de cada uno de los tubos
utilizando las celdas para
espectrofotómetro a una absorbancia de 575 nm.

CURVA DE CALIBRACIÓN
CON GLUCOSA
4

¿A qué grupo pertenece la enzima amilasa vegetal?
Pertenece al grupo de las hidrolasas, ya que a partir de una reacción de
hidrolisis (adición de los iones hidrogeno e hidroxilo del agua a una
molécula, con la consiguiente escisión de dos o mas moléculas sencillas)
se forman fragmentos de glucosa.
La amilasa es una enzima glucosidasa, debido a que escinde las
unidades terminales de glucosa.

¿Qué diferencia bioquímica existe entre la glucosa y el almidón?
¿Cuál es la relación entre ellos?
La glucosa es un azúcar hexosa que se encuentra en todos las células, en la savia de
las plantas y en los tejidos tisulares de los animales. Es el producto final de la
degradación del almidón, del glucógeno y de la celulosa asi como componente de
otros polisacáridos.
El almidón es un polisacárido que se compone de una cadena larga de glucosas
unidas por enlaces alfa 1,4 sin ramificar (amilosa) o ramificada (amilopeptina)
mediante enlace alfa 1,6. Es el hidrato de carbono de las plantas el cual se encuentra
como gránulos de almidón en los amiloplastos. Es hidrolizado por los animales
durante la digestión por acción de las amilasas, convirtiéndose en glucosa.

¿Por qué aparece la enzima en el germinado de maíz?
La presencia de amilasa es detectada en tejidos en desarrollo de las semillas, debido
a que esta es necesaria para a partir del almidón (hidrato de carbono de reserva en
plantas) degradarlo a dextrina, maltosa o glucosa. El almidón es usado como
sustrato.
La glucosa en plantas es necesaria para ser usada como energía química (ATP) en la
respiración celular.

¿Cuáles son las condiciones que alteran el funcionamiento de las
enzimas?
Concentración enzimática. La velocidad de reacción aumenta cuando aumenta la
concentración de sustrato hasta que la enzima se satura (fenómeno estudiado por la
cinética enzimática).
Temperatura. A mayor temperatura el movimiento de las partículas es mayor
aumentando la velocidad de reacción, si temperatura excede los valores óptimos, la
enzima pierde su estructura y se desnaturaliza.
pH. Las enzimas tienen valores de pH en los cuales pueden catalizar reacciones, si se
encuentran en un valor distinto al optimo se desnaturalizan y dejan de actuar.
Presencia de inhibidores. Estos disminuyen o detienen completamente la actividad
enzimática.

¿Cómo se distingue bioquímicamente la degradación del almidón
por amilasa y por fosforilasa?
La alfa amilasa hidroliza al azar los grupos alfa 1,4 del almidón y de otros
polisacáridos glucosados. La beta amilasa elimina unidades de maltosa.
La fosforilasa cataliza la rotura progresiva por fosforólisis de polisacáridos de
glucosa como el almidón produciendo glucosa 1-fosfato como producto

¿Cuál es la utilidad del coeficiente de correlación en el análisis de
regresión lineal para la elaboración de la curva de calibración?
A partir de la relación entre dos variables, permite saber hasta que punto están
relacionadas linealmente.

Se realizo exitosamente una practica de laboratorio la cual contiene los
siguientes puntos:
Elaboración y preparación de una muestra de almidón contenida en 12 semillas
de maíz.
Elaboración de la curva estándar de almidón.
Al termino de la practica se desecharon los reactivos en la tarja y se limpió el
material de laboratorio proporcionado anteriormente.
La absorbancia permite saber la cantidad de luz absorbida por una muestra,
esta depende de la cantidad de glucosa presente en la muestra.
Se cumplió el objetivo ya que a través de la practica el alumno comprobó la
presencia de enzimas hidrolíticas durante la germinación tomando como factor
el tiempo de actividad enzimática.
ConclusioN
ConclusioN
ConclusioN

Jimeno, A y ballesteros, M. (2003, pp 108,230,232-233, 99-101). Biología.
Editorial Santillana, México.
Rodriguez, C y Lopez, V. 2022. Tamizaje de microorganismos productores de
amilasas. Mexican journal of Biotecnology.
Lawrence, E. (2003, pp. 314). Hidrolasa. Diccionario Akal de términos
biológicos. España. Pearson.
Lawrence, E. (2003, pp. 314). Hidrolisis. Diccionario Akal de términos
Lawrence, E. (2003, pp. 37). Almidón. Diccionario Akal de términos biológicos.
España. Pearson.
Lawrence, E. (2003, pp. 40). Amilasa. Diccionario Akal de términos biológicos.
España. Pearson.
Lawrence, E. (2003, pp. 288). Glucosa. Diccionario Akal de términos biológicos.
España. Pearson.
Lawrence, E. (2003, pp. 269). Fosforilasa. Diccionario Akal de términos
Lawrence, E. (2003, pp. 282). Germinación. Diccionario Akal de términos

Amilasa enzima vegetal amilaza enzima vehet

Recomendados

Recomendados

Más contenido relacionado

Similar a Amilasa enzima vegetal amilaza enzima vehet

Similar a Amilasa enzima vegetal amilaza enzima vehet (20)

Último

Último (20)

Amilasa enzima vegetal amilaza enzima vehet