Investigación en la cuantificacion e identificacion de compuestos fenolicos en cascara de rambutan

1. APROVECHAMIENTO DE CASCARA DE
RAMBUTAN COMO FUENTE DE
ANTIOXIDANTES
Christian Hernández Hernández1, Juan Ascacio V.2, Antonio
Aguilera C.1, Heliodoro de la garzaT.1
1.- Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro
2.- Universidad Autónoma de Coahuila

2. • El rambután del vocablo malayo “rambut” que
significa “pelo”, pertenece a la familia de las
Sapindaceae, se introdujo hace 55 años en el
estado de Chiapas y es originaria de Asia.
INTRODUCCIÓN

3. • El aprovechamiento integral de las frutas es
un requerimiento y a la vez una demanda
que deben cumplir los países que desean
implementar las denominadas “tecnología
limpias” o “tecnologías sin residuos” en la
agroindustria.

4. • El interés que se tiene por estudiar la
cascara de rambután son sus propiedades
antioxidantes que aporten beneficios a
nuestra salud
• Actualmente existe un interés por el
estudio de alimentos con un alto
contenido en antioxidantes naturales, como
son los compuestos fenólicos.
• Esto se ha asociado con la disminución en
la aparición de enfermedades
cardiovasculares, cáncer y otras
enfermedades crónico-degenerativas.
JUSTIFICACIÓN

5. ¿Qué son y para qué sirven los antioxidantes?
Son compuestos químicos que el cuerpo humano utiliza para eliminar
radicales libres.
sustancias químicas muy reactivas
que introducen oxígeno en las
células y producen la oxidación de
sus diferentes partes.
¿Qué es un radical libre?

6. Etapa I: Obtención del extracto Etapa II: Determinaciones de
azucares totales y reductores.
Etapa III: Determinación del
contenido fenólico
Etapa V: Separación e identificación
de compuestos de la cascara de
rambután en HPLC.
Etapa IV: Purificación de la muestra en
cromatografía de columna.
Etapa VI: Aprovechamiento de la
cascara de rambután para
implementarlo en la industria
alimentaria como una infusión (bebida
funcional).
MATERIALES Y MÉTODOS

7. • Se pesaron 20 gr de la muestra y
se pusieron en 100 mL de agua a
60 ° C por 30 minutos, agitando
cada 5 minutos.
• Se filtro la muestra con una tela
haciendo una percolación en un
vaso de precipitado.
ETAPA I: OBTENCIÓN DEL EXTRACTO

8. • Azucares totales (Dubois 1959)
Se hizo una curva de calibración
preparando una dilución 1: 200
utilizando sacarosa (1000 ppm) como
estándar, a una absorbancia de 480 nm.
Tubo 0 1 2 3 4 5
Solución
Madre (mL)
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
Agua
Destilada(mL)
1 0.8 0.6 0.4 0.2 0
Fenol
Sulfato (mL)
2 2 2 2 2 2
Volumen total
(mL)
3 3 3 3 3 3
• Azucares reductores (Miller 1959)
Se hizo una curva de calibración que se
preparó una dilución 1:400, utilizando
fructosa como estándar, a una absorbancia
de 540 nm..
Tubo 0 1 2 3 4 5
Solución
Madre
(mL)
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Agua
Destilada
(mL)
0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
D.N.S (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Volumen
Total (mL)
1 1 1 1 1 1
ETAPA II: DETERMINACIONES DE AZUCARES
TOTALES Y REDUCTORES.

9. • Polifenoles hidrolizables
Se hizo una curva de calibración
preparada con ácido gálico. usando el
reactivo de Folin-Ciocalteau (FC) con una
dilución 1:80, a una absorbancia de 750
nm.
• Polifenoles condensados
Se hizo una curva de calibración
preparada con catequina. Con una dilución
1:100, a una absorbancia de 460 nm.
Concentración
ppm
Solución Madre (Ac.
Gálico)
Agua
0 0 µL 400 µL
100 80 µL 320 µL
200 160 µL 240 µL
300 240 µL 160 µL
400 320 µL 80 µL
500 400 µL 0 µL
Concentración ppm Solución Madre
(Catequina)
Agua
0 0 µL 500 µL
100 100 µL 400 µL
200 200 µL 300 µL
300 300 µL 200 µL
400 400 µL 100 µL
500 500 µL 0 µL
ETAPA III: DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO
FENÓLICO

10. ETAPA IV: PURIFICACIÓN DE LA MUESTRA EN
CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA
Para la purificación de la muestra se
utilizó Amberlitas modelo XAD-16. Se
empaco a la columna las amberlitas,
luego se agregó la muestra a la
columna.

11. La Cromatografía Líquida de Alta
Resolución (HPLC) ha sido una
herramienta muy útil para la
identificación de compuestos fenólicos
en frutas, vegetales y plantas.
Para este análisis se necesitaron de
viales para la incorporarlo al equipo
HPLC, Las cuales previamente se
introdujeron y se inyectaron en el
equipo de HPLC.
ETAPA V: SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS
DE LAS FRACCIONES PURAS DE LA CASCARA DE RAMBUTÁN
EN ESTUDIO HPLC.

12. Basados en la legislación de los antioxidantes
alimentarios, en el Codex Alimentarius.
Para hacer la infusión se hicieron los cálculos
que de acuerdo a la concentración de
polifenoles totales obtenidos se hizo la
infusión.
ETAPA VI: APROVECHAMIENTO DE LA CASCARA DE RAMBUTÁN
PARA IMPLEMENTARLO EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA COMO
UNA INFUSIÓN (BEBIDA FUNCIONAL).

13. La prueba se realizó con 26 jueces
para las tres concentraciones de
la infusión que se analizaron
mediante la determinación de los
polifenoles totales calculados de
la muestra.
Muestra de
cascara de
rambután
Concentración mg/
dia
Muestra
1 g 10 1
1 g 100 2
1 g 190 3
Evaluación sensorial de la infusión.

14. RESULTADOS Y
DISCUSSIONES

15. Resultados
El contenido de azúcares totales se
determinó aplicando el método
Dubois (1959).
Discusiones
Muestra g/g de cascara de
rambután
Extracto de cascara de
rambután
0.662 ± 0.02
Al obtener 0.6625625 g/g cascara de rambután
deshidratada y molida, se puede decir que de
acuerdo a la falta de publicaciones dónde
podamos comparar con otros autores, este
trabajo contribuye con una de las primeras
pruebas del análisis de azucares totales en
casaras de rambután.
CUANTIFICACIÓN DE AZÚCARES TOTALES.

16. Resultados
Cantidad de azúcares reductores
presentes
Discusiones
Muestra g/g de cascara de
rambután
Extracto de cascara de
rambután
0.641 ± 0.02
CUANTIFICACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES
Al obtener una cantidad de 0.641 g/g de
cascara de rambután molida y deshidratada, y
que de acuerdo a que no hay reportes en el
cual indiquen o se compraren con la de otros
autores se podría decir que es de las primeras
pruebas en hacer un análisis de azucares
reductores en cascara de rambután.

17. Resultados
Determinación de polifenoles
hidrolizables por el método de Folin-
Ciocalteau (Makkar 1992).
Discusión
Muestra g/g de cascara de
rambután
Extracto de cascara de
rambután
0.156 ± 0.006
CUANTIFICACIÓN DE POLIFENOLES HIDROLIZABLES
comparándolo con Lai Teng et al., (2010),
reportaron 0.212 g/g de cascara de
rambután, lo cual quiere decir que el
extracto de cascara de rambután de esta
investigación tiene una diferencia de 0.056
g/g de cascara de rambután con lo
reportado de Lai Teng et al., (2010), ya que
puede diferenciarse al realizar la técnica o
tener algunas diferencias en cuanto a los
pesos de los reactivos.

18. Resultados
Determinación de polifenoles
condesados
Discusiones
Muestra g/g de cascara de
rambután
Extracto de cascara
de rambután
0.020 ± 0.009
CUANTIFICACIÓN DE POLIFENOLES CONDENSADOS
No se ha encontrado reporte alguno sobre
polifenoles condensados en cascara de
rambután, pero si en algunos frutos y
especialmente se ha reportado que la mayor
concentración de polifenoles condesados se
encuentran en las cascaras de los frutos según
Alma A. et al., (2012). También han revelado
que la presencia de proantocianidinas (taninos
condensados) varía según la parte del fruto
que se analiza.

19. Resultados
Polifenoles totales presentes en
cascara de rambután
Discusión
g/g de cascara de
rambután
Polifenoles hidrolizables 0.156694444
Polifenoles
condensados
0.020740741
Polifenoles totales 0.177435185
CONTENIDO TOTAL DE POLIFENOLES
Las suma de los polifenoles totales (hidrolizables
y condesados) que fue de 0.177435185 g/g de
cascara de rambután que convirtiéndolo a mg
obtenemos un total de polifenoles de 177.435185
mg/g de extracto cascara de rambután, que
comparado con Nont Thitilertdecha et al., (2008),
reportaron 393.2 mg/g de extracto de cascara de
rambután.

20. Resultados
Las fracciones etanolicas analizadas
mostraron varios compuestos, los cuales los
tres principales fueron:
IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS DE LAS FRACCIONES PURAS
DE LA CASCARA DE RAMBUTÁN EN ESTUDIO HPLC.
Geranina
Corilagina
Ácido elágico

21. De acuerdo con lo reportado por Nont T. et al.,
(2010), identificaron tres compuestos utilizando
como solvente metanol, mediante la
cromatografía de líquidos de alta resolución HPLC,
obteniendo tres compuestos principales: 1; Ácido
elágico, 2; corilagina y 3; geranina, los tiempos en
que se encontraron los compuestos Nont T. et al.,
(2010), reportaron ácido elágico a los (29.6 min),
corilagina (18.5 min), y geranina (21.8 min),
mientras que en este estudio fueron: ácido
elágico (31.2 min), corilagina (29.7 min), y la
geranina (26.1 min).
Geranina
Corilagina
Ácido elágico
Discusión

22. Resultados
Al realizar la prueba hedónica para las
tres concentraciones de la infusión, los
resultados mediante un análisis de
varianza sugirieron que una
concentración de 0.5663 gr en 240 mL
de agua es la más aceptada para los
consumidores.
Discusiones
Al no haber una evaluación sensorial de
alguna infusión de cascara de rambután
reportado o en el que se pueda comparar,
se puede decir que es la primera en hacerse
para la cascara de rambután.
EVALUACIÓN SENSORIAL DE LA INFUSIÓN
1 g ----------- 1774 mg 1 g ----------- 1774 mg 1 g ----------- 1774 mg
10 mg 100 mg 190 mg
X= 0.05 g X= 0.5636 g X= 1.0710 g

23. CONCLUSIONES
El aprovechamiento de la cascara de rambután como fuente de
antioxidantes nos llevan a obtener compuestos bioactivos importantes
como los polifenoles. Esto debido que al realizar las pruebas anteriores
nos damos cuenta que además de aprovechar la cascara se obtienen
buenos beneficios a la salud al consumirlo como una infusión (bebida
funcional).