Discusión de resultados de una prueba realizada sobre organismos coliformes totales

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Práctica 5: ORGANISMOS
COLIFORMES TOTALES Y FECALES
Equipo 5
Integrantes:
Chávez Esquivel Marco Rabindranath
García Úrsula Erick Omar
Hernández García Daniela Paola
 Jiménez Ávila Sofía
Romero Fernández Elisa Lizbeth
Vaca García Rodrigo

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Introducción
A menudo se les denomina "Organismos Indicadores"
Se definen como bacilos Gram negativos, aerobios o anaerobios
facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa con
producción de gas dentro de 48 h de incubación a 35°C.
Los organismos coliformes incluyen un gran grupo de muchos
tipos de bacterias que se encuentran en todo el medio ambiente.
Son comunes en el suelo y el agua superficial.
El recuento de los coliformes se efectúa por medio del número
más probable o por la técnica de vaciado en placa.
Bacterias Coliformes Fecales es un subgrupo de bacterias
coliformes totales que se encuentran en grandes cantidades en los
intestinos y excremento de los humanos y animales.
Los coliformes fecales son aquellos que tienen capacidad
de fermentar la lactosa con producción de gas a temperaturas de
44-45°C.

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Objetivos
Comprender la normatividad e
importancia de la
determinación de organismos
coliformes totales y fecales.
Emplear la metodología para la
determinación de organismos
coliformes totales y fecales.
Determinar organismos
coliformes totales y fecales
en muestras de alimentos y
aguas.
Comprender y aplicar las tablas
del NMP para reportar los
resultados de la determinación
de organismos coliformes.

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Materiales y equipos
Materiales Equipos
• 29 tubos de ensaye
• 1 frasco de dilución
• 3 pipetas de 1 mL
• 1 pipeta de 10 mL
• Asa bacteriológica
• Gradilla para tubos de ensaye
• Mechero
• Soporte universal
• Encendedor
• Esponja esterilizada
• Bata cubrebocas y cofia
• Autoclave
• Balanza granataria
• Refrigerador
• Incubadora a 35°±2°C
• Incubadora a 45°±2°C

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Soluciones
 1 piseta con benzal
 18 tubos de ensaye con 10 ml de Caldo EC
 9 tubos de ensaye con 10 ml de Caldo Lauril
Triptosa
 1 frasco con 225 ml de agua peptonada al
0.1%
 2 tubos con 9 ml de agua peptonada al 0.1%
 Muestra (agua de fresa comprada en puesto
en la calle)

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Caldos (medios)
Caldo Lauril y Triptosa
Ingrediente (g por litro) Función
Triptosa (20)
Fuente de nitrógeno, vitaminas, minerales y
aminoácidos
Lactosa (5)
Carbohidrato fermentable (se detecta la presencia de
gas con campana de Durham)
Cloruro de sodio (5) Mantiene el balance osmótico
Lauril sulfato de sodio (0.1) Inhibe el desarrollo de la flora acompañante
Fosfato dipotásico (2.75) Provee un sistema buffer
Fosfato monopotásico (2.75) Provee un sistema buffer
Caldo EC
Ingrediente (g por litro) Función
Tripteína (20) Fuente de péptidos, aminoácidos y nitrógeno
Lactosa (5)
Carbohidrato fermentable (se detecta la presencia de
gas con campana de Durham)
SALES BILIARES N° 3 (1.5)
Inhibe el crecimiento de la flora acompañante Gram
positiva
Cloruro de sodio (5) Mantiene el balance osmótico
Fosfato dipotásico (4) Provee un sistema buffer
Fosfato monopotásico (1.5) Provee un sistema buffer

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Metodología
Figura 1. Procedimiento
para la determinación de
Coliformes Totales y
Coliformes Fecales.

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Resultados
10^-1 10^-2 10^-3
X X X
X X ✔︎
X X X
Primera lectura (prueba presuntiva)
Sembrado en caldo lauril triptosa a
35°C ± 0.5°C por 24h a 48 h.
 Solo un tubo presento presencia de gas (Prueba falsa positiva)
 El resto de tubos se resembraron para prueba confirmativa de C.T

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Análisis de resultados
Lo que se busca
determinar en la prueba
presuntiva es la
presencia de gas
mediante la campana de
Durham y cierta turbidez,
esto por la fermentación
de la lactosa presente en
el medio Caldo Lauril
Triptosa
Los coliformes fermentan
la lactosa con producción
de ácido y gas.
Con la prueba presuntiva
hacemos exclusión de la
presencia del grupo
coliforme en nuestra
muestra (agua de fresa)
en un 88.88%, ya que
uno de los tubos si
presento producción de
gas, pero se sospecha
que dicho tubo es una
prueba falsa positiva ya
que, no presento
turbidez alguna y fue un
tubo de la dilución de
1x10^-3, cuando en los
de 1x10^-1 y 1x10^-2 no
hubo pruebas positivas.

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Conclusiones
Se realizó la metodología de la práctica de acuerdo a los
parámetros establecidos para la realización de la técnica del
número más probable, en cuanto a los resultados obtenidos de
la prueba presuntiva se obtuvo que solo en la dilución 10^-3
hubo un tubo con producción de gas, pero para la prueba
confirmativa se inocularon todas las diluciones para la
determinación de coliformes totales y solo el que tuvo
producción de gas se inoculo para la determinación de
coliformes fecales, por lo que se espera que para coliformes
totales no haya resultados positivos.

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Referencias
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documentos/microorganismos/coliformes/#:~:text=Ejemplos%20de%20géneros%20considerados%20como,conocida%2C%20Escherichia
%20coli%20(E. el 23 de Octubre de 2022.
 Vázquez, O´Neill y Legnani, S. S. y. M. (2013). En Intendencia de Montevideo. | (p. 2). Recuperado el 22 de octubre de 2022
de https://montevideo.gub.uy/sites/default/files/importancia_de_los_coliformes_en_los_alimentos.pdf
 Access Denied. (s. f.). Recuperado 22 de octubre de 2022, de https://www.3m.com.mx/3M/es_MX/food-safety-la/biblioteca-de-
documentos/microorganismos/coliformes/
 Cabrera, J. C. (s. f.). Informes de microbiologia primera unidad 1 7. Recuperado 23 de octubre de 2022,
de https://es.slideshare.net/JhanCarranzaCabrera/informes-de-microbiologia-primera-unidad-1-7
 DOF - Diario Oficial de la Federación. (s/f). Gob.mx. Recuperado el 23 de octubre de 2022,
de https://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=4728925&fecha=15/08/1994
 Universidad de Granada. (2020). Recuento por el número mas probable de coliformes totales y de coliformes fecales. Recuperado el 22 de
octubre 2022, de: Www.ugr.es website: https://www.ugr.es/~pomif/pom-ali/ma-i/ma-i-3-nmp_concepto.htm
 Acumedia. (2016). AGAR BILIS ROJO VIOLETA. Recuperado el 22 de octubre 2022,
de: https://www.neogen.com/globalassets/pim/assets/original/10000/7165_sp_pi.pdf
 DOF. (1995a, Febrero 22). Proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-113-SSA1-1994, Bienes y servicios. Método para la cuenta de
microorganismos coliformes totales en placa. Recuperado el 22 de octubre 2022, de:
https://www.dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=4869711&fecha=22/02/1995#gsc.tab=0