El documento describe la enfermedad de HLB que afecta los cítricos, causada por la bacteria Candidatus Liberibacter. Explica su distribución mundial y en México, así como los insectos vectores. También describe cómo el HLB ha causado un aumento del desempleo, la pobreza y el hambre en Tecomán, Colima, debido a la caída en la producción de limón.

1. Ingeniería Biotecnológica Ambiental Sustentable
y Acuícola, Soc. Coop. de R. L. de C.V.
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2. CONTROL DE HLB
EN CÍTRICOS

3. Huanglongbing, huánglóngbìng, literalmente enfermedad del Dragón Amarillo, es una
enfermedad provocada por la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus y un vector
(Diaphorina citri) que afecta diversas especies de plantas del género Citrus entre los
más importantes están, limón, naranja y mandarina. Esta enfermedad se le conoce por
el acrónimo HLB, pero muchas otras especies de cítricos pueden manifestar síntomas
de la enfermedad con diferentes niveles de expresión.
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA
HLB en el mundo
La enfermedad se reportó por primera vez en el continente asiático en China a finales
del siglo XIX (Zhao,1981), de ahí la nomenclatura de‘Ca.L.asiaticus’ (Candidatus
liberibacter, asiaticus). Posteriormente se reportó en 1920 en Taiwán y las islas Filipinas
(Otake, 1990). A finales de ese mismo año se detecta una nueva especie de Candidatus
en Sudáfrica (Van Der Merweand Andersen, 1937), la cual fue nombrada ‘Ca. L.
africanus’.
En el 2004 se detectó la especie asiaticus en la localidad de Araracuara, SaoPaulo, Brasil
(Coleta-Filhoetal.,2004). Posteriormente, se reportó una nueva especie de ‘Candidatus
Liberibacter’ en cítricos a la que se nombró ‘Ca. L. americanus’ (Teixeiraetal., 2005b).
En 2005, se reportó a ‘Ca. L. asiaticus’ en Florida, EUA.

4. HLB en México
El HLB de la especie ‘Ca. L. asiaticus’ se reportó por primera vez en México en
Julio de 2009 en la localidad de El Cuyo en el municipio de Tizimín, Yucatán,
posteriormente en agosto del mismo año se reporta la presencia de la enfermedad
en Quintana Roo (SENASICA, 2009 y 2010). En noviembre del mismo año, un nuevo
foco de la misma especie es reportado en los estados de Jalisco y Nayarit.
Actualmente el HLB se ha detectado en 391 municipios de 22 entidades de
México, de los cuales, 314 son considerados citrícolas, lo que representa
el 43% del total de los que cuentan con este cultivo en el país, el resto de los
municipios con detecciones solo cuentan con plantas de cítricos en áreas urbanas.
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5. DESEMPLEO, POBREZA Y HAMBRE
Tecomán, del campo próspero al desempleo, pobreza y hambre
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El número de desempleados en el municipio iguanero durante el último año aumentó
alrededor de un 60 por ciento, al pasar de más de 12 mil personas sin trabajo en 2013 a
alrededor de 20 mil que se cuentan actualmente. Ello ha traído el recrudecimiento de
la pobreza, coinciden dirigentes del campo.
Colima, México (19 de marzo de 2014).-Mientras hace exactamente un año se hablaba
de 12 mil desempleados en el municipio de Tecomán, actualmente la cifra se estima en
cerca de 20 mil, un aumento considerable en sólo doce meses en una población de 112
mil habitantes.
Por otro lado, la producción de limón en el municipio ha caído: En el año 2011 el
estado produjo 580 mil toneladas del cítrico, en 2012 la cifra disminuyó a 230 mil
toneladas y en 2013 se redujo hasta las 200 mil toneladas, lo que ha traído más hambre
a las familias del campo colimense.

6. Con la finalidad de resolver el grave problema que representa la enfermedad en
cítricos se realizaron experimentos de aplicación foliar y por inyección de nanoplata
de 3 nm(1.2%). Los resultados de esta aplicación se analizaron por qPCR tiempo real y
Microscopía Electrónica de Barrido. El principio es que si eliminamos la bacteria
(agente causal) dentro del árbol desaparece la enfermedad, desaparecen los síntomas
y el árbol restablece la producción.
Las observaciones por microscopía electrónica previas al tratamiento de nanoplata
muestran la gravedad en los síntomas y la calidad de árboles que fueron usados en los
experimentos.
En las siguientes figuras de Microscopía Electrónica de Barrido de árboles enfermos con
HLB. En (a) y (b) árbol antes de ser tratado con dilución 1:10,000; observe en este
corte longitudinal la presencia de bacterias vivas y masas irregulares, probablemente
bacterias muertas. En (c) corte longitudinal de un vaso del floema de árboles antes de
ser tratados con Quikjet dilución 1:5,000, donde se encuentra bloqueado por gránulos
de almidón en ambos lados de la placa cribosa. En (g) corte transversal de tallo (1.5
mm diámetro) después de ser tratado con Tree IV, dilución 1:500.

7. CONDICIONES DE LOS ARBOLES (LIMON MEXICANO Citrus aurantifolia Swingle)
ANTES DEL TRATAMIENTO
CandidatusLiberibacterssp.

8. Distribución de las diferentes cepas de HLB
Candidatus Liberibacter asiaticus
Candidatus Liberibacter africanus
Candidatus Liberibacter americanus
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9. DISTRIBUCIÓN DE LOS INSECTOS VECTORES
Diaphorina citri
Trioza erytreae

10. En Colima se cultivan aproximadamente 21,643 has de limón
mexicano en los municipios de Tecomán, Armería,
Manzanillo, Coquimatlán y Colima (SIAP, 2009).
Existen 3,887 plantaciones comerciales donde se cultivan
cítricos, siendo beneficiados 3,216 productores y 20,000
familias con la producción, la comercialización y la industria
citrícola.

12. Eliminación de las primeras plantas enfermas
Buen control del vector
Zona compacta de cítricos
Huertas vecinas con HLB con mal manejo
Huerta “El Caracol”
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Plantas con HLB
Octubre 2010
1 planta enferma
Octubre 2011
enfermas
Octubre 20123,69
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0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Huerta “El Caracol”

14. Huerta “Rincón de López”
Ninguna planta enferma eliminada
Control regular del vector
Zona compacta de cítricos
A orilla de caminos

15. Huerta “Rincón de López”
0 0
0 0 0 F
0 0
0
0 0
Agosto 2012
619 plantas con síntomas
9 Replantes con síntomas
Enero 2011
7 plantas con síntomas
www.tratamientodeaguas.org.mx

16. SITUACIÓN ACTUAL DEL HLB EN COLIMA (Octubre 2012)
De 1,600 huertas de cítricos
con HLB (41% de las huertas
de Colima)
Más de 316 mil plantas con
HLB en huertas comerciales
La superficie total de las huertas con una a
más de 7,000 plantas enfermas es de 13 mil
hectáreas (60% de la superficie citrícola de
Colima

17. DISEÑO EXPERIMENTAL: TRATAMIENTOS
LUGAR DE INVESTIGACIÓN: Rancho Valle Viejo, Tecomán, Colima
DILUCIÓN # APL # ÁRBOLES
VOLUMEN
APLICADO/
ÁRBOL (mL)
CANTIDAD DE
NANOPLATA/
ÁRBOL
CONCENTRACIÓN
NANOPLATA
ASPERSIÓN
FOLIAR
1:250
1 APL.
6
2000 96 mg 48 µg/ml
2 APL. 4000 192 mg 48 µg/ml
3 APL. 6000 288 mg 48 µg/ml
1:1,000
1 APL. 2000 24 mg 12 µg/ml
2 APL. 4000 48 mg 12 µg/ml
3 APL. 6000 72 mg 12 µg/ml
1:5,000
1 APL. 2000 4.8 mg 2.4 µg/ml
2 APL. 4000 9.6 mg 2.4 µg/ml
3 APL. 6000 14.4 mg 2.4 µg/ml
1:10,000 1 APL. 2000 2.4 mg 1.2 µg/ml
CONTROLES 12
QUIKJET
(MICRO -
INYECCIÓN)
1:500
2 APL. 5 30
7.2 mg 24 µg/ml
1:1000 3.6 mg 12 µg/ml
1:5000 0.72 mg 2.4 µg/ml
1:10,000 0.36 1.2 µg/ml
XYLLAKILL
1:500
2 APL.
5
80
19.2 mg 24 µg/ml
1:5000 1.92 mg 2.4 µg/ml
1:10,000 3 0.096 mg 1.2 µg/ml
TREE IV
(MACRO-
INYECCIÓN)
1:500
2 APL. 1 1500
36 mg 2.4 µg/ml
1:10,000 1.8 mg 1.2 µg/ml
CONTROLES 15 0 0 0

18. APLICACIÓN CON NANOPLATA: Inyección en tronco y aspersión foliar a 15 árboles (Muestra)
de Limón Mexicano (Citrus aurantifolia) de 3-4 años de edad con Nanoplata, dilución
1:10,000 en inyección en tronco (eliminando el 95% de la bacteria) y 1:1,000 con aspersión
foliar (eliminando el 86% de la bacteria); por lo que haciendo las dos aplicaciones foliar e
inyección eliminamos el 100% de la bacteria y mantener libres de Candidatus liberibacter
asiaticus, americanus, en limón mexicano, naranjo y toronja, mantenemos .

19. Aplicación de nanoplata
(inyección y foliar)
Rama 1 y 2: qPCR
(bacterias vivas - EMA)
Rama 3: Microscopía
Electrónica de Barrido
ANTES DESPUÉS
60 FOLIAR
35 INYECCIÓN
27 CONTROLES
7 – 14 días
(qPCR 16S rDNA)
3 copias por bacteria
(3 – 4 meses)
METODOLOGÍA: ANÁLISIS
EMA = Bromuro de Etidio Monoazida
www.tratamientodeaguas.org.mx

20. 0
50000
100000
150000
200000
250000
300000
350000
400000
450000
500000
1 apl 2 apl 3 apl 1 apl 2 apl 3 apl 1 apl 2 apl 3 apl 1 apl
1 a 250 1 a 1000 1 a 5000 1 a
10,000
CTRL
#bacteriasvivas(16SrDNA)
Dilución de nanoplata
ANTES
DESPUES
nanoplata trabaja a una dilución de 1:1000
(12 µg/ml, 24 mg/árbol)
2 litros por árbol (1 aplicacion)
APLICACION FOLIAR DE NANOPLATA

21. DILUCION DE
NANOPLATA
[ ] NANOPLATA
(µg/ml)
CANTIDAD
NANOPLATA
(mg/árbol)
# BACTERIAS
VIVAS ANTES
(40 mg tejido)
# BACTERIAS
VIVAS DESPUES
(40 mg tejido)
%
ELIMINACION
1 a 500 24 36 20832.27 8928.42 57.14
1 a 10,000 1.2 1.8 20516.38 867.03 95.77
CONTROLES 0 0 73430.14 72502.15 1.26
RESULTADOS
APLICACION DE NANOPLATA CON EL SISTEMA TREE IV

22. nanoplata trabaja a una dilución de 1:10,000
(1.2 µg/ml, 1.8 mg/árbol)
1.5 litros
0
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
1 a 500 1 a 10,000 CONTROLES
#bacteriasvivas(16SrDNA)
Dilución nanoplata
ANTES
DESPUES
El uso de nanoplata aplicada a la piel de humano está aprobada por la FDA, por lo
que a diferencia de los insecticidas, los operadores no están en riesgo con lo que
respecta a la nanoplata.

23. AP. FOLIAR
1:1000
3 APLICACIONES
72 mg/arbol
ANTES 3 MESES
DESPUES
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24. CONDICIONES DE LOS ARBOLES (LIMON MEXICANO Citrus aurantifolia Swingle)
ANTES Y DESPUÉS DEL TRATAMIENTO
CandidatusLiberibacterssp.

25. En las fotos anteriores de Microscopía Electrónica de Barrido se presentan cortes
longitudinales de tallos de 2.5 mm, en figuras (c) y (d). En figuras (h) e (i) Cortes
transversales de tallos de 1.5 mm de espesor. No se puede comparar directamente
el antes y el después en este árbol tratado con nanoplata(1:500; 36 mg/árbol; 2.4
µg/ml)porque son estructuras y aumentos diferentes aunque es la misma rama
muestreada antes y después. Sin embargo se puede observar antes del tratamiento
con nanoplata el bloqueo y la desorganización del floema y engrosamiento de las
paredes (ver flechas en c, d).En las figuras después del tratamiento con nanoplata
(h, i) se observa muchos vasos del floema libres que permiten suponer que la
nanoplata puede viajar con facilidad a través de estos conductos y alcanzar a las
bacterias. Sin embargo no se cuantificó el número de vasos bloqueados antes del
tratamiento. Observe antes del tratamiento con nanoplata gránulos de almidón, ver
flecha en figura d, Aunque no se ve un cambio radical después del tratamiento con
nanoplata, nos da una idea del daño presente y nos confirma que la recuperación
del árbol llevara tiempo aunque hayamos eliminado la mayoría de las bacterias.

26. ¿La nanoplata trasloca al fruto?
No se detectó, mediante Absorción
Atómica, que hubiera traslocación de
nanoplata en el fruto,
ANTES DESPUES
XyllaKill (19.2 mg/arbol ; 24µg/ml) 0.3 mg/L 0.1 mg/L
Tree IV (1.8 mg/arbol; 2.4 µg/ml) 0.4 mg/L 0.3 mg/L

27. El mecanismo de acción de la nanoplata es en múltiples sitios de acción en la
bacteria, impidiendo la replicación celular, la transcripción de enzimas clave y
disrupción de puentes di sulfuro, por lo que las bacterias difícilmente pueden
desarrollar una resistencia a la nanoplata. Como la nanoplata no es específica,
mata igualmente virus, bacterias y hongos; cuando se aplica foliarmente
también puede prevenir otras enfermedades de la superficie de la hoja, como
vimos, al utilizar nanoplata con aplicación foliar reduce la propagación de
fumagina. Potencialmente se puede utilizar en otras enfermedades bacterianas
como Xylella fastidiosa, en cítricos donde causa la enfermedad CVC (Clorosis
variegada de los cítricos). Los experimentos de laboratorio utilizando cajas Petri
en una dilución 1: 5000 mata al 100% de las bacterias en un lapso de 40 minutos.
Esto podría aplicarse a otros cultivos infectados C. Liberibacter.
Otra cosa que se pudo comprobaren árboles sintomáticos, es que después de
haber sido podados y tratados con nanoplata, son capaces de volver a generar
nuevos brotes y libre de HLB. Esto permitiría regenerar huertos enteros y
también ser de beneficio para los productores de cítricos.

28. BENEFICIOS DE LA INDUSTRIA CITRÍCOLA
• La Nanoplata puede eliminar cerca del 100% de la
bacteria del árbol, recuperando los árboles enfermos y
previniendo la propagación de la enfermedad
• La Nanoplata se puede aplicar en grandes extensiones
mediante inyección al tronco, por aspersión foliar o
ambas.
• La Nanoplata se puede usar certificando árboles libres de
HLB para viveros.
• Nuestras concentraciones de Nanoplata no son tóxicas
en plantas ni animales.
• Resultados preliminares muestran que la plata no se
transfiere al fruto

29. Patent Translate
Powered by EPO and Google
Aviso
La presente traducción ha sido generada por ordenador. No le podemos garantizar que sea
comprensible, precisa, completa, fiable ni adecuada para fines específicos. Las decisiones
cruciales, tales como las decisiones financieras o comercialmente relevantes, no se deberían
basar en los resultados de traducciones generadas por ordenador.
RESUMEN MX2012010408
El Huanglongbing de los cítricos es una enfermedad mortal que hasta el momento no tiene un
tratamiento directo de los árboles dañados.
La presente invención describe métodos y formulaciones químicas para la eliminación de la
bacteria que se sabe que es la causa de la enfermedad en la parte interior de un árbol en dos
semanas.
Ensayos, realizadas a diferentes concentraciones, incluyendo de uno a tres aplicaciones,
muestran que la aplicación foliar de 12 ml / m / ml o de inyección de 2,4 y 24 m de soluciones
acuosas de nanoplata elimina de 60 a 85% la presencia de la Candidatus Liberibacter spp
bacteria.
El dispositivo xyllakill descrito en la presente invención es más eficaz en el suministro de las
partículas de nanoplata que otros dispositivos comerciales, ya que puede suministrar un
volumen de una manera pasiva, siendo rellenable y muy práctico para ser fijado al árbol.
Este tratamiento puede eliminar el 100% de la bacteria mediante el aumento del número de
aplicaciones. www.tratamientodeaguas.org.mx

30. NUESTRO OBJETIVO
• Que el producto llegue directamente al consumidor,
(productor de cítricos).
• El método y procedimiento descrito con el ingrediente
activo, Nanoplata, es efectivo para el tratamiento del
HLB
• Se recomienda Vacunar el árbol cada dos años como
prevención del HLB
• No requiere de otro medicamente para completar el
tratamiento
• El producto está listo para utilizarse inmediatamente

31. GRACIAS
www.tratamientodeaguas.org.mx