Microscopia y partee del microscopio

1. MICROSCOPIO
Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Capta y amplia
la imagen formada en los objetivos.
Objetivo: lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen
de ésta, es un elemento vital que permite ver a través de los
oculares.
Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparación.
Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Tubo: es una cámara oscura unida al brazo mediante una
cremallera.
Revólver: Es un sistema que coge los objetivos, y que rota para
utilizar un objetivo u otro.
Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven
la platina hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico lo hace de
forma rápida y el micrométrico de forma lenta. Llevan incorporado
un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.
Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre
el que se coloca la preparación, que permite el paso de los rayos
procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo. Dos
pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un
sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento
permite mover la preparación de delante hacia atrás o de izquierda
a derecha y viceversa.
Base: Es el que sostiene al microscopio.

2. Preparación de la muestra:
NH3
H
H
N
N
O
El primer paso antes de empezar a preparar
una muestra es asegurarnos que disponemos
de todo el material que necesitaremos.
Portaobjetos
El portaobjetos es una pequeña pieza de vidrio con unas
dimensiones de aproximadamente 76 x 26 mm y entre 1 y 1.5
milímetros de espesor. Su función es servir de soporte para la
muestra ya que es sobre él que colocaremos el espécimen
que queremos observar.
Es importante manipular con cuidado el portaobjetos ya que
sus cantos afilados pueden en ocasiones producir cortes.
Para evitar lesiones existen portaobjetos con las esquinas
esmeriladas.

3. Cubreobjetos
El cubreobjetos es también una pequeña pieza de vidrio con unas dimensiones menores que el
portaobjetos. El cubreobjetos tiene una forma cuadrada con un lado de entre 18 y 20 milímetros y un
espesor de entre 0.13 y 0.17 mm.
Debido a su espesor extremadamente bajo, el cubreobjetos es un elemento extremadamente frágil y, por lo
tanto, hay que manipularlo con cuidado.
Durante la preparación de la muestra es habitual añadir unas gotas de agua sobre la muestra.
Función:
❖ Mantener la muestra en su sitio y protegerla de posibles contaminaciones.
❖ Es una medida de protección para evitar que la lente del objetivo entre en contacto con la muestra.
❖ La colocación del cubreobjetos sobre estas gotas de agua permite aplanar el líquido y facilita el
enfoque sobre el plano de la muestra.

4. Pinzas
Instrumento para agarrar cosas, en especial cosas
pequeñas, que consiste en dos piezas unidas por un
extremo y separadas por el otro, que se juntan o se
separan haciendo presión con los dedos por el centro o
por uno de sus extremos
Pipeta
La pipeta es un instrumento de laboratorio que permite
medir y dosificar un líquido con gran precisión. En el
campo de la microscopía se utiliza para colocar sobre
la muestra la cantidad de líquido adecuada para su
hidratación o simplemente para colocar sobre el
portaobjetos una cantidad limitada de líquido que
contiene la muestra

5. Tintay papelabsorbente
La tinción es uno de los recursos utilizados para poner de relieve
algunas características concretas de la muestra observada. Existe
una gran cantidad de técnicas de tinción y su uso en cada caso
depende de la muestra observada.
En los procesos de tinción se utilizan colorantes y tinturas que se
mezclan con la muestra para mostrar estructuras que de otro
modo permanecerían invisibles. Una distinción importante es
entre la tinción in vivo, que incluye las técnicas para teñir células
vivas, y la tinción in vitro, que se refiere a las técnicas para teñir
células muertas.
Cuando se utilizan tintes es habitual utilizar también papel
absorbente para deshacerse de un posible exceso de tinte sobre el
portaobjetos.

6. PREPARACIÓNDELMATERIAL MICROBIOLÓGICO PARA
MICROSCOPÍA
La observación microscópica constituye la primera etapa del estudio de los
microorganismos y también el diagnóstico microbiológico ya que permite
conocer algunas características de los microorganismos, como: forma,
disposición o agrupación, presencia o ausencia de estructuras (cápsulas,
esporas, flagelos), movilidad, etc. El estudio "en fresco" se desarrolló cuando
todavía no se habían inventado la fijación y la tinción. Actualmente se siguen
utilizando, sobre todo gracias al desarrollo de las técnicas de contraste de
fases y contraste interferencial.

7. OBSERVACIÓNMICROSCÓPICA:
Para observar una muestra al microscopio óptico
podemos recurrirá a:

8. Preparación húmeda
Se realiza colocando una gota de la suspensión de
microorganismos entre un porta y un cubreobjetos. Se
observa directamente.
Preparación fijada: Se coloca una suspensión homogénea
de microorganismos en una gota de agua sobre el
portaobjetos y se fija (mediante calor o agentes químicos) y
después se tiñen mediante diferentes técnicas. Estas
preparaciones se observan sin cubreobjetos y, habitualmente,
con objetivos de inmersión.

9. Preparación preparado fijo
para tinciones.
Fijado
1
2
La extensión del material sobre el portaobjetos se hará de
diferentes formas, en función de la procedencia del
producto a examinar. Si el producto es líquido, se
depositará una pequeña cantidad de material en el centro
del porta, extendiéndolo con el asa hasta conseguir una
capa fina y homogénea. Si la extensión debe hacerse a
partir de un cultivo en medio sólido, la colonia que
vayamos a estudiar se mezclará con una gotita de agua
destilada estéril colocada en el centro del portaobjeto.
Secado
Una vez realizado el frotis, debemos
dejar secar al aire la preparación, cuando
está seca la superficie pasa de ser
brillante a mate; para acelerar el secado
se puede calentar ligeramente la parte
inferior del portaobjetos (sin quemar).
La fijación es el último paso antes de proceder a la
tinción, y tiene como objetivo no permitir que la
muestra de estudio se pierda (o se barra) en el proceso
de tinción.
En frotis hematológicos no se requiere de fijación
debido a que existe una coagulación rápida de las
albúminas citoplasmáticas; o si el material a teñir
posee abundante material celular, se recomienda fijar
con alcohol metílico después de secar la preparación.

10. A
B
C
D
E
Si la muestra es líquida colocamos unas gotas de la muestra en el centro del portaobjetos
con la ayuda de una pipeta.
Si la muestra es sólida colocamos primero unas gotas de agua destilada o de solución salina sobre el
portaobjetos y a continuación un fragmento de la muestra con la ayuda de unas pinzas.
Sujetando el cubreobjetos por dos de sus lados, apoyamos otro de sus lados sobre el portaobjetos de modo
que forme un ángulo de aproximadamente 45 grados.
A continuación, podemos soltar con cuidado el cubreobjetos de modo que quede colocado sobre el líquido
que hemos depositado anteriormente. (Mediante este procedimiento se evita la formación de burbujas dentro
de la muestra. En caso de que hayan aparecido burbujas entre el portaobjetos y el cubreobjetos será necesario
repetir el procedimiento anterior.)
En caso de que haya un exceso de líquido alrededor del cubreobjetos podemos eliminarlo
mediante papel absorbente.

11. ❑ A través de la llama de un mechero bunsen con el extendido hacia arriba la fijación
produce la muerte simultánea de los microorganismos y su adherencia al portaobjetos si
no se realiza el colorante puede arrastrar los microorganismos del portaobjetos y
cuando vamos a realizar la observación a través del microscopio. Realizar la tinción
empezamos con la muestra la cual se va a ser un proceso de extensión como con
movimientos circulares y luego el proceso de fijación a través de la llama de un
mechero bunsen que finalmente se puede proceder a seguir con atención para realizar la
tinción.

12. Recomendaciones
Como sabemos el microscopio es un instrumento de precisión construido de valiosos y delicados
materiales, con un buen mantenimiento y cuidado tal instrumento durara muchos años.
➢ Si vamos a mover constantemente nuestro equipo es conveniente tomarlo de las partes que nos
indica el proveedor generalmente es del brazo o cuello del microscopio, estando frío por supuesto
esto evitará que se fundan los focos de iluminación, el lugar de almacén del deberá ser lo más limpio
del polvo, humedad, o exceso de calor en anaqueles estables y fijos.
➢ Al iniciar el mantenimiento de un microscopio es muy importante tener las herramientas y los
materiales adecuados, como soluciones líquidas preparadas para la limpieza; y por supuesto un área
destinada para el mantenimiento.
➢ Cuando se inicia un buen mantenimiento NO es necesario desensamblar todas sus partes: ópticas,
mecánicas y electrónicas, porque todos ellos están provistos de sellos del fabricante y con la garantía
de seguridad de que no se penetrará nada nunca en condiciones normales de trabajo, además se corre
el riesgo de confundir una cara de cualquier lente interna ya sea del ocular o del objetivo.