microscopia

2. MICROSCOPÍA

3. HISTORIA

4. MICROORGANISMO
Un microorganismo,
también llamado microbio
u organismo
microscópico, es un ser
vivo que sólo puede
visualizarse con el
microscopio. La ciencia
que estudia a los
microorganismos es la
microbiología.
«micro» del griego μικρο
(diminuto,pequeño) y
«bio» del griego βιος
(vida) seres vivos
diminutos.

5. El microscopio, de
micro- (pequeño) y
scopio (observar), es
un instrumento que
permite observar objetos
que son demasiado
pequeños para ser
vistos a simple vista.
Microscopio

6. El microscopio fue inventado
hacia los años 1610, por
Galileo, según los italianos, o
por Zacharias Janssen, en
opinión de los holandeses.
GALILEO

7. A mediados del siglo XVII un
comerciante de telas y hábil
tallador de lentes holandés,
Anton Van Leeuwenhoek,
utilizando microscopios simples
de fabricación propia describió
por primera vez protozoos,
bacterias, espermatozoides y
glóbulos rojos.

8. Durante el siglo XVIII el
microscopio tuvo diversos
adelantos mecánicos que
aumentaron su
estabilidad y su facilidad
de uso aunque no se
desarrollaron por el
momento mejoras ópticas.
En 1877 Abbe publica su teoría
del microscopio y, por encargo
de Carl Zeiss, mejora la
microscopía de inmersión
sustituyendo el agua por aceite
de cedro, lo que permite
obtener aumentos de 2000.
A principios de los años 1930
se había alcanzado el límite
teórico para los microscopios
ópticos, no consiguiendo
estos aumentos superiores a
500X o 1000X.

9. Se crea el microscopio
electrónico de transmisión
(T.E.M.) fue el primer tipo de
microscopio electrónico
desarrollado.
Utiliza un haz de electrones en
lugar de luz para enfocar la
muestra consiguiendo
aumentos de 100.000 X.
Fue desarrollada por Max
Knoll y Ernst Ruska en
Alemania en 1931. Placas basales del flagelo
Rhodobacter sphaeroides

10. Posteriormente, en 1942 se
desarrolla el microscopio
electrónico de barrido
(SEM).
Cabeza del mosco Aedes
aegypti

11. En 1981, Heinrich Rohrer y Gerd
Binnig, idearon el microscopio de
efecto túnel, Debido a su invento,
en 1986 fueron galardonados con el
premio Nobel de Física.
Este sistema basa su
funcionamiento en un efecto
cuántico, denominado efecto túnel,
que se da en distancias menores a
la milmillonésima parte de un metro
(10-9m = 1 nm, un nanómetro).
El microscopio de efecto túnel
(SMT) permite ver átomos
individualmente, obteniendo una
imagen muy precisa de la superficie
de un material.
EFECTO TUNEL
Imagen de microscopía
de efecto túnel del DNA.

12.  Microscopio Simple: Usa solamente una lente. El
ejemplo más clásico es la lupa.
Microscopio Compuesto: Usa por lo menos dos lentes.
Desde el punto de vista óptico se conocen dos
tipos de microscopios

13. Microscopio Iluminación Lentes
Aumento
s
Límite de
resolució
n
Observación
Campo oscuro y
luminoso
Luz visible
Biconvexas
de vidrio
1000 –
1500X
200 nm
Células vivas con pocos detalles
estructurales
Ultravioleta
Lámpara de Hg (UV
200nm)
Cuarzo
1000 –
1500X
100 nm La imagen presente presencia propia
Fluorescencia
Lámpara de Hg (UV
200nm)
Cuarzo
1000 –
1500X
100 250
nm
Muestras que emite luz al tratarlas con
comp.. fluorescentes
Contraste de
fases
Luz visible
Biconvexas
de vidrio
1000 –
1500X
200 nm Muestras muy delgadas sin teñir
Confocal
Láser, Argon 488
y514nm Kriptón 568 y
647 nm
Biconvexas
de vidrio
1000 –
1500X
2048
pixeles
Tejidos intactos vivos, biopelículas
microbianas, un solo punto de la
muestra, 3D
Electrónico de
Transmisión
(TEM)
Lámpara de Tungsteno
Haz de e 60000 v
Electroima
nes,
cátodos
300000 –
1500000
X
20 – 0.17
nm
Ultraestructura de células muertas
Electrónico de
barrido (SEM)
Lámpara de Tungsteno
haz de e
electroima
nes
20 –
100000X
3 – 25 nm Topología de la superficie del objeto
Efecto Túnel
(STM)
Corriente eléctrica que
produce efecto cuántico
106 -108X Atómica
Imágenes 3D de red de átomos o
moléculas de la superficie de la muestra
Fuerza Atómica
Corriente eléctrica que
produce efecto cuántico
106 –
108X
Atómica muestras vivas

14. USAREMOS EN EL
LABORATORIO Y EN LA
PRÁCTICA
MICROSCOPIO COMPUESTO
DE CAMPO LUMINOSO

15. Sistemas de un microscopio compuesto.
Sistema Parte Función
Mecánico Pie Para apoyarlo en una
superficie
Brazo Para manipularlo
Platina Se coloca la preparación
Revólver Para girar los objetivos
Tornillos Para enfocar la preparación
Iluminación Lámpara Es la fuente de luz
Espejo Refleja la luz del condensador
Condensador Condensa la luz hacia el
objeto
Diafragma Regula la cantidad de luz
Óptico Oculares Lentes por donde se observa
Objetivos Lentes que aumentan la
imagen

16. Oculares.
Objetivos
.
Brazo
Platina.
Fuente luminosa.
Pie o base
Tornillos macro y
micrométricos.
Revolver
Microscopio
campo luminoso
Condensador
Componentes principales

17. Permite dirigir el haz de luz hacia el espécimen
que se desea observar. Existen dos tipos:
 Abbe.
 Acromático.
Un condensador básico consta de:
 Lente frontal
 Diafragma de iris del
condensador
 Lente auxiliar

18. Seco débil seco fuerte Inmersión

19. Cada ocular tiene un número que indica los aumentos que
proporciona.
Para calcular el aumento de la imagen al que se observa,
se multiplican los aumentos del ocular por los del
objetivo que se esté utilizando:
Aumento total (AT)
AT=aumento del objetivo x aumento del ocular
Ocular 10X xObjetivo 10X = aumento total de 100 veces
Ocular 10X xObjetivo 40X = aumento total de 400 veces
Ocular 10X xObjetivo 100X = aumento total de 1000 veces
AUMENTO TOTAL

20. Transportar el microscopio
en forma vertical, tomándolo
del brazo con una mano y de
la base con la otra.
Colocarlo con cuidado en la
mesa. Se debe asegurar de
que no hayan vibraciones o
aparatos que las provoquen
en la mesa donde se coloque
Limpiar el soporte mecánico
con una tela que no deje
pelusa y la parte exterior del
sistema óptico con papel
seda.
Evitar arrastrar, golpear o
inclinar el microscopio, y no
limpiar con el dedo el aceite
del objetivo de inmersión.
Si las lentes están
demasiado sucias pueden
limpiarse con hisopo de
algodón impregnado en
agua. JAMÀS LIMPIAR CON
SOLVENTES ORGÀNICOS.

21. Iluminación del campo
visual:
a)Conectar y prender la lámpara
b) Subir el condensador hasta el tope
c) Abrir o cerrar el diafragma del
condensador hasta tener un campo
adecuado de iluminación con el mayor
contraste posible
Colocar la preparación en la
platina y sujetarla con las pinzas.
Acercar el objetivo a la
preparación.
Colocar una gota de aceite de
inmersión sobre la preparación,
cambiar con cuidado al objetivo
de inmersión e intentar enfocar
la preparación con el tornillo
micrométrico. No mover el
tornillo macrométrico
Sin mover los tornillos, cambiar
al objetivo seco fuerte (40X) y
mover el tornillo micrométrico
hasta enfocar de nuevo
Enfocar la preparación con el
objetivo seco débil (10X)
usando primero el tornillo
macrométrico y después el
micrométrico hasta ver una
imagen clara

22. Al término de las
observaciones, limpiar
el microscopio como
se indicó y entregarlo:
Apagar la lámpara,
enrollar el cable y
sujetarlo con una liga.
Colocar el revólver en
el objetivo de menor
aumento, o donde no
lo tenga
Bajar la platina hasta
el tope inferior
Colocarlo en su lugar
asignado y cubrirlo
con la funda

23.  Cuando se transfiere el microscopio a la mesa de
trabajo, debe tomarse fuertemente el brazo del
microscopio con la mano derecha y con la izquierda
por debajo, ya que si no se realiza de esta manera,
las probabilidades de golpearlo con la mesa o
dejarlo caer aumentan
 Está prohibido usar pañuelos, servilletas u otro
material para limpiar las lentes ya que pueden
rayarlas

24.  El aceite de inmersión debe ser claro y no turbio, ya
que un aceite en mal estado daña las lentes.
 Debe evitarse dejas pelusa, ya que las lentes son
muy sensibles y pueden dañarse.
 Evitar tocar las lentes con los dedos, y limpiar solo
con agua.

25.  El uso del microscopio dio inicio a la microbiología ,
que es la ciencia encargada del estudio de los
microorganismos . Gracias al uso del microscopio
los conocimientos microbiológicos que se disponen
en la actualidad son muy amplios, aunque todavía
es mucho lo que queda por conocer.

27. INTRODUCCION
El tamaño de la mayoría de las bacterias es tal
que resultan difíciles de ver con el
microscopio óptico.
La principal dificultad es la falta de contraste
entre la célula y el medio que la rodea, y el
medio más simple de aumentar el contraste
es la utilización de colorantes. Estos pueden
emplearse para distinguir entre tipos
diferentes de células o para revelar la
presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos, esporas,
cápsulas, paredes celulares, etc.

28. La fijación es el proceso por el cual
se conservan y fijan en su posición
las estructuras externas e internas de
las células. Inactiva enzimas que
podrían alterar la morfología y
endurece las estructuras celulares,
de manera que no cambien durante
la tinción ni la observación. El
proceso de fijación mata al
microorganismo, coagula sus
proteínas y lo adhiere firmemente al
portaobjetos.

29. 1.-Fijación Física. Se refiere al fijando al
calor de frotis bacterianos. Esto se
logra calentando suavemente a la
flama del mechero una fina película
de bacterias secada previamente al
aire. Si el frotis no se ha secado
completamente, al pasarlo por el
mechero se provoca la ebullición y
destrucción del microorganismo.

30. •Si la fijación es insuficiente, la fina
película de bacterias nose pegará al
portaobjetos y será fácilmente
arrastrada en los pasos subsecuentes.
Si se fija en exceso incineraremos a los
microorganismos.

31. 2.-Fijación Química. Se emplea
cuando se desea proteger la
subestructura fina y la morfología
de microorganismos delicados. Los
fijadores químicos penetran las
células y reaccionan con los
componentes celulares,
normalmente proteínas y lípidos
para inactivarlos y convertirlos en
insolubles e inmóviles.

32. Entre las sustancias comúnmente
utilizadas como fijadores químicos se
encuentran:
1- etanol
2-cloruro mercúrico
3-ácido acético
4-formaldehído
5-ácido tánico
6-glutaraldehído.

33.  Son compuestos químicos que poseen
un grupo cromóforo que otorga color a la
molécula y un grupo auxocromo que
otorga al colorante la capacidad de
disociarse y por lo tanto formar sales. El
grupo auxocromo es el que facilita la
unión del colorante a otras sustancias
con carga eléctrica.

38. 1-Los colorantes básicos como el cristal
violeta (violeta de genciana), azul de
metileno, safranina, fucsina básica, verde
de malaquita, son catiónicos o tienen
grupos cargados positivamente. Estos
colorantes se unen a moléculas cargadas
negativamente, como ácidos nucleicos y
muchas proteínas. Como las superficies
de las células bacterianas están
cargadas negativamente.

39. 2-Los colorantes ácidos, como la
eosina, la fucsina ácida, y el rosa de
bengala son aniónicos o poseen
grupos cargados negativamente
como hidroxilos (-OH) o carboxilos
(-COOH). Estos colorantes debido a
su carga, se unen a estructuras
cargadas positivamente.

40. TINCION SIMPLE
En las tinciones simples se usa
un único colorante. Se utilizan
solamente para incrementar el
contraste; todas las bacterias
absorberán el colorante y
quedarán teñidas del mismo
color.

41. OBJETIVO
Realizar las técnicas de
preparación de frotis y tinción
simple para la observación de
algunas formas y agrupaciones
microscópicas

42. METODOS
I. FROTIS A PARTIR DE UN MEDIO SÓLIDO
1-Marcar un extremo del portaobjetos limpio y
desengrasado
2-Colocar con el asa una gota de agua en el centro del
porta objetos
3-Tomar con el asa estéril una porción pequeña del
crecimiento y hacer una suspensión homogénea en
la gota del agua, extender para formar una película
fina
4-Dejar secar al aire
5-Fijar el frotis al calor, se calienta suavemente pasando
rápidamente por la flama del portaobjetos

43.  II FROTIS A PARTIR DE UN CULTIVO EN MEDIO
LIQUIDO
1-Marcar un extremo del portaobjetos limpio y
desengrasado
2-Sin poner agua, tomar con el asa estéril dos o
tres gotas del cultivo puro y colocarlas en el
centro del portaobjetos, extender para formar
una película delgada y uniforme
3-Dejar secar al aire
4-Fijar al calor

44. 1-Colocar los portaobjetos
con los frotis en el puente
de decoloración
2-Cubrir los frotis con unas
gotas del colorante y
dejarla actuar durante un
minuto
3-Con las pinzas de disección
tomar el portaobjetos por
un extremo y dejar escurrir
el colorante
4-Lavar el exceso de
colorante con chorro de
agua suave
5-Dejar secar al aire

46. COCO BACILO

47. LEVADURIFORME  ESPIRAL

48. HELICOIDAL

49.  AISLADOS  DIPLOCOCO
(PARES)

50.  ESTREPTOCOCO
(CADENA)
 ESTAFILOCOCO
(RACIMO)

51.  SARCINAS
(CUBOS DE 8)

52. Se realizaron las tinciones simples de los
microorganismos que se mostraran a
continuación con los siguientes colorantes:
 Safranina
 Cristal violeta
 Verde de malaquita
 Fucsina básica

57. microorganismo forma agrupación esporas
Bacillus
megaterium
bacilos aislado Si presento
Escherichia coli bacilos aislado No presento
Staphylococcus
aureus
coco estafilococo No presento
Saccharomyces
cerevisae
levaduriforme aislado No presento

58. 1-¿Cuál es el propósito de fijar los frotis al calor?
El proceso de fijación mata al microorganismo, coagula
sus proteínas y lo adhiere firmemente al portaobjetos.

59. 2-¿Qué otros métodos de fijación se pueden
emplear?
 La fijación física. Fijando al calor el frotis
 La fijación química. Se emplea cuando se desea
proteger la subestructura fina y la morfología de
microorganismos delicados .Entre las sustancias
comúnmente utilizadas como fijadores químicos
se encuentran el etanol, cloruro mercúrico, ácido
acético, formaldehído, ácido tánico.

60. 3-¿Cuáles son las características que debe tener un
frotis bacteriano de buena calidad?
Estar disperso en 1 cm2, no ser muy grueso, estar
fijado de manera correcta
4-¿ En que casos se aplica la técnica de tinción
simple?
Cuándo se quiere observar el tamaño, forma
agrupación de las bacterias y si hay presencia de
esporas

61. 5-Desde el punto de vista molecular ¿ a que
se debe un colorante su color?
El grupo cromóforo que otorga color a la
molécula y el grupo auxocromo que
otorga al colorante la capacidad de
disociarse y por lo tanto formar sales

62.  ¿Cuáles son las diferencias bajo el microscopio más
obvias entre los microorganismos de los tres tipos?
El tamaño, la forma, ya que unos muestran forma de bacilo
(Bacillus megaterium y Escherichia coli), otra presenta
forma de coco (Staphylococcus aureus) y el
Saccharomyces cerevisiae que presenta forma
levaduriforme, la agrupación y la presencia de esporas.
 ¿Qué partes de la ultraestructura de una bacteria
solamente se pueden observar por microscopía
electrónica?
Pared celular, membrana celular, ribosomas, material
genético, flagelos, frimbias o pilis, cápsula.