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Desarrollo histórico del microscopio y su importancia para la biología
Juego de Ciencias Naturales
KEM
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"¿Por qué, en resumidas cuentas, aún se trabaja con microscopio óptico, cuando con el microscopio
electrónico se puede ver más?"
Esta pregunta se encuentra tanto en la escuela como entre aficionados interesados. Sin embargo, al observar
mejor, se descubre que el microscopio óptico y el microscopio electrónico ofrecen posibilidades muy diferentes
que se complementan. De manera que, para muchas investigaciones biológicas, tanto el microscopio óptico como
el electrónico son indispensables.
El microscopio óptico
En todo caso vale el hecho de que el microscopio óptico es el único instrumento con el que se pueden observar
con gran aumento seres vivos. El microscopio electrónico sólo permite la observación de material fijo y
seccionado.
Aquí solamente se hará una breve sinopsis del desarrollo técnico de la microscopía, que tuvo una fuerte influencia
sobre el progreso científico de la biología.
Los comienzos de la microscopía
Los comienzos de la microscopía permanecen en la oscuridad. A pesar que las gafas ya se conocían en el siglo
XIII, no se las utilizaba como vidrio de aumento para las observaciones de la naturaleza.
El telescopio
Un paso determinante se logró con el descubrimiento del telescopio de Galileo (1610) que, con modificaciones
menores, también se podía utilizar como microscopio. Como en aquellos años la reina de las ciencias era la
astronomía, no se le dio importancia a esta segunda posibilidad de empleo del telescopio de Galileo.
Microscopio de Hooke
Recién con Robert Hooke (1635 – 1703), un físico ampliamente versado, naturalista y arquitecto, a fines del siglo
XVII se logró la irrupción decisiva. Le fue posible pulir pequeñas esferas de vidrio, convirtiéndolas en lentes, y creó
con ello la fundamental condición previa para los microscopios ópticos de alta resolución. El aumento del
microscopio de Hooke era, según la combinación de lentes elegida, de 17 a 170 veces. Con este instrumento,
Hooke analizó intensivamente objetos biológicos. Partiendo de sus observaciones en el tejido del corcho, introdujo
a la Biología el concepto "célula", que hoy se convirtió en un término general.
De primordial importancia fueron sus investigaciones microscópicas con pulgas, que desempeñaron un papel
terrible como transmisores de los bacilos de la peste en la epidemia de Londres del año 1655.
Con este simple tipo de microscopio de Hooke, que fue desarrollado hasta su perfección por A. v. Leuwenhoek
(1632 – 1723), M. Malphigi descubrió los órganos respiratorios y excretorios (vasos de Malphigi) de insectos y las
estomas en la parte inferior de las hojas.
El mismo Leuwenhoek investigó la mucosidad dental del ser humano y descubrió allí organismos minúsculos que
más tarde fueron reconocidos como bacterias. Los aumentos posibles ya eran de 40 a 270 veces.
El microscopio binocular
Sobre esta base, en 1678 el francés Cherubin d'Orleans construyó un microscopio binocular.
El inglés J. Marshall (1663 – 1723) introdujo dos mejoras al microscopio. Desarrolló el ajuste fino y grueso para la
focalización de los objetos de análisis y posibilitó el examen a trasluz mediante una concepción especial del
zócalo. El microscopio de Hooke sólo podía utilizarse como microscopio de luz incidente.
Culpeper mejoró la observación a trasluz integrando un espejo al zócalo. La forma básica del tipo de microscopio
de Culpeper se mantuvo hasta muy avanzado el siglo XIX. Mientras en el tipo original del microscopio de Culpeper
se debían cambiar los objetivos para obtener otra ampliación, Adams (1755) introdujo, además de varias otras
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innovaciones, la torre de objetivos. Además de las mejoras mecánicas que en esos años contribuyeron
enormemente al desarrollo de la microscopía, también las mejoras ópticas fueron objeto de múltiples
investigaciones. Hermann van Deyl fue el primero que consiguió construir, alrededor de 1770, un objetivo
compuesto por varias lentes de diferentes tipos de vidrios. Este objetivo acromático ya casi no mostraba los
errores de coloración que hasta ese momento se manifestaban en forma de anillos policromáticos alrededor de las
estructuras en observación y dificultaban una investigación exacta.
Microscopios de alta resolución
Con estos objetivos acromáticos se allanaba el camino a la microscopía óptica de alta resolución y G. Amici, que,
entre otras cosas, describió el flujo del protoplasma, propuso en 1827 el empleo del sistema de inmersión. El
sistema de inmersión permaneció hasta hoy sin alteraciones y es la absoluta condición previa para observaciones
que se encuentran en el límite teórico de la resolución del microscopio óptico. En aquel tiempo, cuando el
microscopio ya era de una perfección notable, sucedieron uno tras otro, descubrimientos biológicos
fundamentales.
En 1830, Schwann desarrolló una teoría que destacó la especial importancia que el núcleo celular tiene para el
desarrollo de las células.
En 1864, el químico L. Pasteur rebatió la tesis de la generación espontánea de las bacterias. Demostró con
investigaciones sagaces y bien combinadas que todas las bacterias pueden ser diseminadas por gérmenes
flotantes en el aire.
Las bases teóricas del microscopio
A aquel tiempo pertenece la aclaración de las leyes de la óptica del microscopio por E. Abbe (1840 – 1905).
Publicó en 1873 su teoría sobre la capacidad de resolución y aumentos que decididamente contradecía el absurdo
de los aumentos vacíos. Abbe colaboró con Carl Zeiss, y ambos colocaron la piedra fundamental para la
construcción de los después mundialmente famosos instrumentos de precisión.
Robert Koch ya en 1878 informó sobre las ventajas de estos microscopios fabricados por Zeiss y Abbe. Koch en
aquellos tiempos era especialista en enfermedades bacterianas. Él descubrió los causantes de la tuberculosis, el
carbunclo y el cólera. La "cápsula de Petri" fue desarrollada en 1887 por su asistente J. Petri para el cultivo de
bacterias en caldos de cultivo.
En 1879, W. Fleming observó como, durante el desarrollo de la división del núcleo (que llamó mitosis), se
formaban estructuras filiformes en el núcleo. Estas estructuras, en 1888 fueron llamadas "cromosomas" por W.
Waldeyer.
E. Strassburger (1844 – 1912) se ocupó intensivamente de la división del núcleo y es considerado, junto a
Fleming, como su segundo descubridor. En 1908, P. Ehrlich recibió junto a I. Metschnikoff el Premio Nobel por el
descubrimiento de la fagocitosis por leucocitos de las bacterias.
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Información sobre objetivos y oculares
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Ciencia de los objetivos y oculares
Después del desarrollo histórico de la microscopía, sigue un breve vistazo sobre los objetivos y oculares comunes
hoy día. Especialmente las características ópticas y la capacidad de combinación de los correspondientes
objetivos y oculares serán el centro de este capítulo.
Objetivos acromáticos
Los objetivos acromáticos, que están compuestos por dos a seis lentes, son especialmente aptos para el rango
espectral verde amarillento para el que el ojo humano exhibe la mayor sensibilidad. Sin embargo, una pequeña
desviación permanece en el sector violeta azulado y rojo del espectro, que ocasiona durante la observación de
objetos de color un débil borde de color. Como estos objetivos son ópticamente sencillos y relativamente
insensibles mecánicamente, son ampliamente utilizados en la práctica microscópica habitual.
Objetivos plano-acromáticos
Los objetivos plano-acromáticos están construidos y corregidos de manera similar a los objetivos acromáticos. Sin
embargo, contrariamente a los objetivos acromáticos, tienen un campo visual completamente plano, de manera
que se garantiza que también en el sector periférico del campo visual se obtiene una imagen nítida. Gracias a
estas características ventajosas, son especialmente aptos para la microfotografía. Los objetivos acromáticos y
plano-acromáticos son empleados en combinación con los oculares de Huygens, los planos, ortoscópicos y los de
compensación.
Objetivos apocromáticos
Los objetivos apocromáticos son sistemas sensiblemente más complicados y tecnológicamente más exigentes que
los acromáticos, es decir, tanto respecto a la cantidad de sus lentes, como respecto a la selección de los
materiales ópticos empleados. Las lentes son fabricadas con cristales ópticos especiales compuestos de fluorita
(CaF2: Fluoruro de calcio) natural o sintética. Las propiedades ópticas de la fluorita suprimen la desviación
cromática en la zona morada que se presenta en los acromáticos. Sin embargo, permanece un pequeño error
cromático de aumento, que es eliminado totalmente por oculares de compensación. Debido a la impecable
corrección para todas las longitudes de onda del espectro visible, otra ventaja de los apocromáticos consiste en la
gran abertura numérica, responsable de una mejor resolución y una mayor luminosidad de la imagen. Gracias a
estas propiedades los apocromáticos son aptos especialmente para trabajos científicos y diagnósticos exigentes.
Objetivos plano-apocromáticos
Los objetivos plano-apocromáticos corresponden en sus rendimientos a los apocromáticos. La curvatura de campo
visual, que en los acromáticos y apocromáticos aparece en la periferia del campo visual, se suprime con estos
objetivos. Por eso se los utiliza en la microfotografía.
Oculares de Huygens
Los oculares de Huygens se caracterizan por su construcción especialmente simple. El sistema óptico se compone
de dos lentes plano-convexas que con sus lados convexos enfrentan al objetivo. Entre la lente colectora (lente que
enfrenta al objetivo) y la lente ocular (lente que enfrenta al ojo) se encuentra un diafragma circular (diafragma de
campo visual), que limita el campo visual. Los oculares de Huygens, a pesar de su construcción simple, están
ópticamente muy bien corregidos y representan por eso el tipo ocular más empleado. Se utilizan en combinación
con todos los tipos de objetivos.
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Información sobre objetivos y oculares
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Oculares planos
Los oculares planos tienen principalmente una construcción semejante a los oculares de Huygens. La lente ocular
contiene dos lentes individuales pegadas, de manera que los oculares planos forman en total un sistema de tres
lentes. El diafragma de campo visual se encuentra en el interior de la lente ocular. Compensan parcialmente la
curvatura del campo visual y la remanente desviación cromática de los acromáticos y apocromáticos. Además,
tienen un campo visual mayor que los oculares de Huygens. Por su efecto compensatorio, estos oculares también
pueden emplearse en la microfotografía.
Oculares ortoscópicos
Los oculares ortoscópicos se asemejan sensiblemente a los oculares planos. La única diferencia consiste en la
disposición del diafragma de campo visual, que en estos tipos se encuentran dispuestos delante de la lente
colectora. Ópticamente están mejor corregidos que los oculares de Huygens, sin embargo no tienen efecto
compensatorio como los oculares planos. Pueden emplearse junto con acromáticos y plano-acromáticos.
Oculares de compensación
Los oculares de compensación se componen de cuatro lentes y son, en su desarrollo, parecidos a los oculares
planos. El distintivo característico es el error de aumento cromático ex profeso que actúa contra el error de los
objetivos apocromáticos y prácticamente lo elimina. Por esta razón, estos oculares se emplean principalmente
para observaciones con apocromáticos o plano-apocromáticos.
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Introducción al trabajo de microscopía
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Introducción al trabajo de microscopía
El experimento explica la conformación de un microscopio e introduce la técnica del trabajo de microscopía. Se
muestra cómo se utiliza correctamente el diafragma iris y cómo se origina la imagen microscópica en 2 etapas.
Equipo:
Microscopio
Papel transparente
Preparado permanente coloreado (p. ej. corte histológico)
Ajustar el preparado
Colocar el microscopio sobre la mesa de manera que se pueda mirar cómodamente a través del ocular. Colocar el
preparado permanente coloreado sobre la platina del microscopio y fijarlo allí. Encender la luz del microscopio (si
posee una) y con ayuda de la palanca de diafragma abrir el diafragma iris en el condensador. Los microscopios
más sencillos, en lugar de una luz, tienen un espejo. Ahora intercalar el objetivo de menor potencia (p. ej. 5x) en la
trayectoria de los rayos. Mover el preparado para que quede exactamente en la mancha luminosa visible en la
lente frontal del condensador. Recién ahora mirar con ojo relajado a través del ocular. Con ayuda del ajuste
grueso, cambiar la distancia del objetivo al preparado hasta que aparezca una imagen aproximada. Después,
regular con el ajuste fino hasta obtener una imagen nítida.
Al trabajar con el microscopio, mover un poco el preparado, primero a la derecha y luego a la izquierda. A
continuación, alejarlo algo. Fijarse, como con esto se modifica la imagen microscópica en relación al preparado.
Cambio de objetivo
Llevar un punto conveniente del preparado al centro del campo visual y después, uno por uno, intercalar el
objetivo de la potencia siguiente en la trayectoria de los rayos. Con cada cambio de objetivo, la imagen ajustada
debe aparecer nuevamente. Luego se efectúa el ajuste fino de la imagen.
Uso correcto del diafragma iris
Con un aumento total de 100x, ajustar nítidamente la imagen. Por de pronto, abrir el diafragma iris (diafragma del
condensador) completamente; la imagen aparece entonces débil y falta de contraste. Ahora, cerrar el diafragma
iris lentamente hasta que la imagen microscópica tenga un contraste que pueda calificarse de aceptable. Sacar el
ocular del tubo y mirar desde arriba dentro del tubo. Se ve entonces la imagen del diafragma iris como un circulo
luminoso sobre la lente trasera del objetivo del microscopio.
En la microscopía esto se llama posición 2/3, porque el diafragma iris está abierto como para que el cono de
iluminación ilumine dos tercios del objetivo del microscopio. Colocar nuevamente el ocular y cerrar el diafragma iris
hasta el tope. Ahora se ve que los contornos en la imagen microscópica presentan bordes de difracción.
Imagen intermedia
Ajustar el preparado con el menor aumento y después sacar el ocular del tubo. Ahora, sostener un cuadrado de
papel transparente sobre la boca abierta del tubo. Oscurecer el aula para que, con la ayuda de los ajustes grueso
y fino, la imagen microscópica se pueda proyectar sobre el papel transparente. A la imagen que ahora es captada
sobre el papel transparente se la denomina imagen real intermedia aumentada del objeto. La imagen intermedia
del objeto ya contiene todos los detalles de estructura. Para el ojo desnudo, estos detalles aún no son
perceptibles, pues se encuentran por debajo del límite de resolución del ojo. La imagen intermedia tiene que
aumentarse detrás, de tal manera que los detalles allí contenidos puedan ser captados también por nuestro ojo.
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Introducción al trabajo de microscopía
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Aumento posterior
Al colocar nuevamente el ocular, la imagen parecerá poco nítida. Para un enfoque nítido, se debe levantar
levemente el tubo. La imagen intermedia no se origina en el extremo superior del tubo, sino dentro del ocular.
Tomar el ocular con la mano y desenroscar la lente ocular superior. En el anillo portador de la lente está grabado
el aumento. La distancia focal de esta lente ocular se puede determinar puesto que, p. ej., se reproduce una cruz
de ventana en forma nítida sobre el papel transparente. Ahora, mirar dentro del ocular abierto. Se nota que allí se
encuentra un diafragma de campo visual. Medir la distancia desde el diafragma de campo visual hasta el extremo
superior del ocular. Luego, controlar si esta distancia corresponde a la distancia focal del lente ocular. La imagen
intermedia desarrollada por el objetivo se origina en el plano del diafragma de campo visual. Ahora, volver a
ajustar nítidamente el preparado. Cambiar el ocular por un ocular con otro aumento (p. ej. 5x). Controlar, con el
cambio de ocular, si la imagen microscópica permanece nítida. El ocular trabaja como una lupa. Provoca un
aumento posterior de la imagen intermedia. De este modo se hacen visibles, también para nuestro ojo, los detalles
de estructura contenidos en la imagen intermedia.
Cuidado del microscopio
Antes de guardar el microscopio, comprobar si las lentes y la platina se encuentran limpias. Las manchas de
suciedad se humedecen con agua destilada y luego se secan con un paño de lino libre de polvo. Finalmente se
cubre el microscopio con una funda y se guarda en un armario para microscopios.
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Preparados frescos para examinar con el microscopio
Juego de Ciencias Naturales
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La mayoría de los preparados microscópicos sólo son para la observación momentánea de un objeto (viviente) y
por este motivo no debieran guardarse. Estos preparados se denominan preparados frescos. En la mayoría de los
casos, se examinan los preparados en una gota de agua. La confección de preparados frescos sólo requiere, por
lo general, una reducida preparación previa, la que se rige por el tipo de objeto. Los utensilios nombrados
seguidamente son suficientes para las investigaciones más corrientes.
Equipo:
Vaso de precipitados
Cubreobjetos
Lápiz vidriográfico
Papel de filtro
Varilla agitadora de vidrio
Aguja lanceta
Microscopio
Portaobjetos
Cápsula de Petri
Pincita, puntiaguda
Frasco cuentagotas
Alfiler de preparación, puntiagudo
Tijera de preparación
Mango de bisturí
Hoja de bisturí
Placa de vidrio (aprox. 40 x 30 cm)
Cartón negro
Productos químicos y materiales de investigación:
Agua destilada
Material de investigación biológica
Advertencia:
¡Cuidado, peligro de cortes!
Realización:
Usando un frasco cuentagotas, poner una gota de agua destilada sobre un portaobjetos. Debido a que el tiempo
de observación es, por lo general, sólo corto, puede usarse agua destilada sin que, en la mayoría de los casos, se
dañe el objeto. Llevar el objeto a examinar a la gota de agua y tapar con un cubreobjetos. El cubreobjetos se
coloca con un canto en forma oblicua al lado de la gota de agua. Después, bajar lentamente el cubreobjetos sobre
el objeto, sin permitir que queden burbujas de aire.
Para la observación de objetos más grandes, estos se deben llevar, después de cortarlos con tijera o bisturí, con
una pincita a la gota de agua. Luego se los ubica en la posición correcta mediante los alfileres de preparación.
Los objetos muy pequeños, como p. ej., plancton o granos de almidón o fécula, se llevan a la gota de agua con
ayuda de una varilla de vidrio, una pipeta con tetilla de goma o con agujas de preparación.
Los preparados se confeccionan mejor sobre una placa de vidrio. En la preparación de objetos pobres en
contraste, debajo de una parte de la placa de vidrio debiera ponerse papel de filtro blanco y bajo la otra, cartón
negro. De este modo, los objetos pobres en contraste se pueden preparar bien sobre el fondo oscuro.
Indicaciones para la eliminación de los residuos:
Los portaobjetos y cubreobjetos usados deben colocarse en un vaso de precipitados con agua inmediatamente
después del trabajo con el microscopio. Esto evita el secado del preparado y facilita la limpieza de los objetos de
vidrio.
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Técnica de corte manual
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Debido al tamaño y espesor de muchos objetos biológicos, éstos no pueden ser sometidos directamente a un examen
microscópico. Estos se deben preparar con anterioridad mediante cortes, en lo posible delgados. Esto puede hacerse a
mano alzada con un corte de bisturí o mediante un micrótomo.
Para practicar la técnica del corte manual es adecuada la médula de saúco. Los espesores normalmente obtenibles
están en los 50 micrones (20-30 micrones con práctica). ¡Primero tratar exhaustivamente el tema Realización y después
comenzar con la técnica del corte!
Equipo:
Vaso de precipitados
Cubreobjetos
Microscopio
Portaobjetos
Pincita, puntiaguda
Frasco cuentagotas
Aguja de preparación, puntiaguda
Frasco con tapa de encajar a presión elástica
Hoja de afeitar
Productos químicos y materiales de investigación:
Etanol
Agua destilada
Glicerina
Médula de saúco o plantas que tengan médula
Material de investigación
Advertencias:
¡Cuidado, peligro de cortes!
¡Apagar todas las llamas!
¡El etanol es fácilmente inflamable!
Realización
En un trozo de médula de saúco, obtener con la hoja de afeitar una primera superficie de corte lisa. Después, sostener el
trozo de médula de saúco con los primeros tres dedos de la mano izquierda (los zurdos proceden a la inversa).
Colocar la hoja de afeitar con el extremo que mira hacia la mano sobre el corte inicial del tallo de médula de saúco, algo
alejada del borde. Después, correr el filo horizontalmente por todo su largo, de izquierda a derecha y hacia el cuerpo, a
través del objeto. La hoja de afeitar corta inmediatamente la médula de saúco. El espesor de corte puede regularse
fácilmente durante el corte, mediante el correspondiente ladeado de la hoja de afeitar.
Poco antes de seccionar totalmente el objeto, apretar el filo de la hoja de afeitar algo hacia arriba, de manera que el
corte se "debilite". Esto garantiza que dentro del corte exista al menos un lugar suficientemente delgado. La mayoría de
las veces no será necesario completar el corte total, ya que en el campo visual del microscopio de todos modos sólo
puede verse una parte del corte.
El primer corte siempre es desechado, ya que, por regla general, no presenta una superficie de corte limpia. Los
siguientes cortes se llevan a una gota de agua en un portaobjetos. Después se los cubre con un cubreobjetos; entonces
se puede observar el corte con x aumentos.
Aclaración:
Como muchos objetos son, para el corte, mucho más blandos y pequeños que la médula de saúco, éstos se colocan
dentro de la médula de saúco y se cortan junto con ella. Al cortar objetos húmedos, la hoja de afeitar se moja con el
mismo líquido con el que está embebido el objeto. En el caso de objetos lignificados, éstos se colocan varios días en
una mezcla de alcohol puro y glicerina en la relación 1 : 1.
Indicaciones para la eliminación de los residuos:
Llevar los cortes sin tratar al abono vegetal. Tirar los restos de cortes tratados al recipiente recolector de sólidos
orgánicos. Volcar la mezcla usada de glicerina-alcohol al recipiente de soluciones orgánicas.
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MK6.1.19
Fijación de preparados microscópicos
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Todos los objetos biológicos están sometidos a una pronta modificación (autólisis) cuando se los separa de su
relación natural. Por eso, su estructura ya no corresponde a la de su estado viviente. Sin embargo, al examinar
con el microscopio, se quiere conservar lo más posible su estado natural. Por eso, para evitar la autólisis, los
objetos de investigación deben ser fijados. En el proceso de fijación, el protoplasma es llevado rápidamente a la
solidificación por precipitación de la albúmina. Adicionalmente, debido al fijado, el protoplasma pierde su relativa
semipermeabilidad. Recién esto permite la penetración de la mayoría de los colorantes.
Equipo:
Pipeta graduada
Probeta graduada
Pincita, roma
Balón para pipetear
Frascos con tapa de encajar a presión elástica
Gafas de protección
Guantes de protección
Mango de bisturí
Hoja de bisturí
Productos químicos y materiales de investigación:
Agua destilada
Etanol
Glicerina
Vinagre de madera, purificado
Isopropanol
Metanol, puro
Solución de ácido crómico al 2%
Solución de formaldehído al 38-40%
Isopropanol al 50%
Isopropanol al 90%
Ácido acético al 96% (ácido acético glacial)
Material a fijar
Advertencias:
¡Trabajar en un lugar bien ventilado, en lo posible debajo de un extractor!
¡Usar gafas y guantes de protección!
¡Cuidado, peligro de cortes!
¡El etanol, el isopropanol y el metanol son fácilmente inflamables!
¡El metanol es tóxico si se aspira o ingiere! ¡Evitar el contacto con la piel!
¡El formaldehído es tóxico si se aspira o ingiere! ¡Evitar el contacto con la piel!
¡El formaldehído produce quemaduras!
¡El ácido acético produce quemaduras!
Realización
Para la fijación siempre debe emplearse material fresco, que se guarda mejor en un frasco con tapa de encajar a
presión elástica sobre un poco de algodón. De esta manera, el agente de fijación puede penetrar en el objeto por
todos los costados. Los objetos a fijar deben tener cada uno un volumen de aprox. 1 ml, de manera que el agente
de fijación pueda penetrar con rapidez. La cantidad necesaria del agente de fijación debe ser aprox. 50 veces el
volumen del objeto.
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Fijación de preparados microscópicos
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Frecuentemente se emplean los siguientes agentes de fijación:
Formol
El formol penetra rápidamente y el color natural del objeto se mantiene bien. Raramente se presentan
encogimientos. Los objetos fijados en formol pueden colorearse bien con la mayoría de los colorantes. Se diluye
una solución al 40% de formaldehído con agua destilada en relación 1:5 hasta 1:10. Después de la fijación, se lava
el objeto en agua destilada o bien en isopropanol al 50%, hasta que ya no se perciba olor a formaldehído.
Alcohol-ácido acético glacial
Este agente fijador penetra rápidamente e impregna muy bien. Está compuesto por etanol puro y ácido acético al
96% (ácido acético glacial) en la proporción 3:1. Según el tamaño del objeto, el tiempo de fijación es de 1 a 24
horas. Después de la fijación, se lava el objeto en isopropanol al 90% hasta que ya no se perciba olor a vinagre.
Ácido crómico
Este compuesto es particularmente apto para conservar estructuras muy finas. Consiste de 100 ml de solución de
ácido crómico al 2% al que se le agregan 12 gotas de ácido acético al 96% (ácido acético glacial). El objeto es
fijado durante 24 horas y después es lavado a fondo con agua destilada.
Agente fijador según Pfeiffer
Esta mezcla de fijación es muy apta para todo tipo de algas de aguas dulces, hongos, líquenes, musgos y
helechos. En esta mezcla de fijación pueden conservarse algas durante algunas semanas. Los objetos que
contienen agua de mar no deben ser expuestos a esta mezcla de fijación, ya que en este caso se producen
precipitados. La mezcla de fijación según Pfeiffer se compone de una mezcla de solución de formaldehído al 40%,
vinagre de madera purificado y metanol, en la relación de 1:1:1.
Los objetos son fijados durante 12 a 24 horas y se lavan a continuación con isopropanol al 90%.
Elaboración ulterior
Después de la fijación, los objetos bien enjuagados pueden guardarse en frascos con tapa de encajar a presión
elástica, llenos de mezcla de conservación según Strasburger. Esta mezcla de conservación, en la que pueden
conservarse partes vegetales durante varios años, se compone de isopropanol, glicerina y agua destilada en la
proporción 1:1:1.
Indicaciones para la eliminación de los residuos:
Las soluciones de fijación usadas deben desecharse al recipiente recolector para ácidos, sales y lejías. Los
objetos fijados deben secarse en el armario de secado durante 20 minutos a 80
O
C y ser desechados a los
residuos domésticos.

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  • 1. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.13 Desarrollo histórico del microscopio y su importancia para la biología Juego de Ciencias Naturales KEM 308 "¿Por qué, en resumidas cuentas, aún se trabaja con microscopio óptico, cuando con el microscopio electrónico se puede ver más?" Esta pregunta se encuentra tanto en la escuela como entre aficionados interesados. Sin embargo, al observar mejor, se descubre que el microscopio óptico y el microscopio electrónico ofrecen posibilidades muy diferentes que se complementan. De manera que, para muchas investigaciones biológicas, tanto el microscopio óptico como el electrónico son indispensables. El microscopio óptico En todo caso vale el hecho de que el microscopio óptico es el único instrumento con el que se pueden observar con gran aumento seres vivos. El microscopio electrónico sólo permite la observación de material fijo y seccionado. Aquí solamente se hará una breve sinopsis del desarrollo técnico de la microscopía, que tuvo una fuerte influencia sobre el progreso científico de la biología. Los comienzos de la microscopía Los comienzos de la microscopía permanecen en la oscuridad. A pesar que las gafas ya se conocían en el siglo XIII, no se las utilizaba como vidrio de aumento para las observaciones de la naturaleza. El telescopio Un paso determinante se logró con el descubrimiento del telescopio de Galileo (1610) que, con modificaciones menores, también se podía utilizar como microscopio. Como en aquellos años la reina de las ciencias era la astronomía, no se le dio importancia a esta segunda posibilidad de empleo del telescopio de Galileo. Microscopio de Hooke Recién con Robert Hooke (1635 – 1703), un físico ampliamente versado, naturalista y arquitecto, a fines del siglo XVII se logró la irrupción decisiva. Le fue posible pulir pequeñas esferas de vidrio, convirtiéndolas en lentes, y creó con ello la fundamental condición previa para los microscopios ópticos de alta resolución. El aumento del microscopio de Hooke era, según la combinación de lentes elegida, de 17 a 170 veces. Con este instrumento, Hooke analizó intensivamente objetos biológicos. Partiendo de sus observaciones en el tejido del corcho, introdujo a la Biología el concepto "célula", que hoy se convirtió en un término general. De primordial importancia fueron sus investigaciones microscópicas con pulgas, que desempeñaron un papel terrible como transmisores de los bacilos de la peste en la epidemia de Londres del año 1655. Con este simple tipo de microscopio de Hooke, que fue desarrollado hasta su perfección por A. v. Leuwenhoek (1632 – 1723), M. Malphigi descubrió los órganos respiratorios y excretorios (vasos de Malphigi) de insectos y las estomas en la parte inferior de las hojas. El mismo Leuwenhoek investigó la mucosidad dental del ser humano y descubrió allí organismos minúsculos que más tarde fueron reconocidos como bacterias. Los aumentos posibles ya eran de 40 a 270 veces. El microscopio binocular Sobre esta base, en 1678 el francés Cherubin d'Orleans construyó un microscopio binocular. El inglés J. Marshall (1663 – 1723) introdujo dos mejoras al microscopio. Desarrolló el ajuste fino y grueso para la focalización de los objetos de análisis y posibilitó el examen a trasluz mediante una concepción especial del zócalo. El microscopio de Hooke sólo podía utilizarse como microscopio de luz incidente. Culpeper mejoró la observación a trasluz integrando un espejo al zócalo. La forma básica del tipo de microscopio de Culpeper se mantuvo hasta muy avanzado el siglo XIX. Mientras en el tipo original del microscopio de Culpeper se debían cambiar los objetivos para obtener otra ampliación, Adams (1755) introdujo, además de varias otras
  • 2. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.13 Desarrollo histórico del microscopio y su importancia para la biología Juego de Ciencias Naturales KEM 308 innovaciones, la torre de objetivos. Además de las mejoras mecánicas que en esos años contribuyeron enormemente al desarrollo de la microscopía, también las mejoras ópticas fueron objeto de múltiples investigaciones. Hermann van Deyl fue el primero que consiguió construir, alrededor de 1770, un objetivo compuesto por varias lentes de diferentes tipos de vidrios. Este objetivo acromático ya casi no mostraba los errores de coloración que hasta ese momento se manifestaban en forma de anillos policromáticos alrededor de las estructuras en observación y dificultaban una investigación exacta. Microscopios de alta resolución Con estos objetivos acromáticos se allanaba el camino a la microscopía óptica de alta resolución y G. Amici, que, entre otras cosas, describió el flujo del protoplasma, propuso en 1827 el empleo del sistema de inmersión. El sistema de inmersión permaneció hasta hoy sin alteraciones y es la absoluta condición previa para observaciones que se encuentran en el límite teórico de la resolución del microscopio óptico. En aquel tiempo, cuando el microscopio ya era de una perfección notable, sucedieron uno tras otro, descubrimientos biológicos fundamentales. En 1830, Schwann desarrolló una teoría que destacó la especial importancia que el núcleo celular tiene para el desarrollo de las células. En 1864, el químico L. Pasteur rebatió la tesis de la generación espontánea de las bacterias. Demostró con investigaciones sagaces y bien combinadas que todas las bacterias pueden ser diseminadas por gérmenes flotantes en el aire. Las bases teóricas del microscopio A aquel tiempo pertenece la aclaración de las leyes de la óptica del microscopio por E. Abbe (1840 – 1905). Publicó en 1873 su teoría sobre la capacidad de resolución y aumentos que decididamente contradecía el absurdo de los aumentos vacíos. Abbe colaboró con Carl Zeiss, y ambos colocaron la piedra fundamental para la construcción de los después mundialmente famosos instrumentos de precisión. Robert Koch ya en 1878 informó sobre las ventajas de estos microscopios fabricados por Zeiss y Abbe. Koch en aquellos tiempos era especialista en enfermedades bacterianas. Él descubrió los causantes de la tuberculosis, el carbunclo y el cólera. La "cápsula de Petri" fue desarrollada en 1887 por su asistente J. Petri para el cultivo de bacterias en caldos de cultivo. En 1879, W. Fleming observó como, durante el desarrollo de la división del núcleo (que llamó mitosis), se formaban estructuras filiformes en el núcleo. Estas estructuras, en 1888 fueron llamadas "cromosomas" por W. Waldeyer. E. Strassburger (1844 – 1912) se ocupó intensivamente de la división del núcleo y es considerado, junto a Fleming, como su segundo descubridor. En 1908, P. Ehrlich recibió junto a I. Metschnikoff el Premio Nobel por el descubrimiento de la fagocitosis por leucocitos de las bacterias.
  • 3. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.14 Información sobre objetivos y oculares Juego de Ciencias Naturales KEM 308 Ciencia de los objetivos y oculares Después del desarrollo histórico de la microscopía, sigue un breve vistazo sobre los objetivos y oculares comunes hoy día. Especialmente las características ópticas y la capacidad de combinación de los correspondientes objetivos y oculares serán el centro de este capítulo. Objetivos acromáticos Los objetivos acromáticos, que están compuestos por dos a seis lentes, son especialmente aptos para el rango espectral verde amarillento para el que el ojo humano exhibe la mayor sensibilidad. Sin embargo, una pequeña desviación permanece en el sector violeta azulado y rojo del espectro, que ocasiona durante la observación de objetos de color un débil borde de color. Como estos objetivos son ópticamente sencillos y relativamente insensibles mecánicamente, son ampliamente utilizados en la práctica microscópica habitual. Objetivos plano-acromáticos Los objetivos plano-acromáticos están construidos y corregidos de manera similar a los objetivos acromáticos. Sin embargo, contrariamente a los objetivos acromáticos, tienen un campo visual completamente plano, de manera que se garantiza que también en el sector periférico del campo visual se obtiene una imagen nítida. Gracias a estas características ventajosas, son especialmente aptos para la microfotografía. Los objetivos acromáticos y plano-acromáticos son empleados en combinación con los oculares de Huygens, los planos, ortoscópicos y los de compensación. Objetivos apocromáticos Los objetivos apocromáticos son sistemas sensiblemente más complicados y tecnológicamente más exigentes que los acromáticos, es decir, tanto respecto a la cantidad de sus lentes, como respecto a la selección de los materiales ópticos empleados. Las lentes son fabricadas con cristales ópticos especiales compuestos de fluorita (CaF2: Fluoruro de calcio) natural o sintética. Las propiedades ópticas de la fluorita suprimen la desviación cromática en la zona morada que se presenta en los acromáticos. Sin embargo, permanece un pequeño error cromático de aumento, que es eliminado totalmente por oculares de compensación. Debido a la impecable corrección para todas las longitudes de onda del espectro visible, otra ventaja de los apocromáticos consiste en la gran abertura numérica, responsable de una mejor resolución y una mayor luminosidad de la imagen. Gracias a estas propiedades los apocromáticos son aptos especialmente para trabajos científicos y diagnósticos exigentes. Objetivos plano-apocromáticos Los objetivos plano-apocromáticos corresponden en sus rendimientos a los apocromáticos. La curvatura de campo visual, que en los acromáticos y apocromáticos aparece en la periferia del campo visual, se suprime con estos objetivos. Por eso se los utiliza en la microfotografía. Oculares de Huygens Los oculares de Huygens se caracterizan por su construcción especialmente simple. El sistema óptico se compone de dos lentes plano-convexas que con sus lados convexos enfrentan al objetivo. Entre la lente colectora (lente que enfrenta al objetivo) y la lente ocular (lente que enfrenta al ojo) se encuentra un diafragma circular (diafragma de campo visual), que limita el campo visual. Los oculares de Huygens, a pesar de su construcción simple, están ópticamente muy bien corregidos y representan por eso el tipo ocular más empleado. Se utilizan en combinación con todos los tipos de objetivos.
  • 4. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.14 Información sobre objetivos y oculares Juego de Ciencias Naturales KEM 308 Oculares planos Los oculares planos tienen principalmente una construcción semejante a los oculares de Huygens. La lente ocular contiene dos lentes individuales pegadas, de manera que los oculares planos forman en total un sistema de tres lentes. El diafragma de campo visual se encuentra en el interior de la lente ocular. Compensan parcialmente la curvatura del campo visual y la remanente desviación cromática de los acromáticos y apocromáticos. Además, tienen un campo visual mayor que los oculares de Huygens. Por su efecto compensatorio, estos oculares también pueden emplearse en la microfotografía. Oculares ortoscópicos Los oculares ortoscópicos se asemejan sensiblemente a los oculares planos. La única diferencia consiste en la disposición del diafragma de campo visual, que en estos tipos se encuentran dispuestos delante de la lente colectora. Ópticamente están mejor corregidos que los oculares de Huygens, sin embargo no tienen efecto compensatorio como los oculares planos. Pueden emplearse junto con acromáticos y plano-acromáticos. Oculares de compensación Los oculares de compensación se componen de cuatro lentes y son, en su desarrollo, parecidos a los oculares planos. El distintivo característico es el error de aumento cromático ex profeso que actúa contra el error de los objetivos apocromáticos y prácticamente lo elimina. Por esta razón, estos oculares se emplean principalmente para observaciones con apocromáticos o plano-apocromáticos.
  • 5. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.15 Introducción al trabajo de microscopía Juego de Ciencias Naturales KEM 308 Introducción al trabajo de microscopía El experimento explica la conformación de un microscopio e introduce la técnica del trabajo de microscopía. Se muestra cómo se utiliza correctamente el diafragma iris y cómo se origina la imagen microscópica en 2 etapas. Equipo: Microscopio Papel transparente Preparado permanente coloreado (p. ej. corte histológico) Ajustar el preparado Colocar el microscopio sobre la mesa de manera que se pueda mirar cómodamente a través del ocular. Colocar el preparado permanente coloreado sobre la platina del microscopio y fijarlo allí. Encender la luz del microscopio (si posee una) y con ayuda de la palanca de diafragma abrir el diafragma iris en el condensador. Los microscopios más sencillos, en lugar de una luz, tienen un espejo. Ahora intercalar el objetivo de menor potencia (p. ej. 5x) en la trayectoria de los rayos. Mover el preparado para que quede exactamente en la mancha luminosa visible en la lente frontal del condensador. Recién ahora mirar con ojo relajado a través del ocular. Con ayuda del ajuste grueso, cambiar la distancia del objetivo al preparado hasta que aparezca una imagen aproximada. Después, regular con el ajuste fino hasta obtener una imagen nítida. Al trabajar con el microscopio, mover un poco el preparado, primero a la derecha y luego a la izquierda. A continuación, alejarlo algo. Fijarse, como con esto se modifica la imagen microscópica en relación al preparado. Cambio de objetivo Llevar un punto conveniente del preparado al centro del campo visual y después, uno por uno, intercalar el objetivo de la potencia siguiente en la trayectoria de los rayos. Con cada cambio de objetivo, la imagen ajustada debe aparecer nuevamente. Luego se efectúa el ajuste fino de la imagen. Uso correcto del diafragma iris Con un aumento total de 100x, ajustar nítidamente la imagen. Por de pronto, abrir el diafragma iris (diafragma del condensador) completamente; la imagen aparece entonces débil y falta de contraste. Ahora, cerrar el diafragma iris lentamente hasta que la imagen microscópica tenga un contraste que pueda calificarse de aceptable. Sacar el ocular del tubo y mirar desde arriba dentro del tubo. Se ve entonces la imagen del diafragma iris como un circulo luminoso sobre la lente trasera del objetivo del microscopio. En la microscopía esto se llama posición 2/3, porque el diafragma iris está abierto como para que el cono de iluminación ilumine dos tercios del objetivo del microscopio. Colocar nuevamente el ocular y cerrar el diafragma iris hasta el tope. Ahora se ve que los contornos en la imagen microscópica presentan bordes de difracción. Imagen intermedia Ajustar el preparado con el menor aumento y después sacar el ocular del tubo. Ahora, sostener un cuadrado de papel transparente sobre la boca abierta del tubo. Oscurecer el aula para que, con la ayuda de los ajustes grueso y fino, la imagen microscópica se pueda proyectar sobre el papel transparente. A la imagen que ahora es captada sobre el papel transparente se la denomina imagen real intermedia aumentada del objeto. La imagen intermedia del objeto ya contiene todos los detalles de estructura. Para el ojo desnudo, estos detalles aún no son perceptibles, pues se encuentran por debajo del límite de resolución del ojo. La imagen intermedia tiene que aumentarse detrás, de tal manera que los detalles allí contenidos puedan ser captados también por nuestro ojo.
  • 6. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.15 Introducción al trabajo de microscopía Juego de Ciencias Naturales KEM 308 Aumento posterior Al colocar nuevamente el ocular, la imagen parecerá poco nítida. Para un enfoque nítido, se debe levantar levemente el tubo. La imagen intermedia no se origina en el extremo superior del tubo, sino dentro del ocular. Tomar el ocular con la mano y desenroscar la lente ocular superior. En el anillo portador de la lente está grabado el aumento. La distancia focal de esta lente ocular se puede determinar puesto que, p. ej., se reproduce una cruz de ventana en forma nítida sobre el papel transparente. Ahora, mirar dentro del ocular abierto. Se nota que allí se encuentra un diafragma de campo visual. Medir la distancia desde el diafragma de campo visual hasta el extremo superior del ocular. Luego, controlar si esta distancia corresponde a la distancia focal del lente ocular. La imagen intermedia desarrollada por el objetivo se origina en el plano del diafragma de campo visual. Ahora, volver a ajustar nítidamente el preparado. Cambiar el ocular por un ocular con otro aumento (p. ej. 5x). Controlar, con el cambio de ocular, si la imagen microscópica permanece nítida. El ocular trabaja como una lupa. Provoca un aumento posterior de la imagen intermedia. De este modo se hacen visibles, también para nuestro ojo, los detalles de estructura contenidos en la imagen intermedia. Cuidado del microscopio Antes de guardar el microscopio, comprobar si las lentes y la platina se encuentran limpias. Las manchas de suciedad se humedecen con agua destilada y luego se secan con un paño de lino libre de polvo. Finalmente se cubre el microscopio con una funda y se guarda en un armario para microscopios.
  • 7. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.16 Preparados frescos para examinar con el microscopio Juego de Ciencias Naturales KEM 308 La mayoría de los preparados microscópicos sólo son para la observación momentánea de un objeto (viviente) y por este motivo no debieran guardarse. Estos preparados se denominan preparados frescos. En la mayoría de los casos, se examinan los preparados en una gota de agua. La confección de preparados frescos sólo requiere, por lo general, una reducida preparación previa, la que se rige por el tipo de objeto. Los utensilios nombrados seguidamente son suficientes para las investigaciones más corrientes. Equipo: Vaso de precipitados Cubreobjetos Lápiz vidriográfico Papel de filtro Varilla agitadora de vidrio Aguja lanceta Microscopio Portaobjetos Cápsula de Petri Pincita, puntiaguda Frasco cuentagotas Alfiler de preparación, puntiagudo Tijera de preparación Mango de bisturí Hoja de bisturí Placa de vidrio (aprox. 40 x 30 cm) Cartón negro Productos químicos y materiales de investigación: Agua destilada Material de investigación biológica Advertencia: ¡Cuidado, peligro de cortes! Realización: Usando un frasco cuentagotas, poner una gota de agua destilada sobre un portaobjetos. Debido a que el tiempo de observación es, por lo general, sólo corto, puede usarse agua destilada sin que, en la mayoría de los casos, se dañe el objeto. Llevar el objeto a examinar a la gota de agua y tapar con un cubreobjetos. El cubreobjetos se coloca con un canto en forma oblicua al lado de la gota de agua. Después, bajar lentamente el cubreobjetos sobre el objeto, sin permitir que queden burbujas de aire. Para la observación de objetos más grandes, estos se deben llevar, después de cortarlos con tijera o bisturí, con una pincita a la gota de agua. Luego se los ubica en la posición correcta mediante los alfileres de preparación. Los objetos muy pequeños, como p. ej., plancton o granos de almidón o fécula, se llevan a la gota de agua con ayuda de una varilla de vidrio, una pipeta con tetilla de goma o con agujas de preparación. Los preparados se confeccionan mejor sobre una placa de vidrio. En la preparación de objetos pobres en contraste, debajo de una parte de la placa de vidrio debiera ponerse papel de filtro blanco y bajo la otra, cartón negro. De este modo, los objetos pobres en contraste se pueden preparar bien sobre el fondo oscuro. Indicaciones para la eliminación de los residuos: Los portaobjetos y cubreobjetos usados deben colocarse en un vaso de precipitados con agua inmediatamente después del trabajo con el microscopio. Esto evita el secado del preparado y facilita la limpieza de los objetos de vidrio.
  • 8. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.17 Técnica de corte manual Juego de Ciencias Naturales KEM 308 Debido al tamaño y espesor de muchos objetos biológicos, éstos no pueden ser sometidos directamente a un examen microscópico. Estos se deben preparar con anterioridad mediante cortes, en lo posible delgados. Esto puede hacerse a mano alzada con un corte de bisturí o mediante un micrótomo. Para practicar la técnica del corte manual es adecuada la médula de saúco. Los espesores normalmente obtenibles están en los 50 micrones (20-30 micrones con práctica). ¡Primero tratar exhaustivamente el tema Realización y después comenzar con la técnica del corte! Equipo: Vaso de precipitados Cubreobjetos Microscopio Portaobjetos Pincita, puntiaguda Frasco cuentagotas Aguja de preparación, puntiaguda Frasco con tapa de encajar a presión elástica Hoja de afeitar Productos químicos y materiales de investigación: Etanol Agua destilada Glicerina Médula de saúco o plantas que tengan médula Material de investigación Advertencias: ¡Cuidado, peligro de cortes! ¡Apagar todas las llamas! ¡El etanol es fácilmente inflamable! Realización En un trozo de médula de saúco, obtener con la hoja de afeitar una primera superficie de corte lisa. Después, sostener el trozo de médula de saúco con los primeros tres dedos de la mano izquierda (los zurdos proceden a la inversa). Colocar la hoja de afeitar con el extremo que mira hacia la mano sobre el corte inicial del tallo de médula de saúco, algo alejada del borde. Después, correr el filo horizontalmente por todo su largo, de izquierda a derecha y hacia el cuerpo, a través del objeto. La hoja de afeitar corta inmediatamente la médula de saúco. El espesor de corte puede regularse fácilmente durante el corte, mediante el correspondiente ladeado de la hoja de afeitar. Poco antes de seccionar totalmente el objeto, apretar el filo de la hoja de afeitar algo hacia arriba, de manera que el corte se "debilite". Esto garantiza que dentro del corte exista al menos un lugar suficientemente delgado. La mayoría de las veces no será necesario completar el corte total, ya que en el campo visual del microscopio de todos modos sólo puede verse una parte del corte. El primer corte siempre es desechado, ya que, por regla general, no presenta una superficie de corte limpia. Los siguientes cortes se llevan a una gota de agua en un portaobjetos. Después se los cubre con un cubreobjetos; entonces se puede observar el corte con x aumentos. Aclaración: Como muchos objetos son, para el corte, mucho más blandos y pequeños que la médula de saúco, éstos se colocan dentro de la médula de saúco y se cortan junto con ella. Al cortar objetos húmedos, la hoja de afeitar se moja con el mismo líquido con el que está embebido el objeto. En el caso de objetos lignificados, éstos se colocan varios días en una mezcla de alcohol puro y glicerina en la relación 1 : 1. Indicaciones para la eliminación de los residuos: Llevar los cortes sin tratar al abono vegetal. Tirar los restos de cortes tratados al recipiente recolector de sólidos orgánicos. Volcar la mezcla usada de glicerina-alcohol al recipiente de soluciones orgánicas.
  • 9. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.19 Fijación de preparados microscópicos Juego de Ciencias Naturales KEM 308 Todos los objetos biológicos están sometidos a una pronta modificación (autólisis) cuando se los separa de su relación natural. Por eso, su estructura ya no corresponde a la de su estado viviente. Sin embargo, al examinar con el microscopio, se quiere conservar lo más posible su estado natural. Por eso, para evitar la autólisis, los objetos de investigación deben ser fijados. En el proceso de fijación, el protoplasma es llevado rápidamente a la solidificación por precipitación de la albúmina. Adicionalmente, debido al fijado, el protoplasma pierde su relativa semipermeabilidad. Recién esto permite la penetración de la mayoría de los colorantes. Equipo: Pipeta graduada Probeta graduada Pincita, roma Balón para pipetear Frascos con tapa de encajar a presión elástica Gafas de protección Guantes de protección Mango de bisturí Hoja de bisturí Productos químicos y materiales de investigación: Agua destilada Etanol Glicerina Vinagre de madera, purificado Isopropanol Metanol, puro Solución de ácido crómico al 2% Solución de formaldehído al 38-40% Isopropanol al 50% Isopropanol al 90% Ácido acético al 96% (ácido acético glacial) Material a fijar Advertencias: ¡Trabajar en un lugar bien ventilado, en lo posible debajo de un extractor! ¡Usar gafas y guantes de protección! ¡Cuidado, peligro de cortes! ¡El etanol, el isopropanol y el metanol son fácilmente inflamables! ¡El metanol es tóxico si se aspira o ingiere! ¡Evitar el contacto con la piel! ¡El formaldehído es tóxico si se aspira o ingiere! ¡Evitar el contacto con la piel! ¡El formaldehído produce quemaduras! ¡El ácido acético produce quemaduras! Realización Para la fijación siempre debe emplearse material fresco, que se guarda mejor en un frasco con tapa de encajar a presión elástica sobre un poco de algodón. De esta manera, el agente de fijación puede penetrar en el objeto por todos los costados. Los objetos a fijar deben tener cada uno un volumen de aprox. 1 ml, de manera que el agente de fijación pueda penetrar con rapidez. La cantidad necesaria del agente de fijación debe ser aprox. 50 veces el volumen del objeto.
  • 10. LEYBOLD DIDACTIC GMBH . Leyboldstrasse 1 . D-50354 Hürth . Teléfono (02233) 604-0 . Fax (02233) 604-222 . info@leybold-didactic.de por Leybold Didactic GmbH Impreso en la República Federal de Alemania Se reservan las modificaciones técnicas MK6.1.19 Fijación de preparados microscópicos Juego de Ciencias Naturales KEM 308 Frecuentemente se emplean los siguientes agentes de fijación: Formol El formol penetra rápidamente y el color natural del objeto se mantiene bien. Raramente se presentan encogimientos. Los objetos fijados en formol pueden colorearse bien con la mayoría de los colorantes. Se diluye una solución al 40% de formaldehído con agua destilada en relación 1:5 hasta 1:10. Después de la fijación, se lava el objeto en agua destilada o bien en isopropanol al 50%, hasta que ya no se perciba olor a formaldehído. Alcohol-ácido acético glacial Este agente fijador penetra rápidamente e impregna muy bien. Está compuesto por etanol puro y ácido acético al 96% (ácido acético glacial) en la proporción 3:1. Según el tamaño del objeto, el tiempo de fijación es de 1 a 24 horas. Después de la fijación, se lava el objeto en isopropanol al 90% hasta que ya no se perciba olor a vinagre. Ácido crómico Este compuesto es particularmente apto para conservar estructuras muy finas. Consiste de 100 ml de solución de ácido crómico al 2% al que se le agregan 12 gotas de ácido acético al 96% (ácido acético glacial). El objeto es fijado durante 24 horas y después es lavado a fondo con agua destilada. Agente fijador según Pfeiffer Esta mezcla de fijación es muy apta para todo tipo de algas de aguas dulces, hongos, líquenes, musgos y helechos. En esta mezcla de fijación pueden conservarse algas durante algunas semanas. Los objetos que contienen agua de mar no deben ser expuestos a esta mezcla de fijación, ya que en este caso se producen precipitados. La mezcla de fijación según Pfeiffer se compone de una mezcla de solución de formaldehído al 40%, vinagre de madera purificado y metanol, en la relación de 1:1:1. Los objetos son fijados durante 12 a 24 horas y se lavan a continuación con isopropanol al 90%. Elaboración ulterior Después de la fijación, los objetos bien enjuagados pueden guardarse en frascos con tapa de encajar a presión elástica, llenos de mezcla de conservación según Strasburger. Esta mezcla de conservación, en la que pueden conservarse partes vegetales durante varios años, se compone de isopropanol, glicerina y agua destilada en la proporción 1:1:1. Indicaciones para la eliminación de los residuos: Las soluciones de fijación usadas deben desecharse al recipiente recolector para ácidos, sales y lejías. Los objetos fijados deben secarse en el armario de secado durante 20 minutos a 80 O C y ser desechados a los residuos domésticos.