La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938).

1. Tinción de
Gram
Instituto Politecnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias
Lab. De Microbiología General
Gpo: 3QM1
Eq: 2
Lab: 4

2. Introducción
 La tinción de Gram o
coloración de Gram es
un tipo de tinción
diferencial empleado en
bacteriología para la
visualización de
bacterias. Debe su
nombre al bacteriólogo
danés Christian Gram
(1853-1938).

3.  Se utiliza tanto para poder referirse a la
morfología celular bacteriana, como para poder
realizar una primera aproximación a la
diferenciación bacteriana, considerándose
bacterias gram positivas a las que se visualizan
de color morado, y bacterias gram negativas a las
que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.

4. Tinción de Gram
 Es una tinción
diferencial .
 Según el resultado
pueden ser Gram + y
Gram -. Debido a la
estructura de la pared
celular

5. Pared celular de la Gram (+)

6. Pared Celular Gram (-)

8. Bacillus subtilis y Escherichia coli

9. Objetivo
 Realizar la técnica de coloración de Gram con
especies bacterianas conocidas.
 Observar el efecto de algunas variaciones en
la técnica de coloración.

10. Microorganismos Utilizados
 Bacillus megaterium.
 Escherichia coli.
 Staphylococcus aureus.

12. Tinción de Gram
Hacer el frotis de
cada bacteria y
fijar con calor
Colocar el frotis de
manera vertical y
dejar caer las gotas
de alcohol-acetona
hasta que dejen de
caer hilos de
colorante
Lavar con agua y
dejar secar al
aire
Cubrirlos con
cristal violeta y
dejar por 1 min.
Lavar con agua
Cubrir con Lugol
y dejar por 1
min. Lavar con
agua
Lavar
inmediatamente al
chorro de agua y
cubrir con
safranina por
1min.

13. Influencia de la edad de los
cultivos bacterianos
De cada cultivo
bacteriano (96 horas)
realizar un frotis y fijar al
calor
Teñir frotis con la
técnica de tinción de
Gram
Realizar observaciones
y concluir

14. Técnica de Gram por pasos.
Realizar cuatro
frotis con la
mezcla de E.
coli y B.
megaterium y
fijarlos al calor.
Iniciar la tinción de
Gram y separar un
frotis después de cada
uno de los pasos de la
técnica.
1) Cristal violeta
2) C.V.+lugol
3) C.V.+ Decoloración
4) Tinción completa

15. Influencia del tiempo de
decoloración en la técnica de
Gram.
Hacer dos frotis con
una mezcla de E.
coli y B. subtilis
Teñir los frotis con la
técnica de Gram
dejando actuar el
alcohol-acetona tres
segundos en uno y
tres minutos en el
otro.

16. Colorantes
 Cristal violeta  Lugol

17.  Safranina

18. Resultados obtenidos
 1. Tinción de Gram
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo
Bacillus megaterium Staphylococcus aureus Escherichia coli
Tinción de Gram

20. Influencia de la edad sobre los
cultivo bacterianos

21. Técnica de Gram por pasos

23. Influencia del tiempo de
decoloración en la técnica de
Gram.
3 segundos
3 minutos

24. Conclusiones
 Esta tinción nos permite dividir a los
microorganismos en dos grandes grupos y
nos ayuda a:
 Proporciona contraste entre el
microorganismo y el medio que lo rodea,
permitiendo diferenciar varios
tipos morfológicos. Permite el estudio de las
estructuras internas de la célula bacteriana,
tales como paredes celulares, vacuolas o
cuerpos celulares.

25. Bibliografia
 Brock “Biología de los microorganismos”10ª
Ed. M.T. Madigan J. Martinko 2003
 http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.mx/p/tinci
on-de-gram_20.html
 Microbiología y parasitología medica 2ª Ed.
Pumarola-torres J.A. Garcia R. 1995