Este documento describe el procedimiento para realizar una tinción de Gram. La tinción de Gram permite identificar la morfología y tipo de tinción de bacterias, ya sea Gram-positiva o Gram-negativa. Esto se debe a las diferencias en la pared celular. El procedimiento incluye la preparación de extensiones bacterianas y su tinción con violeta de genciana, lugol, alcohol y safranina. El resultado muestra que las bacterias Gram-positivas se tiñen de violeta y tienen una capa densa en la pared, mientras que las Gram-

1. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y
CIENCIAS DEL MAR
FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO
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CÓDIGO
MATERIA
Microbiología
NOMBRE
DavidQuiñonez
PARALELO
1
TEMA DE LA PRÁCTICA
Tinciónde gram
OBJETIVOS GENERALES:
Identificarlamorfología(coco,bacilo, etc.) ytipode tinción(GrampositivaoGram negativa),de la bacteria
proporcionada en clase.
INTRODUCCIÓN:
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio
óptico.La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más
simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Si se desea simplemente aumentar el
contraste de las célulasparala microscopía,sonsuficienteslosprocedimientos que usan un solo colorante
llamadode tinciónsimple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas
las células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción
Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos: gram-
positivas y gram-negativas. Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica
diferenciasfundamentales de la pared celular de las distintas bacterias. Mientras que las bacterias gram-
negativassonconstantesensureacción,losmicroorganismosgram-positivospuedenpresentar respuestas
variables en ciertas condiciones (son gram lábiles). (S., 2015)
Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias gram-positivas pierden la propiedad de retener el
cristal violeta, y en consecuencia, se tiñen por la safranina apareciendo como gram-negativas. Análogo
efectose produce en ocasiones por cambio en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en la
ejecuciónde latécnica.Poreste motivo,esprecisoatenerse, en la práctica, al procedimiento establecido.
Para explicar el mecanismo de la tinción de gram se han propuesto varias hipótesis fundadas en la
naturaleza química de las paredes celulares de los microorganismos. (S., 2015)

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Aquí puedes ver las diferencias estructurales y químicas de los dos tipos de pared bacteriana:
Pared Gram +
capa densay uniforme de 200 a 800 A
ácidosteicoicos
polisacáridos
proteínas(pocasveces)
glicopéptido(50% del pesoseco)
Pared Gram -
capa internadelgadade 20 a 30 A cubiertapor
capas externasde densidadmenor)
lipopolisacáridos
lipoproteínas
proteínas
glicopéptido(10% del pesoseco)
Mecanismos de la tinción de gram:
Productos que se utilizan Reacción y coloración de las bacterias
GRAM + GRAM -
1) Cristal violeta Células color violeta Células color violeta
2) Lugol solución iodada Se forma el complejo CV-I. Las
células continúan teñidas de
color violeta.
Se forma el complejo CV-I. Las
células continúan teñidas de
color violeta.
3) Alcohol Se deshidratan las paredes
celulares. Se contraen los
poros. Disminuye la
permeabilidad. El complejo CV-I
no sale de las células que
continúan teñidas de color
violeta.
Eliminación por extracción de
grasas de las paredes celulares.
Aumenta la porosidad. El
complejo CV-I se separa de la
célula.
4) Safranina Células no decoloradas; quedan
teñidas de color violeta.
Células decoloradas; se tiñen de
color rosado.

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EQUIPOS Y MATERIALES:
Aza de platino
Violeta de genciana
Lugol
Sulfadiacina
Alcohol 95°
Mechero
Portaobjeto
Microscopio
Agua destilada
Agar con bacteria
PROCEDIMIENTO:
Extensión: En un porta bien limpio (con alcohol, papel de filtro y flameado) se coloca una gota de agua
destiladaala que con el asa de platino,previamenteesterilizada a la llama, se lleva una pequeña cantidad
de suspensión de bacterias o, en su caso, de una colonia.
Con el asa se extiende la gota y las bacterias sobre el porta-objeto y se fija la extensión por el calor,
calentando suavemente a la llama del mechero hasta que se seque.
Coloración:
a) 1 minuto en violeta de genciana,
b) se lava con agua destilada,
c) 1 minuto en lugol,
d) se decolora con alcohol de 95°,
e) se lava con agua destilada,
f) 1 minuto en sulfadiacina,
g) se lava con agua corriente,
h) se seca suavemente,
Observar en el microscopio.
RESULTADOS: (Puede incluir información, características)

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Fig1.- Procedimiento de la tinción de gram
Fig2.- tinción de cajas Petri 10°, 101
, 102
, 103
respectivamente

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Fig3.- Portaobjetos antes y después de tinción
Observaciones:
Recordar que por cada reactivo que se le adicione a las muestras dejar 1 minuto cada uno.
Tener todo esterilizado y cuando se coge la muestra de bacterias, coger la que este más aislada y en una
proporción pequeña.
Conclusión:
Las bacterias gram + se tiñen de color violeta, su pared tiene una capa densa y uniforme.
Las bacterias gram – se tiñen de color rosado, su pared tiene una capa interna delgada.
Las bacterias que se encontraron tienen forma bacilar y coco.
Debidoa ladiferenciaentre lasplacas se puede decir que las muestras tomadas estaban contaminadas ya
que debió teñirse todas las placas del mismo color.
Bibliografía
S., S. G. (2015). http://es.scribd.com. Obtenido de http://es.scribd.com:
http://es.scribd.com/doc/51627228/PRACTICA-3-La-Coloracion-de-Gram#scribd