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     æ ˆ ¿˘ §            Journal of Maize Sciences 2002 ,10 (2) :22¡« 23 ¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡


[ ˛˜´–”¯        ] 1005-0906 (2002) 02-0022-02




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                             Assistant Metho d of ELISA To Select Q PM Germpla sm
         DING Zhan- sheng1 , KANGJi-wei2 ,ZHANG Shi- huang3 ,FU J un- hua3 ,LI Xin- hai3 , YUAN Li-xing ,LI Ming- shun3
           ( 1 . Institute of Oil and Grain Crops , Hebei Academy of Agricultural & Forestry Sciences , Shijiazhung 050031 ;
                             2 . Institute of Crops , Sichuan Academy of Agricultural Sciences , Chengdu 610066 ;
            3 . Institute of Crops Breeding and Planting , china Academy of Agricultural Sciences , The Key L aboratory of
                Crop Genetics and Breeding of Agricultrue Department , AMBION ET China L ab , Beijing 10081 , China)
          Abstract :Basing on the Lysine content in maize endosperm is positively relative with the EF-1a ,we can estimate the
Lysine conten in maize endosperm by detecting EF-1a conten with ELISA , so establish a novel method to select QPM
germplam. Using this method ,we have detected the Lysine content of 653 samples of QPM ,we found the method is sim2
ple ,quick and sensitive to select QPM germplasm.
          Key words :QPM ; ELISA ;Detection


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[ ˚‚¨˘        ] 2001-12-18                                                                    † ¡£æˆ¯¨Ø—˜ –¸Æ”‹`¿º                                  EF-1 (
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     22                                             zycnzj.com/http://www.zycnzj.com/

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                                                                                            ¿
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                                                                          ,ˆ     ELISA ˜•‰•¤‚¡`¸                   653 ‚    QPM …ˇ            ,˘—
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                                                                                                                            ,
     (1) ‰«EF-1 ƨ¡”ˇ¡˚˝
              ƒ`              333 –¶ ¡£ 997 ƒ L CCB                   œ¡æ¯˚æˆ˚ ¡£
(1159 g/ L NaCO3 ,2193 g/ L NaHCO3 ,pH916 ) »”‡”
                                                                                                      [ †˛ ¿… ˛˜ ˇ     ]
—…¨º 3 ƒ L EF-1 ƨ¡” ,»¨ ¡£
                ƒ`                                                    [1] Gloverson L Moro , et al1 Characterization of the variability in lysine con2
      (2) ˆ‚`“¿˜…¨ºø˘•Æ¨¡” ¡£Ł¿”˝                                         tent for normal and opaque-2 maize endosperm[J ] 1 Crop Sci1 1996 ,36 :
— ¡¢ ¡£‚¿˜ˇ¨…¨º
   ı—¶                              67 ƒ L CCB ,‡¿˝                       1651 - 16591

‚¿˜…¨º         33 ƒ L EF-1 ˇ¡˚˝”
                         ƒ`                 ,»¨ ¡£ˆ¿•        EF-      [ 2 ] Jeffrey E1Habben , et al1 Elongation factor 1 concentration is highly cor2
                                                                                                                        ƒ`
                                                                          related with the lysine content of maize endosperm[J ] 1 Proc1 Natl1 A2
ƒ`
1 ƨ¡”‚·ª`‰‚¿ ¡£
                                                                          cad1 Sci1 USA 1995 ,92 : 8640 - 86441
      ( 3) 4 ¡ ´„„ ¡£
             ˇ
                                                                      [3] Gloverson L Moro , et al1 Phenotypic effents of opaque2 modifier genes in
                                                                          normal maize endosperm[J ] 1Cereal Chem1 1995 ,72 (1) :94 - 991
4 ¡¡ ¨º
   …              ƒ`
               EF-1 ¿„          ( »¿„ )
                                                                                         š
                                                                                         : (0311) 5051759 - 3329
      ( 1) ˇ· ¡£„»ˆ‚`“—¿„›¨”                     ,‚¿˜…                           E- mail : zhanshengding @1631com

                                        zycnzj.com/http://www.zycnzj.com/                                                                     23

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辅助选择优质蛋白玉米种质的Elisa 方法

  • 1. zycnzj.com/ www.zycnzj.com æ ˆ ¿˘ § Journal of Maize Sciences 2002 ,10 (2) :22¡« 23 ¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡¡ [ ˛˜´–”¯ ] 1005-0906 (2002) 02-0022-02 ‚¤œ¡æ¯˚æˆ˚˜ ELISA •‰•¤ ¶¡…œ,¿…˛ 1 2 ,¯˚»˝ 3 ,‚¿¡Ł 3 ,—´”£ 3 ,‹`ƒ——3 ,ˆ¸‡ 3 (1 ”––˚¡¯'`¿˘§”`‚˝˛—¿¸ø ,˚fl…fl 050031 ;2 ¸˜·¤˚¡¯'¿˘”˛¸ø ,‡¶… 610066 ; 31 √ ≠ ,¯'†¿˛¯·«ª˚Ø˚ AMBIONET —„œ˚Ø˚ ,––' 100081) [ “ ¡¡ “ ] »ø戯¨Ø—–¸Æ”‹`¿º ƒ` EF-1 ”‹`¿‡˚ˇłˇ„ ,߈ ELISA ……˚ı¶¤`¿…†¯¨Ø— ƒ` EF-1 ”‹ `¿ ,‰ł¶ł„†¯¨Ø—–¸Æ”‹`¿ ,‰¤`¢`¸‚¤œ¡æ¯˚ æˆ˚˜ ELISA ……˚ıˇ ¡£˝¤„¶ 653 • QPM …ˇ ˜…† ,–ˆ‚ˆ•‰•¤—…–ª ¡¢ ¡¢ ¿¸ …¨•˜ª ,¿——§‚¤œ¡æ¯˚æˆ˚ ¡£ [ „…·˚ ] ¯˚æˆ ; ELISA ( ˆ‚`“ˆ˛‚‰•·ƒ ) ;…† [ —˝…•”¯ ] S 5131033 [˛˜ˇ–Œ˚¶´º ]A Assistant Metho d of ELISA To Select Q PM Germpla sm DING Zhan- sheng1 , KANGJi-wei2 ,ZHANG Shi- huang3 ,FU J un- hua3 ,LI Xin- hai3 , YUAN Li-xing ,LI Ming- shun3 ( 1 . Institute of Oil and Grain Crops , Hebei Academy of Agricultural & Forestry Sciences , Shijiazhung 050031 ; 2 . Institute of Crops , Sichuan Academy of Agricultural Sciences , Chengdu 610066 ; 3 . Institute of Crops Breeding and Planting , china Academy of Agricultural Sciences , The Key L aboratory of Crop Genetics and Breeding of Agricultrue Department , AMBION ET China L ab , Beijing 10081 , China) Abstract :Basing on the Lysine content in maize endosperm is positively relative with the EF-1a ,we can estimate the Lysine conten in maize endosperm by detecting EF-1a conten with ELISA , so establish a novel method to select QPM germplam. Using this method ,we have detected the Lysine content of 653 samples of QPM ,we found the method is sim2 ple ,quick and sensitive to select QPM germplasm. Key words :QPM ; ELISA ;Detection ¡¡¡¡ æˆ˚˙“˜¸˙`ˇ”˝`‚˚‡˛ ,«˘˝¤æˆ¯ ˜–¸Æ ¡¢ «–¸Æ”‹`¿ ,߈¯¨Ø˛—·—˚˛»ø ¨Ø—¨–•ƒ¨¸…¥˛‚¶fl˛–—Ł˜–¸Æ ¡¢ «–¸Æ¨ –£‡¯¨Ø†˚¶¨¨˘˝¤æˆ˜¯'—· ¡£‰ł»†‰•¢ –—Ł–»ø¸Æ ,“ł˘•˚‰ˇ† ¡£†ˆ ˚¶˛‚˜‰łæ „ QPM ˜……˚ı´•ˇfi»˚˙†ˆ†»–¥”˝»‰»…… ˆ˜˚˘•˚ ,¡¯˚æˆ ( QPM) ˘• ,˚˙ ˚ı˘˝¤æˆ˜„˙‚ ‰»ˇ“ ˛“ QPM ‰»ˇ ¡£ »ˇ“˜—¿¿˛ ¡£æˆ`£—˚˜•†…†» ø˜„»‰ł»†‰Æ‚ QPM ‰»ˇ”˝‰»˜¯”ˇ ø” ,¯¨Ø—…… 75 %¡« 80 % , ¯—…… 15 % `ƒ¸fi˘‰”˝˚˚ƒ— ¡£«¯¨Ø—˚˛»ø˛“¶»ø¿˘˜ ¡« 20 %¡£¯—˜ ˚”‹`¿ˇ¶‰ˇ‚ ,–»ø¸Æ؇ ‚·ˇ˝‡ ,—˚˛»ø˜…``¿†»˝‹ ,·¿”ˇ— O2O2 »ø ”ˇ ,˘•˚‰ˇ”ˆ ;¶ł¯¨Ø ˚‰Æ„„†»”ˇ ,¨–•ƒ —˝`£¯¨Ø—˜–¸Æ”‹`¿—”·† ( Glover2 –¸Æ ¡¢ «–¸Æ¨¥˛‚¶fl˛¸ø–—Ł˜–»ø¸Æ ,¸ø˘•˚ son L1 Moro , 1996 ) ¡£·¸ ,¡æ¯¨Ø–¸Æ”‹`¿‰ˇ ‰ˇ† ¡£˜¿˙¯˚ æˆ ( QPM) ˜……˚ı´•ˇ , ‚˜˚˝‡˛“ QPM ˜„…»•‰ ¡£ “˚˙߈¯¨Ø˝»–»ø opaque-2 (O2 ) Æ‚¯¨Ø— ˆ‚—§”ˇ†ª˛•¤†¶¤æˆ`£—–¸Æ”‹`¿ •ˆ”„ ¡¢ ¸¶¨´ ;–¨«…˘•‰•¤…¥ ,¿˚˙…¨•—‰ˇ [ ˚‚¨˘ ] 2001-12-18 † ¡£æˆ¯¨Ø—˜ –¸Æ”‹`¿º EF-1 ( ƒ` [ …‰Ø ] ¶¡…œ (1971 - ) ,˜—,¸¶˚¿ ,”––˚¡¯'`¿˘§”œ—¿ ˚”ˇ ‡ ‡⁄ ) ”‹ `¿ ˇ ł ˇ „ ( Jeffey E1 – ,·˚´˛¯·«—¿ ¡£ Habben , 1995 ; Gloverson L1 Moro , 1996) ,·¸¿ß [ »ø‰ˇ˜¿ ] ¯'†¿˛¯·«ª˚Ø˚¿“•¯¿˛ ˆ ELISA ( ˆ‚`“ˆ˛‚‰•·ƒ ) ¶¤`¿†¶¤¯¨Ø— EF- 22 zycnzj.com/http://www.zycnzj.com/ © 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
  • 2. zycnzj.com/ www.zycnzj.com ¶¡…œ¨ :‚¤œ¡æ¯˚æˆ˚˜ ELISA •‰•¤ ƒ` 1 ”‹`¿ ,·¶ł——§˝˘†¯¨Ø—˜–¸Æ”‹`¿ ¡£ ¨º 200 ƒ L TTBS ( 9g/ L NaCl , 25 mM Tris- HCl , 115 % QPM —†ˆ•‰•¤ ,¿˘˝¤æˆº QPM Tween-20 , pH715) ,3 min ”„» TTBS ,·¸˛“ˇ·» ˜‰»»»‰»”·œ—‚¡–¸Æ”‹`¿‚˜˘˝¤`£ ·˛ ¡£‚·ˆ TTBS ˇ·`‰·˛ ¡£ —˝˜…ˇ»¥Œ ,·¶łÆ‚¡æ¯˚ æˆ (2) ‚¿˜…¨º 100 ƒ L ˆ TTBS ˇ¡˚˝ 1000 –¶˜ ˚˜—§´˚ ¡£ˆ˘˝¤æˆ ( ¨ Mo17 ) ı—¶ ,ˆ ƒ` EF-1 ¿„ ( CIMMYT Æ„' ) ,25 ¡ ´ 4 h ¡£ ˇ QPM ( ¨ CML177 ) —¶ ¡£ ELISA •·ƒ— , O1D · ¡¢ ¨—¶˜ø˘• ,¸ˆ˘–¸Æ”‹ 5 ¡¡ ¨º…—`¸Æ‹ˆ‚–Œ…˙˜ł¿„ˆ¿„ … `¿· ¡¢ ¨—¶ ;O1D —¡ ¡¢ ¨ı—¶ ( ¶¿„ ) ˜ ,¸ˆ˘–¸Æ”‹`¿—¡ ¡¢ ¨ı—¶ ¡£ O1D ( 1) ˇ· ,˝‹˙ ¡£ ‰Øı— ¡¢ —¶fi…˜¿•˛“…‚‚…¶– ,O1D · (2) ‚¿˜…¨º 100 ƒ L ˆ TTBS ˇ¡˚˝ 1 000 ˜¶ —¶˜¿•˛“¨…¶ ,–˚ø˘•–¸Æ”‹`¿˜ ¿„ ,25 ¡ ´ ˇ 2 h ¡£ ¶ ,–ª¡æ¯˚ ˚ ¡£‚ˆ•‰•¤˜……˚ı` ‡¨ˇ´ ¡£ 6 ¡¡…¨º…—`¸Æ‹ˆ‚˛ 1 ¡¡ …–‚†ø ( 1) ˇ· ,˝‹˙ ¡£ (2) ‚¿˜…¨º¯¤¶¨˛“ 1 mg/ mL ˜ ƒ 200 L ˛ (1) `¸fi—‰¯ ,4 ¡ˇ´„„” , ¨¥ (ˇı»ø•`¸Æ ,pNPP) ¨” , ˛ˆ 917 %¶ ·…• ¯”˝„ߢ⁄ ,¨»” 70 ¡ ´”‚ ˇ 48 h ¡£ (pH918) ¨‰ ¡£ ( 2) ˆ˜¥•»œ‰«¯¨Ø˜¥‡–¶—¡ 1mm ˜ ˇ‚• ,˜¥˝Œ 1 •†˜`ˇ” ,ˆ‚„˘ł˙„‰«˜¥•»œ‡ˇ·‚ 7 ¡¡ `˚ ¶ » ,˜¥ 2 •ø˘• ¡£ •·ƒ 30min ” , ˆˆ‚–Œ˙ ( MRX- ¢ ) †ø˘•˜ 2 ¡¡ ƨ¡ ƒ` EF-1 O1D ,‰ł——˚•˛ ¡£ (1) ‡˘¨¡ 25mg ¯¨Ø• ,•¯¨º 1 mL º—˜„˜ ,ˆ¿ 8 ¡¡ ¡ ¡¡ Æ — ‰ ‚ø˘•‡˘`‰• ¡£ ELISA ˚˙¿„› ¡¢„˜ˆ•·ƒ”˝ˆ‚˜‚—§ ¿ (2) ¯¨Ø•—…¨º 1 mL EF-1 ƨ¡” ( 1215 mM ƒ` ƒ´ ·»fl•·ƒˇ‰Æ”ˇ¶ł•¢„˘·˜…†……˚ı ,˚˙ˆˆ‚ ¯¸Æ˜˘ ,1 %SDS ,pH10 ,`ˆ˙…¨º 2 % -ˇ»ø·… , ) ,·˘ˇ·»¨ ¡£ ˛“–Œ…˙˛ ,‰ł——¿„› ¡¢„¶¤— ¡¢¤`¿†¶¤˜”ˇ…… ¿ ¶ ˝¤•‡˜† ( 3) ”ª˛´¡·†˜˙Æ¡ ,37 ¡ „ ¡£ „ ˚ı ¡£¸˜˝»‡¯ª— : ( 1 ) `؈¶¨‚ ,…†ˇ¶¨¿· (4) º—˜ ,14 000 r/ min ,10 min ,ˇ˙”…·˛“ EF- 1¡« 10 ng/ mL ; ( 2 ) ¤»fl—˙¿ ,‚·—”ˆ ; ( 3 ) …–ª ¡¢ ¿ ƒ` 1 ƨ¡” ,‰«˘“¨º—´„˜–‚ˆ ¡£ˆ¿•ø˘•‚·Æ ¸ ; ( 4) •ˆˇ¶‰ˇ˝ ,˚˚ˆ·ƒ·¯œø˘• ¡£ 2000 ƒ` ¨¡`‰·˛ EF-1 ¡£ ˜Œ—„œ¯'¿˘”˛¸øº”––¯'¿˘” ¡¢ ¸˜·¤¯'¿˘””ˇ ,ˆ ELISA ˜•‰•¤‚¡`¸ 653 ‚ QPM …ˇ ,˘— 3 ¡¡ –»¿„› —´˚˛“ 60 %¡£–ˆ‰Łœ ELISA ……˚ı ¿——§ , (1) ‰«EF-1 ƨ¡”ˇ¡˚˝ ƒ` 333 –¶ ¡£ 997 ƒ L CCB œ¡æ¯˚æˆ˚ ¡£ (1159 g/ L NaCO3 ,2193 g/ L NaHCO3 ,pH916 ) »”‡” [ †˛ ¿… ˛˜ ˇ ] —…¨º 3 ƒ L EF-1 ƨ¡” ,»¨ ¡£ ƒ` [1] Gloverson L Moro , et al1 Characterization of the variability in lysine con2 (2) ˆ‚`“¿˜…¨ºø˘•Æ¨¡” ¡£Ł¿”˝ tent for normal and opaque-2 maize endosperm[J ] 1 Crop Sci1 1996 ,36 : — ¡¢ ¡£‚¿˜ˇ¨…¨º ı—¶ 67 ƒ L CCB ,‡¿˝ 1651 - 16591 ‚¿˜…¨º 33 ƒ L EF-1 ˇ¡˚˝” ƒ` ,»¨ ¡£ˆ¿• EF- [ 2 ] Jeffrey E1Habben , et al1 Elongation factor 1 concentration is highly cor2 ƒ` related with the lysine content of maize endosperm[J ] 1 Proc1 Natl1 A2 ƒ` 1 ƨ¡”‚·ª`‰‚¿ ¡£ cad1 Sci1 USA 1995 ,92 : 8640 - 86441 ( 3) 4 ¡ ´„„ ¡£ ˇ [3] Gloverson L Moro , et al1 Phenotypic effents of opaque2 modifier genes in normal maize endosperm[J ] 1Cereal Chem1 1995 ,72 (1) :94 - 991 4 ¡¡ ¨º … ƒ` EF-1 ¿„ ( »¿„ ) ≈° : (0311) 5051759 - 3329 ( 1) ˇ· ¡£„»ˆ‚`“—¿„›¨” ,‚¿˜… E- mail : zhanshengding @1631com zycnzj.com/http://www.zycnzj.com/ 23 © 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.