ELECTROFORESIS CAPILARTécnicas avanzadas de análisis
PROGRAMA: ELECTROFORESIS CAPILARINTRODUCCIÓNFUNDAMENTOS BÁSICOS EN ELECTROFORESIS CAPILAR INSTRUMENTACIÓN BÁSICATIPOS ...
¿Qué es la electroforesis?Técnica de separación que se basa en la diferencia de movilidad ovelocidad de migración de partí...
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ElectroforesisMétodos con soporte o medio de estabilización Presencia de un medio soporte como papel, gel o un material e...
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ELECTROFORESIS EN           PAPEL
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Electroforesis Convencional
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Inconvenientes de la electroforesis convencionalSon técnicas lentas y laboriosasTienen tendencia a ser pocoreproduciblesNo...
Principios Electroforesis Capilar  Movilidad electroforética  νEP = µEp E            µEp = q                 6 πηr• Flujo ...
TEORÍA DE ELECTROFORESIS                                             CAPILARDos son los factores que causan la movilidad d...
MOVILIDAD                                  ELECTROSMÓTICA Los cationes del tampón son atraídos hacia la  pared del capila...
Fenómenos electrocinéticos:Movilidad electroforética                Flujo electroforético       Movilidad electroforética ...
Fenómenos electrocinéticos: ELECTROOSMÓSISCapilar (donde se produce la separación) Sílice fundida
Fenómenos electrocinéticos: ELECTROOSMÓSIS Capilar con la pared cargada negativamente
Fenómenos electrocinéticos: ELECTROOSMÓSIS        Se introduce el tampón de separación   Las cargas (+) del tampón se unen...
Fenómenos electrocinéticos: ELECTROOSMÓSIS                   Al aplicar campo eléctrico     El resto de las cargas (+) se ...
FENÓMENOSELECTROCINÉTICOSElectroforético ± Electroósmosis      Movilidad electroforética aparente   µa
Características ECElevada eficacia, alcanzándose de 105 a 106 platosteóricos.Las separaciones pueden      complementarse  ...
Limitaciones de ECRelativa sensibilidad.Relativa reproducibilidad en análisiscuantitativo.Problemas a escala micropreparat...
Componentes básicos de un     sistema de EC
FUENTE DE ALTO                                         VOLTAJE La migración (separación) comienza una vez se  aplica el c...
Corte de capilares
INTRODUCCIÓN DE                                   MUESTRAIntroducción básica de muestra El capilar es inicialmente rellen...
SISTEMAS DE                               DETECCIÓNPrácticamente los mismos que los utilizados en HPLC.Los más utilizados:...
MODOS DE ELECTROFORESIS         CAPILAR ELECTROFORESIS CAPILAR EN ZONALIBREISOTACOFORESISISOELECTROENFOQUEELECTROFORESIS C...
1. ELECTROFORESIS CAPILAR EN ZONA Capilar vacío Separación en función q/m Separa iones (+) y (-) No partículas neutras...
ELECTROFORESIS CAPILAR DE                                            ZONALa más simple de las técnicas   Un tubo capilar ...
Capilar neutro, no hay FEO
VARIACIÓN DEL FLUJO                                         ELECTROSMÓTICOVoltaje Aplicado: Su aumento provoca un aumento ...
ELECTROFORESIS CAPILAR DE ZONAEfecto de la concentración del tampón de separación
ELECTROFORESIS CAPILAR               DE ZONA
ELECTROFORESIS CAPILAR DE                                                         ZONAEl orden de elución puede invertirs...
2. ISOTACOFORESIS                            Electrolito frontal     Electrolito terminalFormato “sandwich”               ...
ISOTACOFORESIS                                           CAPILAR Electroforesis basada    en   desplazamiento       a  ig...
3. ISOELECTROENFOQUEAplicación principal: análisis de proteínasSeparación por puntos isoeléctricosCapilar neutro: no hay F...
ISOELECTROENFOQUE                                             CAPILAR La separación está basada en la diferencia  entre p...
EJEMPLOS CIEFSeparación por CIEF de una mezcla estándar de proteínasCapìlar recubierto de poliacrilamida
4. ELECTROFORESIS CAPILAR EN GELESSeparación basada en PmGel en el interior del capilar actúa como tamiz molecular
ELECTROFORESIS CAPILAR                                     DE GELES Combinación de la electroforesis en  geles con la ins...
4. ELECTROFORESIS CAPILAR EN GELES   Problemas de los geles de poliacrilamida  - resistencia  - durabilidad  - reproducibi...
Ejemplos CGESeparación en escalera por CGE de 1 kbp utilizando un gelminimamente entrelazado de poliacrilamidaCondiciones:...
5. CROMATOGRAFÍA ELECTROCINÉTICA MICELAR Separación de mezclas con partículas neutras Incorporación de tensoactivos o su...
CROMATOGRAFÍA ELECTROCINÉTICA                              CAPILAR MICELAR Combina la separación cromatográfica  y el mov...
CROMATOGRAFÍA ELECTROCINÉTICA                                      CAPILAR MICELAR Puesto que las micelas estánnegativame...
MEKC-CICLODEXTRINAS
MEKC-CICLODEXTRINAS:                                            EJEMPLOSSEPARACIÓN DE DNS-dl-AMINOÁCIDOS                  ...
EJEMPLOS CEC                          Separación de esteroidesSeparación de drogas decaracterísticas ácidas
Modos de separación           Acrónimo     Principio de separaciónElectroforesis capilar en zona     ECZ      Carga/tamaño...
Semejanzas entre EC y HPLC Ambas Técnicas utilizan sistemasde detección que recogen la señalrespuesta frente el tiempo. Am...
Diferencias entre EC y HPLC Capacidad para facilitar la separación demacromoléculas en disolución. Mayor eficacia. No hay ...
Perfil de flujo en ECEC              HPLC
APLICACIONES DE LAS TÉCNICAS       ELECTROFORÉTICAS CAPILARES En general se cubre un amplio abanico de   posibilidades gr...
MINIATURIZACIÓN DE SISTEMAS DE ELECTROFORESIS CAPILAR
MINIATURIZACIÓN DE SISTEMAS DE                                                ELECTROFORESIS CAPILARSEPARACIÓN ELECTROFORÉ...
VARIACIÓN DEL FLUJO                                        ELECTROSMÓTICOModificaciones de la pared del capilar: Se pueded...
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Electroforesis capilar

  1. 1. ELECTROFORESIS CAPILARTécnicas avanzadas de análisis
  2. 2. PROGRAMA: ELECTROFORESIS CAPILARINTRODUCCIÓNFUNDAMENTOS BÁSICOS EN ELECTROFORESIS CAPILAR INSTRUMENTACIÓN BÁSICATIPOS DE ELECTROFORESIS CAPILAR
  3. 3. ¿Qué es la electroforesis?Técnica de separación que se basa en la diferencia de movilidad ovelocidad de migración de partículas cargadas debido a la acción deun campo eléctrico. Campo eléctrico EVoltaje aplicado por unidad de longitud del medio de separación. E v Conductor de la corriente eléctrico Medio de separación Controla la carga eléctrica
  4. 4. ELECTROFORESIS – EVOLUCIÓN HISTÓRICAREUSS (1809) describe el fenómeno Elektro = electricidad yphoresis = acción de llevar.TISELIUS (1930), Uso de Electroforesis en disolución libreen tubos verticales en forma de UMARTIN & EVERAERTS (1967) Electroforesis en tubos abiertos de vidrio y rellenos conhidroximetilcelulosaHJERTEN (1967)Electroforesis en tubos de 3.0 mmVIRTANEN (1969) Electroforesis en tubos de 200 y 500 μmJORGENSON (1981) Electroforesis Capilar. Columnas de 75 μm y utilización de elevados voltajesACTUALIDAD
  5. 5. Electroforesis Técnica de separación basada en el movimiento de los analitos en un medio conductivo en respuesta a la aplicación de un campo eléctrico. El medio conductivo es generalmente una disolución tampón. En ausencia de otros factores, las especies catiónicas migran hacia el cátodo (electrodo -) y las especies aniónicas migran hacia el ánodo (electrodo +). La velocidad de migración es una relación directa entre el tamaño y la carga de cada especie.
  6. 6. ElectroforesisDependiendo de la presencia o ausencia de soporte omedio de estabilización, podemos hacer dos clarasdivisiones en las Técnicas electroforéticas:Métodos en solución libre La muestra se introduce en un tubo en forma de U el cual está rellenado de una disolución tampón. No existe sistema de soporte o medio de estabilización. Cuando se aplica el campo eléctrico las especies migran en función de su relación carga/masa. Tiselius en 1948 recibió el Premio Nobel por la aplicación en la purificación de proteínas.
  7. 7. ElectroforesisMétodos con soporte o medio de estabilización Presencia de un medio soporte como papel, gel o un material empaquetado. La muestra es colocada físicamente sobre el soporte. Existe una disolución que cubre totalmente el soporte o medio de estabilización.
  8. 8. ELECTROFORESIS EN PAPELEl soporte utilizado en este caso es un papel El papel está introducido en una disolución acuosa tamponada. La muestra se sitúa en un punto determinado del soporte. Un potencial de corriente continua (100-1000V) es generalmente aplicado durante la separación (las corrientes medidas suelen ser del orden de mA). Las especies iónicas migran hacia puntos específicos del soporte. Después de un tiempo apropiado para la separación el soporte es retirado y secado. En caso de ser necesario, el papel es tratado con un agente colorante con el fin de observar las bandas de desplazamiento
  9. 9. ELECTROFORESIS EN PAPEL
  10. 10. ELECTROCROMATOGRAFÍA EN PAPELEs posible desarrollar una separacióncontinua con una orientación adecuadadel papel.Introduciendo la muestra en la partesuperior, las fracciones pueden serrecogidas en la parte inferior.
  11. 11. Electroforesis Convencional
  12. 12. Electroforesis Convencional
  13. 13. Inconvenientes de la electroforesis convencionalSon técnicas lentas y laboriosasTienen tendencia a ser pocoreproduciblesNo permiten la automatización.
  14. 14. Principios Electroforesis Capilar Movilidad electroforética νEP = µEp E µEp = q 6 πηr• Flujo electroosmótico
  15. 15. TEORÍA DE ELECTROFORESIS CAPILARDos son los factores que causan la movilidad de los solutos:Movilidad Electroforética Específica para cada soluto o analito. Dependiente de la relación carga/tamaño. Los cationes migran hacia el cátodo, los aniones al ánodo y los compuestos neutros no se ven afectados por el campo eléctrico.Flujo Electrosmótico Movimiento general de todo lo existente en el interior del capilar como consecuencia del campo eléctrico aplicado. Bajo condiciones normales, el movimiento global es hacia el cátodo. Su componente de velocidad es mayor, en general, que las componentes electroforéticas de los solutos a separar.
  16. 16. MOVILIDAD ELECTROSMÓTICA Los cationes del tampón son atraídos hacia la pared del capilar, resultando la formación final de una doble capa de cationes. La capa interna “capa fija”, está constituida por cationes fuertemente enlazados al capilar. La capa externa “capa móvil”, es una capa con un enlace más débil. Al aplicar el campo eléctrico, la capa móvil migra hacia el cátodo. La disolución que rellena la columna es arrastrada por esta capa móvil en la dirección del cátodo.
  17. 17. Fenómenos electrocinéticos:Movilidad electroforética Flujo electroforético Movilidad electroforética efectiva µe ELECTROMIGRACIÓN
  18. 18. Fenómenos electrocinéticos: ELECTROOSMÓSISCapilar (donde se produce la separación) Sílice fundida
  19. 19. Fenómenos electrocinéticos: ELECTROOSMÓSIS Capilar con la pared cargada negativamente
  20. 20. Fenómenos electrocinéticos: ELECTROOSMÓSIS Se introduce el tampón de separación Las cargas (+) del tampón se unen a las (-) de la pared
  21. 21. Fenómenos electrocinéticos: ELECTROOSMÓSIS Al aplicar campo eléctrico El resto de las cargas (+) se mueven hacia el polo (-) Se genera un flujo de tampón que arrastra todo lo que hay en el interior del capilar Movilidad electroosmótico µ eo ELECTROÓSMOSIS
  22. 22. FENÓMENOSELECTROCINÉTICOSElectroforético ± Electroósmosis Movilidad electroforética aparente µa
  23. 23. Características ECElevada eficacia, alcanzándose de 105 a 106 platosteóricos.Las separaciones pueden complementarse enperiodos cortos de tiempo.La puesta a punto de métodos de análisis es simpley bastante rápida.El consumo de muestras y reactivos es mínimo yprácticamente no genera residuos.Es una técnica relativamente barata y de bajoimpacto ambiental.Es una técnica muy adecuada para el análisis demuestras de pequeño tamaño, células vivas yensayos de microdiálisis.
  24. 24. Limitaciones de ECRelativa sensibilidad.Relativa reproducibilidad en análisiscuantitativo.Problemas a escala micropreparativa.
  25. 25. Componentes básicos de un sistema de EC
  26. 26. FUENTE DE ALTO VOLTAJE La migración (separación) comienza una vez se aplica el campo eléctrico. Cuando el campo eléctrico utilizado se elevado, se obtienen tiempos de análisis cortos, buenas separaciones y las mejores resoluciones. Cuando se disminuye el tamaño del capilar, los voltajes aplicados pueden ser cada vez más altos. El máximo voltaje es de 40 kV. Las corrientes son del orden de los microamperios. Las fuentes permiten invertir la polaridad fácilmente.
  27. 27. Corte de capilares
  28. 28. INTRODUCCIÓN DE MUESTRAIntroducción básica de muestra El capilar es inicialmente rellenado con una disolución tampón. La muestra se introduce por uno de los extremos de la columna, el cual se ha sumergido en la disolución que contiene la muestra, provocando que la muestra se introduzca posteriormente en el capilar, de dos posibles formas: Introducción hidrodinámica Introducción electrocinética
  29. 29. SISTEMAS DE DETECCIÓNPrácticamente los mismos que los utilizados en HPLC.Los más utilizados: Absorción UV/vis: directa e indirecta Fluorescencia: directa e indirecta Fluorescencia inducida por Láser Espectrometría de Masas AmperométricaLos menos utilizados: Conductividad Potenciométrica Índice de refracción Radiométricos
  30. 30. MODOS DE ELECTROFORESIS CAPILAR ELECTROFORESIS CAPILAR EN ZONALIBREISOTACOFORESISISOELECTROENFOQUEELECTROFORESIS CAPILAR EN GELESO REDES POLIMÉRICASCROMATOGRAFIA ELECTROCINÉTICAMICELAR
  31. 31. 1. ELECTROFORESIS CAPILAR EN ZONA Capilar vacío Separación en función q/m Separa iones (+) y (-) No partículas neutrasNo separa compuestos por PmProblemas de ADSORCIÓN (capilar neutro)
  32. 32. ELECTROFORESIS CAPILAR DE ZONALa más simple de las técnicas Un tubo capilar se rellena de una disolución tampón, la muestra es cargada en uno de los extremos del tubo capilar. Tras esto se coloca de nuevo la columna en sendos viales que contienen el mismo tampón y se aplica el campo eléctrico. En condiciones normales, la muestra se sitúa en el ánodo, y los solutos migran hacia el cátodo. Usualmente los cationes migran los primeros. Siendo los más rápidos los que tienen mayor carga y menor tamaño, y los últimos los de menor carga y gran tamaño. Los elementos neutros aparecen englobados en una sola señal. Los aniones, son los últimos. Su orden es el contrario al de los cationes
  33. 33. Capilar neutro, no hay FEO
  34. 34. VARIACIÓN DEL FLUJO ELECTROSMÓTICOVoltaje Aplicado: Su aumento provoca un aumento delflujo electrosmótico. El aumento indiscriminado produceEfecto Joule. Electroferogramas mostrando el efecto del voltaje aplicado sobre el tiempo de migración. El pico 5 no es mostrado a 10 kV. Tampón: 0.06M SDS, 0.06M borato sódico, pH 8.92 en 85% agua/15% metanol. Capilar de sílice, 75 μm d.i., 50 cm de longitud efectiva. Detector: UV a 214 nm. Temperatura 25ºC. Picos: 1. Niacinamida, 2. Cianocobalamina, 3. Clorhidrato de Piridoxina, 4. Niacina, y 5. Clorhidrato de tianamina
  35. 35. ELECTROFORESIS CAPILAR DE ZONAEfecto de la concentración del tampón de separación
  36. 36. ELECTROFORESIS CAPILAR DE ZONA
  37. 37. ELECTROFORESIS CAPILAR DE ZONAEl orden de elución puede invertirse trasla adicción de sales de alquilamonio.La “cabeza” polar de las sales dealquilamonio es atraida por las paredesde la columna.La parte no polar, “cola”de la sal forma una barrera hidrofóbica, ala que se une una nueva capa demoléculas de sal, generando un cambioen la carga de la pared de la columna.El resultado final es que la pared de lacolumna capilar tiene una carga final detipo positivo.
  38. 38. 2. ISOTACOFORESIS Electrolito frontal Electrolito terminalFormato “sandwich” analito Pequeño margen de movilidades Se utiliza como técnica de concentración de muestra. Solutos orgánicos e inorgánicos de Pm ¯
  39. 39. ISOTACOFORESIS CAPILAR Electroforesis basada en desplazamiento a igual velocidad. La muestra en el interior de la columna se rodea, en forma de sandwich, por un tampón líder y un tampón terminal. Los cationes y los aniones no pueden ser separados en un solo análisis. En condiciones normales el flujo electrosmótico es nulo. Los iones se mueven a la misma velocidad que los iones del tampón líder. La señal obtenida es totalmente diferente al resto de los tipos de electroforesis capilar. La señal es en forma de escalera.
  40. 40. 3. ISOELECTROENFOQUEAplicación principal: análisis de proteínasSeparación por puntos isoeléctricosCapilar neutro: no hay FEOProcedimiento:- Introducción de mezcla de anfolitos (diferente pH)- Preenfoque de los anfolitos (gradiente de pH) y separación- Presión
  41. 41. ISOELECTROENFOQUE CAPILAR La separación está basada en la diferencia entre puntos isoeléctricos. Su principal aplicación es la separación de proteínas. La columna se rellena de una disolución de anfolitos y la muestra, tras la aplicación del voltaje se genera un gradiente de pH en el interior de la columna capilar. Una vez alcanzado el enfoque, las proteínas se sitúan en zonas de pH igual a su punto isoeléctrico, se produce el movimiento de toda la disolución hacia el detector. Se mantiene el voltaje de separación.
  42. 42. EJEMPLOS CIEFSeparación por CIEF de una mezcla estándar de proteínasCapìlar recubierto de poliacrilamida
  43. 43. 4. ELECTROFORESIS CAPILAR EN GELESSeparación basada en PmGel en el interior del capilar actúa como tamiz molecular
  44. 44. ELECTROFORESIS CAPILAR DE GELES Combinación de la electroforesis en geles con la instrumentación y principios de la Electroforesis Capilar. La separación se basa en la diferencia de tamaños y cargas. Para la misma relación carga/tamaño, la separación está basada únicamente en el tamaño. La introducción de muestra, generalmente, es electrocinética. Aplicada a la separación de grandes biomoléculas, como fragmentos de
  45. 45. 4. ELECTROFORESIS CAPILAR EN GELES Problemas de los geles de poliacrilamida - resistencia - durabilidad - reproducibilidad - burbujas Sustitución por redes poliméricas - polímero disuelto en tampón - interacción entre moléculas de polímero formando red - se introduce en cada separación (reproducibilidad mayor) Aplicaciones principales proteínas, ADN, polisacáridos
  46. 46. Ejemplos CGESeparación en escalera por CGE de 1 kbp utilizando un gelminimamente entrelazado de poliacrilamidaCondiciones: Bis-poliacrilamida entrecruzada (3% T, 0.5% C), Tampón Tris-Borato 100 mM pH 8.3, E=250 V/cm, L= 40 cm, l= 30 cm, i.d.= 75 μm, λ= 260 nm
  47. 47. 5. CROMATOGRAFÍA ELECTROCINÉTICA MICELAR Separación de mezclas con partículas neutras Incorporación de tensoactivos o surfactantes al tampón de separación con formación de micelas (CMC) La separación se basa en la diferente afinidad de los analitos entre las micelas y el solvente
  48. 48. CROMATOGRAFÍA ELECTROCINÉTICA CAPILAR MICELAR Combina la separación cromatográfica y el movimiento por electroforesis capilar. Capacidad de separar compuestos neutros. Aditivos más comunes utilizados como fase semiestacionaria: surfactantes. Orden de migración: compuestos hidrofílicos , menos hidrofóbicos, más hidrofóbicos.
  49. 49. CROMATOGRAFÍA ELECTROCINÉTICA CAPILAR MICELAR Puesto que las micelas estánnegativamente cargadas migrarán hacia elcátodo, a menos velocidad que loscationes. Las especies neutras alcanzarán unequilibrio de partición entre lasmicelas y el tampón.Las especies neutras a ser separadas,deberán tener cierta solubilidad entre lasmicelas y la disolución tampón. Si noson solubles en ellas, se moverán como enCZE
  50. 50. MEKC-CICLODEXTRINAS
  51. 51. MEKC-CICLODEXTRINAS: EJEMPLOSSEPARACIÓN DE DNS-dl-AMINOÁCIDOS DNS-L-Glu, 2 DNS-D-Glu, 3 DNS-L-Ser, Condiciones: 4 DNS-D-Ser, Tampón: 100 mM Tris-250 mM 5 DNS-L-Leu, Borato pH 8.3 con 7 M urea. 6 DNS-D-Leu Gel: 5% T, 3.3.% C adicionado en el tampón a) Sin β-ciclodextrina b) Con 75 μM β-ciclodextrina Capilar: 150 mm x 75 μm Potencial: 400 V/cm Detección UV a 254 nm
  52. 52. EJEMPLOS CEC Separación de esteroidesSeparación de drogas decaracterísticas ácidas
  53. 53. Modos de separación Acrónimo Principio de separaciónElectroforesis capilar en zona ECZ Carga/tamañoCromatografía capilar Interacción hidrofóbica/iónica CCEMelectrocinética micelar con micelas del surfactante Formación de complejosElectroforesis capilar quiral ECQ estereoespecíficos.Electroforesis capilar por Interacciones moleculares ECAafinidad entre ligandos y analito.Cromatografía capilar Mecanismos electroforéticoselectrocinética micelar con CCEMM y reparto cromatográfico.microemulsionesElectroforesis capilar en gel ECG Tamaño molecularIsoelectroenfoque capilar IEEC Punto isoeléctrico Capacidad de migración entreIsotacoforesis capilar ITFC tampones de distinta naturaleza Movilidad en una soluciónElectrocromatografía capilar ECC libre y retención cromatográfica.
  54. 54. Semejanzas entre EC y HPLC Ambas Técnicas utilizan sistemasde detección que recogen la señalrespuesta frente el tiempo. Ambas emplean diferentes modos yexiste un paralelismo entre losmodos electroforéticos y los modosen HPLC.Ambos pueden ser automatizados.
  55. 55. Diferencias entre EC y HPLC Capacidad para facilitar la separación demacromoléculas en disolución. Mayor eficacia. No hay correlación entre tiempos deretención y tiempos de migración. Volumen de fase móvil utilizado.La longitud del paso de luz en la celda dedetección en HPLC es de mm y en EC es deµmLa correlación del área en función deltiempo de migración es necesaria parallevar a cabo el análisis cuantitativamediante la EC.
  56. 56. Perfil de flujo en ECEC HPLC
  57. 57. APLICACIONES DE LAS TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS CAPILARES En general se cubre un amplio abanico de posibilidades gracias a los diferentes tipos de Electroforesis Capilar existentes Compuestos cuya relación carga/tamaño sea diferente, separados por CZE. Compuestos neutros con diferente hidrofobicidad, separados por MEKC. Compuestos de tamaño diferente con la misma relación carga/tamaño, separados por CGE. Biomoléculas de tamaño similar y similar relación carga/tamaño, con diferentes puntos isoeléctricos, separados por CIEF.
  58. 58. MINIATURIZACIÓN DE SISTEMAS DE ELECTROFORESIS CAPILAR
  59. 59. MINIATURIZACIÓN DE SISTEMAS DE ELECTROFORESIS CAPILARSEPARACIÓN ELECTROFORÉTICA EN UN μ-TAS DE ELECTROFORESIS CAPILAR CONDETECCIÓN UV Introducción electrocinética: 250 V entre B y C durante 30 s, Voltaje deseparación 3 kV entre A y C Tampón Tris-Borato 50 mM de pH 8.5 Concentración demuestra 20 μM
  60. 60. VARIACIÓN DEL FLUJO ELECTROSMÓTICOModificaciones de la pared del capilar: Se puededisminuir, anular o invertir el flujo electrosmótico. Electroferograma mezcla de seis componentes: 1 Formiato, 2 Acetato, 3 Propanoato, 4 Butanoato, 5 Pentanoato, 6 Hexanoato. Voltaje: 20 kV. Columna de sílice 75 μm d.i., 40 cm de longitud efectiva, 42 de longitud total. Electrolito 10 mM MES/His a pH 5.9. (a) CZE normal, (b) CZE con polaridad invertida, (c ), igual que b pero tampón conteniendo 0.5 mM de TTAB (Bromuro de Tetradecil Trimetil Amonio). La concentración de todos los componentes es la misma (5.0x10-4 M9.

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