La tinción negativa es una técnica que utiliza colorantes neutros o ácidos que no se unen a las bacterias, permitiendo observar su morfología y estructuras como las cápsulas. Se aplica tinta china o nigrosina para contrastar las cápsulas, ya que no se tiñen. Esto permite determinar la virulencia de microorganismos como Klebsiella y Cryptococcus al mostrar la presencia de cápsulas.

1. TINCIÓN NEGATIVA

2. TINCIÓN:
Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se absorben a una
superficie.
El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los
microorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico.

3. TINCIONES ESPECIALES:
Son aquellas que utilizan para colorear y aislar varias estructuras, a veces
se les utiliza como herramienta diagnostica.
Existen distintos tipos:
Flagelos
Esporas Cápsulas
corpúsculos
metacromáticos

4. TINCION NEGATIVA
Es una técnica que permite contrastar las muestras mediante una
sustancia opaca a los fotones (microscopía óptica) o a los electrones
(microscopía electrónica). Este método de tinción utiliza colorantes
neutros o ácidos ya que tienen poca afinidad por la célula bacteriana.

5. La tinción negativa facilita las
observaciones de la morfología y
tamaño de las bacterias así como la
observación de la cápsula en algunas
especies bacterianas.
La cápsula es una estructura superficial mucosa, más o
menos gruesa que envuelve la pared celular formada por
polisacáridos o polipéptidos, que confiere protección a las
bacterias contra la desecación y la fagocitosis.
A consecuencia de su elevado contenido en agua, se tiñen
débilmente por los colorantes.

6. MECANISMO DE ACCION DEL COLORANTE
En la tinción negativa se utilizan tintes ácidos, Los tintes ácidos poseen un cromógeno negativo que no penetra la célula de la
bacteria debido a la carga negativa en la pared celular. Por esta razón la tinción lucirá como una noche estrellada. La bacteria se
verá transparente y el fondo de la laminilla del color del tinte, que en este caso, es negro.
El colorante no tiñe los microorganismos, se queda alrededor de ellos, Se usa tinta china (suspensión de partículas de carbón
coloidal) o nigrosina (colorante negro insoluble en agua) para encontrar presencia de cápsulas alrededor de las células microbianas
y micóticas, ya que este elemento no se tiñe con bases.

7. TINCIÓN NEGATIVA
MATERIAL Y EQUIPO
2 portaobjetos Asa bacteriológica
Aceite de inmersión Microscopio
Mechero Cultivos bacterianos
Tinta china Franela
Cronómetro Papel seda
Guantes Puente de tinción

8. TÉCNICA
1. Esterilizar el asa y enfriarla
2. Colocar una pequeña gota de agua en el extremo de un portaobjetos desengrasado
3. Esterilizar nuevamente el asa y enfriarla

9. 3. Tomar un pequeña cantidad del cultivo , con ayuda del asa hacer una extensión sobre el portaobjetos y enseguida colocar una
gota de tinta china mezclar cuidadosamente.

10. 4. Distribuir la mezcla a lo ancho del portaobjeto, colocando otro portaobjeto perpendicular en ángulo de 45 grados sobre la
muestra.
5. Desplazar poco a poco el segundo portaobjeto a lo largo del primero para hacer una capa fina de la mezcla.

11. 6. Dejar secar al aire.
7. Con el frotis hacia arriba, pasar 2-3 veces sobre la flama (con esto se fijaran las bacterias)
8. Observar al microscopio.
Cryptococcus neoformans en
una tinción con tinta china
OBSERVACIONES
Se puede observar la cápsula
(es la capa que rodea la
esfera).

12. APLICACIÓN
En microbiología medica la demostración de la presencia de una capsula es un
medio para determinar la virulencia del microorganismo, es decir el grado hasta el
cual un patógeno puede causar una enfermedad.
Bacterias con cápsula: Klebsiella, Pasteurella, Bacillus, Escherichia, Haemoplhilus
Levadura con cápsula: Crytococcus
Klebsiella
pneumoniae

13. Glosario
Fotón: Partícula de luz que se propaga en el vacío
Tinta China: Utilizada para la observación de esporas (mecanismo de defensa) Y para la
tinción negativa, con la cual se observa la cápsula bacteriana
Microbiología Medica: Estudio del papel de los microbios en las enfermedades humanas.
Incluye el estudio de la patogénesis microbiana y la epidemiologia y está relacionada con el
estudio de la patología de la enfermedad y con la inmunología

14. BIBLIOGRAFIA:
SitiosWeb:
http://trabajosmedicos.blogspot.mx/2011/12/tincion-de-tinta-china-cryptococcus.html
Consulta: 28 de septiembre del 2013
http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:Ou0Rsm4ivQMJ:microdonto.files.wordpress.com/
2010/03/tecnicas-de-tincion.doc+&cd=8&hl=es-419&ct=clnk&gl=mx
Consulta: 28 de septiembre del 2013
http://www.geocities.ws/vidianne_mx/bactincionesbactyhon.pdf
Consulta: 28 de septiembre del 2013
Libros:
Waren Levinson, Ernest Jawets. Microbiología e inmunología, Editorial Legman 2da Edición.
Garcia Martos p, Fernández del barrio M.T, Paredes Salido F. Microbiología Clínica Practica, Editorial
servicio de publicaciones de la universidad de cáliz, 2da. Edición.
Tortora, Funke, Case. Introducción a la Microbiología, Editorial medica panamericana, 9ª Edición.