ELECTROFORESIS DE PROTEINAS-MR Sabat Cruzado2 (1).pptx

ELECTROFORESIS DE
PROTEINAS
MR1 Sabat Cruzado Tineo

El término de electroforesis proviene de dos palabras griegas:
elektro que significa
electricidad
phoros que significa
movimiento
HISTORIA
El termino Electroforesis fue creado por Michaelis en 1909 para describir la
migración de los iones por la influencia de un campo eléctrico.
1834, Michael Faraday (Ley de electrólisis).
AUGUST TOEPLER
Los métodos de detección óptica de los límites en movimiento en líquidos
fueron elaborados en la década de 1860
https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/6798/mod_resource/content/0/Electroforesis.
pdf

JOHANN WILHELM
WALTHER NERNST
FRIEDRICH KOHLRAUSCH
Hicieron experimentos para
medir las propiedades y el
comportamiento de
pequeños iones en
movimiento a través de
soluciones acuosas bajo la
influencia de un campo
eléctrico
(descripciones matemáticas
generales de la
electroquímica de las
soluciones acuosas)
A
principios
del siglo
XX, los
electroquí
micos
límites de
movimient
o de
partículas
cargadas
se podrían
crear con
tubos de
vidrio en
forma de
U
FERNAND
FREDERIC REUSS
Migración de
partículas de arcilla
por un campo
eléctrico en la
solución.
Electroósmosis.
1907
KOHLRAUSCH
creó las ecuaciones
para diferentes
concentraciones de
partículas cargadas
en movimiento -
incluyendo los
límites de
movimiento afilados
de las partículas que
migran.
(importante)
1879
Helmholz
sugirió la
existencia de una
doble capa
eléctrica en la
interface de
solvente y solido
http://arbor.revistas.csic.es/index.php/arbor/article/view/6
08

THEODOR
SVEDBURG
inventor de la
ultracentrifugad
ora, animó a su
estudiante Arne
Tiselius a
mejorar las
técnicas
electroforéticas
como tema de
su tesis
doctoral.
(siglo XX)
ARNE TISELIUS
1930 y a lo largo de las
décadas siguientes
transformó la
electroforesis -
poderosa herramienta
de análisis.
Frente móvil-
Electroforesis de Zona
Recibió el premio Nobel
de química de 1948 por
su trabajo.
Técnica del frente móvil en la electroforesis de
proteínas, sería capaz determinar y purificar en 1937
Así pues, el mismo Tiselius sería quién posteriormente,
en colaboración con Anthony Kabat y Michael
Heidelberger y, los cuatro frentes móviles las proteínas
del suero:
la albúmina, la alfa-globulina, la beta-globulina y la
gamma-globulina.
08

http://al142402.weebly.com/uploads/4/8/9/1/48919339/electroforesis
.pdf
ORNSTEIN, DAVIS,
RAYMOND Y
WEINTRAUB
Usan el gel de
Poliacrilamida
1959
SMITHIES
Introdujo gel de
almidón
1955
ORNESTEIN1964
electroforesis
discontinua
1970
Isoelectroenfoqu
e, punto
isoeléctrico de
las proteínas. –
Svensson,
científico
también del
Instituto
Karolinska
SHAPIRO, VIÑUELA Y
MAIZEL
1967
Electroforesis de gel de
poliacrilamida en dodecil-
sulfato sódico (SDS-PAGE)
Hoy los soportes
mas utilizados son
acetato de
celulosa, almidón
JORGENSON Y
LUKACS
Introdujeron los
capilares a principios
de los 80

ELECTROFORESIS
Las partículas cargadas se separan en función de su
distinta velocidad de migración en presencia de un campo
eléctrico.
Se usa para separar compuestos con carga neta,
como aminoácidos, proteínas, nucleótidos y ácidos
nucleicos.
Es una técnica de separación.
pdf

ELECTROFORESIS
Velocidad de migración depende básicamente de la
densidad de carga.
Depende pH, fuerza iónica, diferencia de potencial del campo eléctrico aplicado,
naturaleza de la muestra, interacciones de la muestra con el soporte elegido,
etc.
pdf

-
Cátodo
+
Ánodo
-0-
---
--
---
---
---
+-
Electroforesis en gel:
Principio de la Electroforesis
Punto de aplicación
Las moléculas migran hacia el ánodo (+) o catodo (–) de acuerdo a la carga.
Las proteínas pueden ser separadas usando un buffer de medio sólido (electroforesis de agarosa) o
usando solo fase líquida

Electroforesis de frente móvil
Aquella en la cual las partículas se mueven de forma libre en el
medio en el que se encuentran dispersas.
Las sustancias a separar se introducen en un tubo en forma de U.
Disueltas en un tampón de pH y fuerza iónica adecuados.
Se colocan los electrodos en los brazos del dispositivo, entre los
que se crea un campo eléctrico.
Provocando que las moléculas de la muestra (por ejemplo:
proteínas) cargadas emigren hacia los electrodos de polaridad
opuesta. https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/6798/mod_resource/content/0/Electroforesis.
pdf

Tubode Tiselius
Fronteras
iniciales
Ánodo
Amortiguador
Límite o
frontera
descendente
Moléculas de
proteína
Límite o
frontera
ascendente
Cátodo
+ –
Electroforesis de frente móvil
pdf

Electroforesis de zona
Proporciona un medio de soporte estable en el que las proteínas
podrían migrar, teñirse y cuantificarse.
Estabiliza la migración de las proteínas

FUNDAMENTOS…
• La Migración de solutos iónicos esta bajo la
influencia de un campo eléctrico.
• Estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo
(electrodos - y +), en dependencia de una
combinación de:
Carga
Peso molecular
Estructura tridimensional.
Proteínas: mayor de 100 aminoácidos
https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3127/marg2de9.pdf?sequence=2&isAllowed=y
http://www.innovabiologia.com/wp-content/uploads/2017/06/Evoluci%C3%B3n-

NO SELECTIVOS O NO RESTRICTIVOS
• Inertes.
• No intervienen de forma directa en la separación
de los componentes de la muestra.
• La separación solo depende de la carga
eléctrica de las partículas.
• Tamaño del poro mayor que el de la sustancia a
separar
SELECTIVOS O RESTRICTIVOS
• Permiten separar las moléculas (componentes)
de la muestra en función: Tamaño y la carga
eléctrica.
• Tamaño del poro igual al de la sustancia que se
va a separar.
Tipos de soportes empleados en
EF

Tipos de soportes empleados en
EF
SELECTIVOS O RESTRICTIVOS NO SELECTIVOS O NO RESTRICTIVOS
Papel
Acetato de celulosa *
Gel de agarosa *
Gel de almidón
Gel de poliacrilamida

NO SELECTIVOS O NO RESTRICTIVOS
Papel
Aplicación: separación de moléculas de pequeño tamaño (aminoácidos, nucleótidos o péptidos)
Limitaciones:
• Escasa resolución ---- Efecto electroendósmosis -----Aspecto opaco ---Tamaño de poro no homogéneo
• Absorción de ciertas proteínas (albúmina)
Acetato de celulosa *
Obtención: reacción de acido acético con los grupos hidroxilo de la celulosa.
Uso: separación electroforética de proteínas plasmáticas con Rojo de Ponceau.
Ventajas: elevada resolución, menor electroendósmosis que en el papel, tamaño de poro más uniforme y no
absorción de proteínas.
Limitaciones: opaco, debe transparentarse con disolvente orgánico antes de su cuantificación por densitometría,
pueden desaparecer bandas débiles.
Gel de agarosa *
Uso: separación de moléculas de gran tamaño (proteínas, lipoproteínas, isoenzimas, ácidos nucleicos, virus). En
técnicas electroforéticas combinadas con inmunoquímicas .
Ventajas: mayor resolución que la de gel de poliacrilamida, transparencia completa (evita efectos hipercrómicos),
ausencia de efectos cromatográficos (adsorción o intercambio iónico), no reacciona químicamente con la muestra que se
analiza, alta porosidad y uniforme.
Limitaciones: la electroendósmosis varía en función de su pureza.
* Son los que más se emplean en análisis clínicos.
adquieren cargas negativas (en
contacto con el agua debido a la
absorción de grupos hidroxilo), que se
rodean de grupos con carga positiva.
Flujo de iones positivos disminuye la
VM de los componentes de la muestra
que se mueven hacia el ánodo.

SELECTIVOS O RESTRICTIVOS
Gel de almidón
Ventaja: elevada resolución
Limitaciones:
Baja reproducibilidad
Difícil obtención de un soporte de espesor y porosidad uniformes.
Gel de poliacrilamida
Estructura reticular tridimensional formada por acrilamida y N-N-metilen-bis-acrilamida.
La longitud de las cadenas del polímero y el número de enlaces cruzados determinan las propiedades físicas
del gel. Ambos factores pueden controlarse mediante la concentración y la proporción de sus
componentes.
Ventajas:
• Casi no presenta electroendósmosis y fenómenos de adsorción
• Alta resolución (gran poder de separación)
• Alta reproducibilidad
Limitaciones:
• Uso exclusivo en laboratorios de investigación
• Se ven múltiples bandas en el revelado con azul de Coomassie en la etapa de revelado

GELES
ALMIDÓN POLIACRILAMIDA AGAROSA
Técnica barata
Fácil
Rápida
Soporte más usado en
electroforesis
De alta resolución
Sus componentes son tóxicos
Buena resolución
Separación de moléculas grandes
con r > 5-10nm
(virus, ácidos nucleicos,
lipoproteínas

FACTORES QUEAFECTANAL
DESARROLLO
ELECTROFORÉTICO

FUNDAMENTOS…
V = q E / f
(V) velocidad de migración
(q) carga efectiva
(E) gradiente de potencial eléctrico
(f) coeficiente de fricción

• Carga neta de la sustancia en migración:
• Velocidad de migración depende de la carga de la partícula.
• La carga neta es el resultado de las cargas de los grupos ionizables.
• Depende del pH del medio en el que se lleva a cabo todo el proceso, este
parámetro queda determinado por el tampón (buffer) elegido, que permite fijar
el pH más adecuado para cada caso.
• Proteínas sustancias anfóteras (pH: +/-)
• Punto isoléctrico (pI) es el valor del pH del resultado de la suma de las cargas
superficiales positivas y negativas es cero (carga neta nula). No migra.
V = q E /
f

• La carga de la proteína se hace más negativa a medida que el pH
del buffer se hace más básico.
• A pH 8.6, todas las proteínas migran hacia el ánodo (tienen
carga global negativa).
• La albúmina, con pH de 4,7 tendrá una mayor carga negativa que
la gammaglobulina, que tiene un pH de 7,2.
• Lo que explica el por que la albúmina recorre una mayor distancia
que la gamma-globulina cuando se sitúen en un campo eléctrico.
Carga neta de la molécula

• Fuerza iónica del medio
• Depende del tampón elegido (concentración)
• A mayor concentración del tampón mayor es la proporción de corriente
transportada por los iones del tampón y es menor el transporte de la
muestra que se desea separar, de manera que ésta migrará más
despacio
• Cuando [tampón] es superior a la que se requiere , la migración es más
lenta y no se consigue la separación requerida.
• Recomendación: tampones pocos concentrados y reposición frecuente
(se concentran por evaporación).
• Estructura y tamaño de las sustancias

• Potencial del campo eléctrico aplicado
• Movilidad electroforética de una sustancia es mayor cuanto mayor es el potencial
eléctrico que se aplica.
• El aumento de la velocidad y temperatura: desnaturalización de proteínas,
evaporación del tampón que se utiliza, con lo que queda más concentrado y provoca
un aumento de la fuerza iónica, dificultando el desarrollo electroforético.
• Soporte
• Puede retardar la separación electroforética, debido a fenómenos de adsorción o de
electroósmosis
(electroendósmosis: AC y GA)
Dificultad de migración de las partículas que se quieren separar
al tener que vencer el movimiento de los iones positivos libres
del soporte (las cargas negativas suelen estar fijas a la
superficie del mismo)

• Características de la corriente aplicada
• Voltaje es decisivo. A > V > resolución
• Puede producirse exceso de calentamiento, usar dispositivos de refrigeración si usan V
altos.
• Tiempo de duración
• VM es constante, aumentar el tiempo de migración, aumentará el desplazamiento.
• Revelado
• Sustancia y sensibilidad que se requiere
• EFPla sensibilidad mejora con colorantes histoquímicos ( azul de bromofenol, negro

Especial cuidado
• Problemas con el tampón
• Fuente de alimentación y cubetas
• Aplicación de la muestra
• Voltaje y calentamiento
• Tinción y lectura
Análisis cualitativo
Colorantes
M. inmunológicos
Análisis cuantitativo
Elución
Densitometría (elección)

DENSITOMETRO
Sensibilidad analítica de la electroforesis 500-2000
mg/L
Espectrometría de absorción molecular de fase solida

PARÁMETROS QUE INFLUYEN EN LA
MOVILIDAD ELECTROFORÉTICA

•Parámetros externos
Campo eléctrico
Temperatura
• Parámetros relacionados al solvente y al sistema
electroforético
Viscosidad
Fuerza iónica
La naturalea de los iones componentes
Ph
• Parámetros relacionados con el soluto
La carga
La forma y tamaño de los iones

 En el suero, cientos de proteínas producidas por diversos órganos, principalmente el
hígado.
 Muchas de estas proteínas, o son filtradas por el riñón, absorbidas en el intestino o
son metabolizadas en diversas células y órganos.
 Mediante la electroforesis pueden evidenciarse variaciones significativas en la
concentración de proteínas y así poder evidenciar alteraciones orgánicas como:
 hematológicas, inmunológicas, renales, hepáticas y gastrointestinales.
JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA

• Contiene dos principales grupos de proteínas: albumina y globulinas.
• La albumina al igual que la α y β globulinas son sintetizadas en el
hígado
• Las γ globulinas son producidas por linfocitos y células plasmáticas.
LAS PROTEINAS PLASMATICAS

ELECTROFORESIS DE PROTEINA EN
SUERO
Corriente electrica en presencia de una solución
tampón
Proteínas se separan de acuerdo a su carga
Gel se retira, seca, tiñe y fija (azul brillante de Coomassie)
Cuantificación de cada fracción con el densitómetro
Sangre en tubo con activador de coágulo
Suero sobre gel de agarosa

• Los componentes de proteína sérica se separan en cinco fracciones principales:
 Albúmina
 Globulinas alfa-1 (zona alfa-1)
 Globulinas alfa-2 (zona alfa-2)
 Beta globulinas (la zona beta a menudo se divide en bandas beta-1 y beta-2)
 Gamma globulinas (zona gamma)
ÁNODO
+
Patrónelectroforético

Fracción: Albúmina
- Primera banda, constituye del 52% al
65 % de las proteínas séricas.
- Transporte, mantenimiento de la
presión oncótica del plasma, marcador
del estado nutricional.
- Bisalbuminemia: dos bandas en la
fracción albúmina. Alteración
cualitativa sin significado clínico.
- Origen genético o adquirido: uso penicilina
y cefalotina; pancreatitis crónica asociada a
fístula.
- Aumentos se relacionan casi siempre con
DH aguda, nutrición parenteral, tiempo
prolongado del torniquete.
- Disminución importante por daño
hepático (síntesis disminuida) o por
pérdida renal (proteinuria). Analbuminemia

Bisalbuminemia
No asociado a ninguna
patología
Albúmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Prot. Totales 6.0 – 8.0 g/dL
Relación A/G > 1.0

Bisalbuminemia
• Las dos fracciones de albúmina
no son simétricas, por lo que
puede inferirse su inducción
por fármacos como antibióticos
• No tiene implicaciones clínicas.
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Relación A/G > 1.0

Hipoalbuminemia
• Debido a la síntesis
defectuosa.
• Edemas.
• Aumento del resto de
las globulinas.

Fracción: Alfa - 1
- Al inicio de la banda se ve “una neblina” debido a la lipoproteína
de alta densidad (HDL),
- Antitripsina Alfa-1:
- Corresponde al 90 %, se tiñe de forma muy intensa.
Es un inhibidor de proteasas como los activadores de los
factores de la coagulación y del complemento hemolítico.
• Alfa-1-quimiotripsina
• Globulina fijadora de tiroides.
- Alfa Feto-Proteína: normalmente es no detectable su presencia,
pero se incrementa en CA hepático.
- Lipoproteína Alfa y Glicoproteína Ácida Alfa-1
(Orosomucoide): Se tiñen débilmente en este análisis, por lo que
no son representativas.
- Elevaciones en procesos
inflamatorios en los que hay
producción de reactantes de
fase aguda.
- Disminución en pacientes
con daño hepático (cirrosis).

Alfa-1 elevada
• Proceso inflamatorio agudo
en curso.
• Alfa-1 Anti-tripsina como
reactante de fase aguda.
• Albúmina ↓↓
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Relación A/G > 1.0

Alfa-1 disminuida
• Disminución crítica
principalmente en pacientes
con enfisema pulmonar
 Sueros envejecidos
pierden esta fracción.
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Relación A/G > 1.0

Fracción: Alfa - 2
Constituida por:
1.- Macroglobulina Alfa-2:
- Peso Molecular = 725 KDa
- Inhibidor de proteasas como la tripsina y
la plasmina.
- Reactante de fase aguda
2.- Ceruloplasmina
- Proteína transportadora de hasta el 95
% de todas las reservas de cobre del
organismo.
- Hay formas heredadas y adquiridas de
esta deficiencia.
3.- Haptoglobina:
- Proteína transportadora de la Hb libre.

Fracción: Alfa - 2
Aumento de esta
fracción:
- Procesos inflamatorios
agudos o crónicos
- Condiciones
neoplásicas
- Infarto al miocardio
- Síntesis aumentada de
haptoglobina por
procesos hemolíticos.
Disminución de esta
fracción:
- Fase aguda de procesos
hemolíticos
- Anemia megaloblástica
- Daño hepático severo (cirrosis,
hepatitis, tumor hepático).

• Fracción Alfa-2 muy elevada
• Albúmina disminuida.
• Patrón observado en
Síndrome Nefrótico e
hipercolesterolemia.
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Relación A/G > 1.0

Fracción: Beta
1) Fracción Beta-1 (más anódica, polo +)
- Está constituida principalmente por Transferrina.
- Tiene un papel fundamental en la dinámica del hierro.
- Básicamente acarreo de sitios de depósito (hígado) hacia los sitios donde hay células que
están sintetizando Hb (eritropoyesis en la médula ósea).
- Aumento:
La Tf es abundante en la leche materna: aumento en suero de bebes lactantes y madres
lactando.
En pacientes con deficiencia en hierro aumenta para compensar el déficit de Fe de una forma
precoz.
- Disminución:
Enfermedad hepática, nefrosis, anemia crónica, neoplasias, y en procesos infecciosos.

2) Fracción Beta-2 (más catódica, polo -)
- Esta fracción incluye principalmente la fracción C3 del complemento y en menor grado,
C4.
- Varios procesos autoinmunes como Lupus, A.R. y otros, suelen cursar con
disminución de esta banda por consumo de C3.
- La lipoproteína Beta (de baja densidad) se ubica en esta banda. Abarca Beta-1 y
Beta-2 e inclusive hasta inicio de la región gamma.
- Corren en esta fracción también, la Beta-2-microglobulina y la hemopexina, menos
representativas en proporción del resto de los componentes citados.

Fracción: Beta
Padecimientos que afectan los niveles de la Fracción
Beta-2
1. Hipogamaglobulinemias y padecimientos con pérdida
de inmunoglobulinas
2. En enfermedades malignas: Enf. Hodgkin, Leucemia
granulocítica crónica, mieloma múltiple,
macroglobulinemia de Waldenstrom, gamopatías
monoclonales
3. Hipergamaglobulinemia policlonal
4. Hepatopatías crónicas,
5. Enfermedades autoinmunes: Lupus, AR, S. Sjögren,
esclerodermia, etc
Padecimientos que afectan los niveles de la
Fracción Beta-2
Infecciones crónicas como:
- Bacterianas: TB, lepra, osteomielitis,
endocarditis bacteriana.
- Parasitarias: tripanosomiasis, paludismo,
Kala-Azar.
- Micóticas: Actinomicosis, nocardiosis
- Virales: Mononucleosis infecciosa (VEB),
bartonelosis, linfogranuloma venéreo

Fracción: Gamma-Globulinas
- Esta fracción esta formada por las 5 inmunoglobulinas:
IgG, IgA, IgM, IgD, IgE
ESTA METODOLOGIA NO DISCRIMINA LAS CONCENTRACIONES INDIVIDUALES DE CADA
INMUNOGLOBULINA
- SU FUNCION ES EVALUAR LA CONCENTRACION GLOBAL DE INMUNOGLOBULINAS.
- Una banda monoclonal obliga a determinar que paraproteína anormal se esta produciendo.
- La Proteína C Reactiva corre dentro de esta banda, pero su concentración es tan baja que no altera
el patrón de corrimiento aun en fase aguda.

Fracción: Gamma-Globulinas
Disminución de Gamma Globulinas:
- Agamaglobulinemia
- Envejecimiento
- Algunos medicamentos principalmente
mielotóxicos (QT, Antibióticos)
- Algunos padecimientos malignos como
Leucemia linfática crónica
Elevación de la Gamma Globulinas
- Infecciones crónicas (principalmente
virales, como Epstein Barr)
- Enfermedad hepática
- Enfermedades autoinmunes (Lupus, A.R.)
- Síndromes malignos como mielomas y
linfomas

Disminución en
fracción Gama:
Inmunosuprimido
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Relación A/G > 1.0

Fracción Gama ausente:
Agamaglobulinemia pura
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Relación A/G > 1.0

• Fracción Gama con base
angosta y altura mayor que la
base:
• Banda Monoclonal
• Dx: Mieloma
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Relación A/G > 1.0

Gammapatía monoclonal:
• Proteina M o paraproteína
• Significancia indeterminada, mieloma, desorden linfoproliferativo de células B.
• Transitoria: Inmunocomprometidos con CMV
• Mayores de 50 años y raro en niños (enfermedad hematológica maligna, anemia
aplásica severa)
• La paraproteína más comúnmente observada es IgG seguida de IgA, cadena ligera y,
raramente IgD.
• Dos paraproteínas (5% de los casos). Gammapatía biclonal.
• Cuando se identifica una banda monoclonal utilizando electroforesis de proteína sérica,
generalmente se recomienda la inmunofijación en suero y la inmunofijación de orina de 24
horas.
Inmunofijación (s/o)
Confirmación y la isotipificación de
la paraproteína

Ánodo
(+)
Pre-
Albúmina Albúmina Alfa-1 Alfa-2
Beta
B-1 B-2
Gamma
Cátodo
( - )
Punto de
aplicación

Ánodo
(+)
Pre-
Albúmina Albúmina Alfa-1 Alfa-2
Beta
B-1 B-2
Gamma
Cátodo
( - )
Punto de
aplicación
Fibrinógeno: 340 kD entre
Beta y Gamma
Hemoglobina: 68 kD
entre Alfa-2 y Beta
Proteinograma electroforético: interferencias
Ig A Ig M
Ig G

• Albúmina esta muy disminuida
• Alfa-2 y Beta en proporción
muy aumentada
• Paciente con proceso
hepático maligno.
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Relación A/G > 1.0

• Fracciones Beta y Gama
unidas en una sola banda
ancha:
• Puente “Beta-Gama”
• Cirrosis Hepática
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
Relación A/G > 1.0

• En caso de sospecha clínica de gamopatía monoclonal, una región gama sérica normal no
excluye diagnóstico.
Debe realizarse Electroforesis de Proteínas en Orina:
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS EN
ORINA
 Proteína de Bence-Jones: Eliminación por orina, de cadenas ligeras de las
inmunoglobulinas, las que se producen en exceso. Observada en pacientes con Mieloma,
Macroglobulinemia de Waldenström y en algunos casos de Amiloidosis.
Suero del paciente
Orina del paciente concentrada 20 X

ELECTROFORESIS DE PROTEINAS EN
ORINA
 Enfermedad de cadenas pesadas: Pueden
eliminarse por orina en estos padecimientos.
Producen solo la fracción Fc de las inmunoglobulinas
(principalmente IgG, IgA, IgM e IgD), de ahí el nombre
de enfermedad de cadenas pesadas.

Inmunofijación
• Una prueba inmunológica del suero o la orina
usada para identificar proteínas de la sangre.
• En los pacientes con mieloma, permite al
médico identificar el tipo de proteína-M
(normalmente IgG, IgA, kappa, ó lambda).
• Es la técnica de inmunodetección de rutina
más sensible, e identifica el tipo exacto de
cadena pesada y ligera de la proteína-M.

• Detección, mediante electroforesis en gel de agarosa y uso de
anticuerpos, de proteínas monoclonales en suero.
• Las proteínas migran en la electroforesis y se inmunofijan con
antisueros de diferentes especificidades:
 anti-gamma, para la detección de inmunoglobulina G (IgG)
anti-alfa, para inmunoglobulina A (IgA)
anti-mu, para inmunoglobulina M (IgM)
 anti-lambda, para cadenas ligeras lambda, y anti-kappa, para
cadenas kappa.

Proteína-M (pico-M)
• Anticuerpos o partes de anticuerpos que
aparecen en cantidades excepcionalmente
grandes en la sangre o la orina de los
pacientes con mieloma múltiple.
• Pico-M se refiere al aspecto afilado que toma
el perfil de la electroforesis de proteínas
cuando está presente una proteína-M.
• Es sinónimo de proteína monoclonal y de
proteína del mieloma.

Fundamento
• Separación de las proteínas mediante electroforesis en gel de agarosa.
• Fijación e inmunoprecipitación de las proteínas: se adicionan los antisueros
respectivos y las soluciones fijadoras sobre la superficie del gel para identificar las
proteínas específicas y precipitarlas.
• Remoción de proteínas solubles que no se precipitaron ni se unieron a los antisueros.
• Tinción de las proteínas precipitadas para permitir su visualización.
• Las bandas que se inmunoprecipitan se comparan con las bandas anormales
observadas inicialmente en la electroforesis de proteínas y según la reacción con los
antisueros se define su naturaleza y si corresponden o no a un componente
monoclonal.

APLICACIÓN
• La inmunofijación en suero u orina está indicada en pacientes que
presentan un pico en las regiones beta o gamma de la
electroforesis de proteínas en suero y que tienen sospecha de
neoplasia de células plasmáticas.
• Por su mayor sensibilidad y uso de anticuerpos específicos ayuda a
identificar el componente monoclonal .
• Hasta en el 93% de los pacientes con mieloma se detecta una proteína
monoclonal en la inmunofijación en suero y la cifra aumenta a 97% si
se complementa con inmunofijación en orina.

INDICACIONES
 Sospecha de mieloma múltiple, dolor óseo, IR con aumento de
proteínas.
 Macroglobulinemia de Waldenström.
 Amiloidosis primaria o trastorno relacionado.
 Neuropatía periférica inexplicable.
 Anemia de novo asociada con insuficiencia renal.
 La hipercalcemia. Sospecha de malignidad.
 Formaciones de rouleaux anotadas en ESP.
 Proteinuria Bence Jones .

- Electroforesis de proteínas séricas
:
Banda estrecha en la región de
las Ig G.
-Confirmación con inmunofijación
con antisueros específicos.
- Electroforesis de proteínas séricas:
Ausencia de cadenas ligeras.
-Si están aumentadas:
• IgG: linfoma de Hodgkin
• IgA: infiltración en i.delgado
y problemas de malabsorción
•IgM: leucemia linfática crónica
Gammapatía monoclonal de
significado indeterminado
-Análisis de sangre y orina.
-Realizar electroforesis en gel de agarosa.
-Aparecerá un pico alto y delgado en la región β o γ.
-Inmunofijación o inmunoelectroforesis para identificar la
Ig predominante.
-Se debe repetir este procedimiento para ver la evolución
del paciente.
Permanecer estable
Desaparecer de forma espontánea
Progresar hasta una
enfermedad maligna
Mieloma
múltiple
Macroglobulinemia
de Waldenström
Enfermedad
de las cadenas
pesadas
Amiloidosis
primaria
-Hay una aumento
de Ig monoclonales y
cadenas ligeras.
-Se confirma el
diagnóstico con la
presencia de amiloide
en tejidos.
-Electroforesis de proteínas
séricas: banda ancha en la
región de las IgM.
-Confirmación
inmunofijación con
antisueros específicos.
DIAGNÓSTICO

 Tampones
 Aplicadores
 Gel de agarosa
 Colorante
negro amida
 Disolvente

Lasetapasautomáticasincluyenelprocesamientodelgeldeagarosaen
elordensiguiente:
1. Aplicación delas muestras
2.
3.
4.
5.
6.
Migración electroforética
Secado
Coloración
Decoloración
Secadofinal.

Resumen El proteinograma por electroforesis (PxE) sérico es solicitado para detectar modificaciones del
perfil proteico. El objetivo del trabajo fue evaluar las alteraciones de la zona gammaglobulina y su
correspondencia con distintos estados clínico-patológicos. Se incluyeron 7.259 pacientes (1-89 años) a los
que en 2013 se les solicitó PxE. Según el trazado densitométrico, en la zona gammaglobulina se
reconocieron diferentes grupos: hipogammaglobulinemia (3 g/dL) se observó en: hepatitis autoinmune,
cirrosis, síndrome de Sjögren, enfermedad mixta del tejido conectivo, HIV, hepatitis C y enfermedad de
Castleman. El hallazgo de BM correspondió a 47% de pacientes con gammapatía monoclonal de
significado incierto y 40% con mieloma múltiple; el 0,5% fueron casos nuevos. Con
hipogammaglobulinemias, en adultos prevaleció la inmunosupresión terapéutica (55%), seguida por
diabetes/síndrome metabólico/hipotiroidismo (23%); en niños, 22% por inmunosupresión y 78% con
hipogammaglobulinemia no clasificada como inmunodeficiencia primaria. Se concluye que en 6,4% de los
PxE se observó alteración de la zona gammaglobulina; prevaleció la hipergammaglobulinemia policlonal.
En 1 de cada 200 PxE se pesquisó un paciente con BM. El hallazgo de hipergammaglobulinemia policlonal
o BM se correspondió con distintos estados clínico-patológicos.

Referencias
pdf
08
http://al142402.weebly.com/uploads/4/8/9/1/48919339/electroforesis
.pdf
https://www.reverte.com/libro/bioquimica-clinica-y-patologia-molecular-ii_81511/: FUENTES ARDERIU, X.,
CASTIÑEIRAS LACAMBRA, M. J y QUERALTÓ COMPAÑÓ, J. M. Bioquímica clínica y patología
molecular. 2a ed. Barcelona: Reverté, c1998. 2 v. ISBN 9788429118568.
https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3127/marg2de9.pdf?sequence=2&isAllowed=y

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