CROMATOGRAFÍA

1. UNIVERSIDAD TÉCNICADE MACHALA
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LASALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICAY FARMACIA
CONTROL DE MEDICAMENTOS
ALUMNO: MARCO ROBLES; LISSETH ESPINOSA
DOCENTE: BQF. CARLOS GARCÍA
CURSO: QUINTO “A”
TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS
INTRODUCCIÓN
La característica que distingue a la cromatografía de la mayoría de los métodos físicos
y químicos de separación, es que se ponen en contacto dos fases mutuamente
inmiscibles. La fase estacionaria y la móvil. Una muestra que se introduce en la fase
móvil es transportada a lo largo de la columna que contiene una fase estacionaria
distribuida. Las especies de la muestra experimentan interacciones repetidas
(repartos) entre la fase móvil y la fase estacionaria. Cuando ambas fases se han
escogido en forma apropiada los componentes de la muestra se separan
gradualmente en bandas en la fase móvil. Al final del proceso los componentes
separados emergen en orden creciente de interacción con la fase estacionaria. El
componente menos retardado emerge primero, el retenido más fuertemente eluye al
último. El reparto entre las fases aprovecha las diferencias entre las propiedades
físicas y/o químicas de los componentes de la muestra. Los componentes adyacentes
(picos) se separan cuando el pico que sale después es retardado lo suficiente para
impedir la sobreposición con el pico que emergió antes.
Hoy en día casi no hay campo de la química, biología, medicina, etc. en el que no se
utilice la cromatografía en alguna de sus formas, tanto en su vertiente preparativa
como en la analítica; por otra parte el desarrollo sobre el uso conjunto de la
cromatografía con otras técnicas analíticas, así como el desarrollo de otros tipos de
cromatografía, como es por ejemplo la de fluidos supercríticos, hace previsible una
extensión aún mayor de su uso (1)
A pesar de que el método cromatográfico prometía simplificar la separación
desustancias de mezclas complejas, no fue sino hasta finales de la década de los 30 y
principio de los 40 cuando se empezó a desarrollar la técnica teniendo este
métododiversas aplicaciones. En la actualidad la cromatografía se emplea
principalmente paraseparar compuestos incoloros pero el nombre permanece para
describir cualquier técnica que se base en los mismos principios (2)

2. CONCEPTOS Y DEFINICIONES (3)
a) Cromatografía
La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase
estacionaria o lecho estacionario) mientras que la otra (fase móvil) se mueve en una
dirección definida. El proceso cromatográfico se da como resultado de la mayor o
menor capacidad para ser retenidos los diferentes componentes de una muestra por la
fase estacionaria, es decir, se basa en los repetidos procesos de interacción durante el
movimiento de los componentes de una mezcla arrastrados por la fase móvil a lo largo
de la fase estacionaria (elución), produciéndose la separación debido a las diferencias
en las constantes de distribución de los componentes de la mezcla entre la fase
estacionaria y la móvil.
b) Fase estacionaria
Es una de las dos fases que forman un sistema cromatográfico. Puede ser un sólido,
un gel o un líquido. Si es un líquido, puede estar distribuido en un sólido, el cual puede
o no contribuir al proceso de separación. El líquido puede también estar químicamente
unido al sólido (fase ligada) o inmovilizado sobre él (fase inmovilizada). La expresión
lecho cromatográfico o sorbente se puede usar como término general para designar
cualquiera de las formas diferentes en que se use la fase estacionaria. En particular,
en la cromatografía de gases se usa el término fase líquida, caso más común de fase
estacionaria, frente a fase gaseosa para la fase móvil. Sin embargo, en el desarrollo
inicial de la cromatografía líquida se usó el término "fase líquida" para referirse a la
fase móvil, frente a la "fase sólida", es decir, la estacionaria. Debido a esta
ambigüedad, se desaconseja utilizar el término "fase liquida". Si se debe expresar el
estado físico de la fase estacionaria, se propone el uso de adjetivos, tales como fase
estacionaria líquida, fase estacionaria sólida, fase ligada sólida o fase inmovilizada
sólida.
c) Fase ligada
Una fase estacionaria que está unida de forma covalente a las partículas de soporte o
a la pared interior de la columna (lugar donde se produce la separación).
d) Fase inmovilizada
Una fase estacionaria que está inmovilizada sobre las partículas del soporte o sobre la
pared interior de la columna, por ejemplo por polimerización in situ (entrecruzamiento
químico) tras un recubrimiento.

3. e) Fase móvil
Fluido que se filtra a través o a lo largo del lecho estacionario, en una dirección
definida. Puede ser un líquido (cromatografía cíquida, LC), un gas (cromatografía de
gases, GC) o un fluido supercrítico (cromatografía con fluido supercrítico). En la
cromatografía de gases se puede usar la expresión gas portador para la fase móvil. En
la cromatografía de elución se usa también para la fase móvil la expresión eluyente.
f) Eluir
Proceso en el que la fase móvil se desplaza a lo largo de la fase estacionaria
transportando los componentes a separar. El proceso de elución se puede detener
mientras todos los componentes de la muestra están aún en el lecho cromatográfico, o
continuarse hasta que lo hayan abandonado (se prefiere el término "Eluir" a
"Desarrollar", término usado en nomenclaturas anteriores de cromatografía plana).
g) Efluente
La fase móvil que abandona la columna.
h) Muestra
Mezcla consistente en cierto número de componentes, cuya separación se pretende
en el lecho cromatográfico al ser arrastrados o eluidos por la fase móvil.
i) Componentes de la Muestra
Los constituyentes químicamente puros de la muestra. Pueden no ser retenidos por la
fase estacionaria (es decir, no retardados), retenidos parcialmente (es decir, eluidos a
tiempos diferentes) o retenidos permanentemente. Se aceptan también los términos
eluito y analito para un componente de la muestra.
j) Soluto
Término que se refiere a los componentes de la muestra en la cromatografía de
reparto.
k) Disolvente
Término que en ocasiones se refiere a la fase estacionaria líquida en la cromatografía
de reparto.
Nota: En la cromatografía líquida, el término "disolvente" se ha usado a menudo para
la fase móvil. Este uso no se recomienda.
l) Zona
Región del lecho cromatográfico donde se localizan uno o más componentes de la
muestra. Se puede usar para ello también el término banda.
m) Cromatograma
Una gráfica u otro tipo de presentación de la respuesta de un detector (la
concentración de un analito en el efluente u otra magnitud usada como medida de la

4. concentración en el efluente) frente al volumen de efluente o al tiempo. En la
cromatografía plana, "cromatograma" puede referirse al papel o capa con las zonas
separadas.
n) Cromatografiar
Separar por cromatografía.
o) Cromatógrafo
El instrumento empleado para realizar una separación cromatográfica
MECANISMOS DE SEPARACIÓN
a. Cromatografía de adsorción
Que es un fenómeno de interacción superficial por el cual átomos, iones o moléculas
son retenidas en la superficie de un material. Diferente afinidad de adsorción de los
componentes de la muestra sobre la superficie de un sólido activo. La adsorción es la
capacidad de las superficies para fijar moléculas. La Fase Estacionaria. es siempre
sólida. Ejemplos: alúmina, gel de sílice, carbón activo, fosfato cálcico, hidroxiapatito.
La cromatografía de adsorción, es una técnica particularmente útil para separar
compuestos de polaridad baja o media. La separación de compuestos muy polares
mediante cromatografía de adsorción requiere, debido a la gran retención que ofrecen,
la utilización de adsorbentes muy poco activos, o bien, tratamientos químicos previos a
fin de reducir su polaridad (3) (4)
b. Cromatografía de Reparto
La separación se basa principalmente en la diferente solubilidad de los componentes
de la muestra en la fase estacionaria (caso de la cromatogafía de gases), o en las
diferentes solubilidades de los componentes en las fases móvil y estacionaria (caso de
la cromatografía líquida). La mayor o menor migración de un componente en este tipo
de cromatografía será función del coeficiente de reparto de éste entre la fase
estacionaria y la fase móvil:
𝐾𝑑 =
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝐴 𝑒𝑛 𝐹𝑎𝑠𝑒 𝑀ó𝑣𝑖𝑙
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝐴 𝑒𝑛 𝐹𝑎𝑠𝑒 𝐸𝑠𝑡𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛𝑎𝑟𝑖𝑎
La cromatografía de reparto se utiliza para la separación de mezclas de compuestos
de polaridad media y alta. Algunos ejemplos de este tipo de cromatografía son las
cromatografías sobre papel, sílice hidratada y fase inversa en la cromatografía líquida
de alta eficacia (5)

5. c. Cromatografía de Exclusión
La separación se basa principalmente en efectos de exclusión, tales como las
diferencias de tamaño molecular o de forma, o las diferencias de carga. Se puede usar
también el término cromatografía de exclusión por tamaños, SEC, cuando la
separación se basa en el tamaño molecular. Anteriormente se usaban para esto los
términos filtración en gel y cromatografía de permeación en gel (GPC), cuando la fase
estacionaria es un gel hinchado. El término cromatografía de exclusión de iones se
usa específicamente para la separación de iones en una fase acuosa (6)
d. Cromatografía de Intercambio Iónico
La separación se basa principalmente en la diferente afinidad para el intercambio de
iones de los componentes de la muestra. Actualmente, cuando se lleva a cabo sobre
columnas de partículas pequeñas y elevada eficiencia, y empleando habitualmente
detectores conductimétricos o espectroscópicos, se denomina cromatografía de iones
(IC) (3)

6. e. Cromatografía de Afinidad
Esta expresión caracteriza una variedad particular de cromatografía en la que se utiliza
para la separación la especificidad biológica singular respecto a la interacción entre
analito y ligando (3)
CLASIFICACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA
La cromatografía se puede clasificar de acuerdo con la forma del Lecho
Cromatográfico: Cromatografía Plana y Cromatografía en Columna; y de acuerdo con
el Estado Físico de las Fases: Cromatografía de gases y Cromatografía líquida.
Cromatografía Plana
La cromatografía plana es aquella técnica de separación en la que la fase estacionaria
se presenta en un plano. Se distingue entre la cromatografía en papel y la
cromatografía en capa fina. En el primer caso, la fase estacionaria es una lámina de
papel que puede estar impregnada de otra sustancia, y en el caso de la cromatografía
de capa fina consiste en una capa de partículas sólidas distribuidas en un soporte
plano (7)
Cromatografía en Columna
Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Alúmina (Al2O3), Sílica u Oxido de Magnesio.
La fase estacionaria está constituida por un sólido poroso, el cual queda soportado en
el interior de una columna generalmente fabricada en plástico o vidrio. La fase móvil se
encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la fase estacionaria.
La solución que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por nueva
solución que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.
La migración de las sustancias de la mezcla a través de la columna se encuentra
retardada en diferente grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas
pueda ejercer con la fase estacionaria. Las sustancias se separan gradualmente
formando bandas dentro de la banda total, la separación, y por tanto la resolución,
aumenta con la longitud de la columna. La banda individual de cada sustancia puede

7. ensancharse con el tiempo debido a procesos difusiónales, disminuyendo por tanto la
resolución (8)
Cromatografía de Gases
La cromatografía es un método físico de separación en el cual los
componentes a ser separados son distribuidos entre dos fases, una de las
cuales es estacionaria mientras la otra se mueve en una dirección definida. Los
componentes son separados por sus diferentes tazas de migración (IUPAC). La
cromatografía puede ser clasificada por su utilidad y en base al material que se
utilice como eluyente para separar los solutos. De acuerdo a su utilidad la
cromatografía se clasifica en: analítica, utilizada para determinar los químicos
presentes en una mezcla y en que concentración; y preparativa, utilizada para
purificar grandes cantidades de químicos (9)
Cromatografía líquida
En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una
columna que contiene a la fase fija. La separación cromatográfica en HPLC es el

8. resultado de las interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas
fases, móvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de alto
rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no está limitada por
la volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos
naturales lábiles, materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos
polifuncionales de alto peso molecular. Con una fase móvil líquida interactiva, otro
parámetro se encuentra disponible para la selectividad, en adición a una fase
estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor
gama de estas interacciones selectivas y más posibilidades para la separación (10)
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. García. Curso de Métodos: Cromatografía México [en linea] ; 2002. [acceso: 12 de
Enero de 2016]. Disponible en:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Cromatografia.pdf
2. Chicharro. CROMATOGRAFÍA principios y aplicaciones [en linea] ; 2009. [acceso:
12 de Enero de 2016]. Disponible en:
http://es.scribd.com/doc/19050563/Cromatografia-Principios-y-Aplicaciones#scribd
3. Malave. Principios de Croamtografía Ecuador; 2014.
4. BIOMODEL. Cromatografía [en linea] España; 2015. [acceso: 12 de Enero de
2016]. Disponible en: http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm
5. Gonzáles. Cromatografía Líquida ; 2014.
6. González J. Técnicas de Separación Cromatográfica [en linea] ; 2012. [acceso: 12
de Enero de 2016]. Disponible en: http://ocw.usal.es/ciencias-
experimentales/analisis-aplicado-a-la-ingenieria-
quimica/contenidos/course_files/Tema_12.pdf
7. Fuentes. Bioquímica Clínica y Patología Molecular Barcelona [en linea] :
REVERTÉ ; 1998. [acceso: 12 de Enero de 2016]. Disponible en:
https://www.google.com.ec/#q=cromatografia&tbm=bks
8. García. SEPARACIÓN DE FERROCENO Y 4,6,8-TRIMETILAZULENO POR
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA [en linea] España ; 2014. [acceso: 12 de Enero

9. de 2016]. Disponible
en:https://sites.google.com/site/grupodepolimeros/cromatografia-en-columna
9. Olguín , Rodríguez. Cromatografía de Gases [en linea]. México ; 2004. [acceso: 12
de Enero de 2016]. Disponible en:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_gases.pdf
10. Ozores. Laboratorio de Técnicas Instrumentales UVA [en linea] [Online].; 2015.
[acceso: 12 de Enero de 2016]. Disponible en:
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisisqumicos/cromatografa-de-
lquidos-hplc
MARCO ROBLES ____________
LISSETH ESPINOZA _____________