PROTOCOLO DE CULTIVO MONOSPORICO
Materiales:
-Hongo al que queremos replicar
-Cajas de Petri
-Agar PDA
-Asa de punta
-Asa ...
PROTOCOLO DE AISLAMIENTO
Materiales:
-hongos
-cajas de Petri
-asas chuzo
-alcohol
-mechero
-papel chicle
-agar PDA
- se es...
PROTOCOLO DE PURIFICACIÓN
Materiales:
-Hongos aislados
-cajas de Petri
-asas bacterianas chuzo
-alcohol
-mechero
-papel ch...
PROTOCOLO DE MICROSCOPIA
Materiales:
-azul de lacto fenol
-asa de chuzo
-porta objeto
-cubre objeto
-hongos
-mechero
-guan...
PROTOCOLO DE SIEMBRA
Materiales:
-papel chicle
-pinzas
-cajas de Petri
-agar PDA
-hipoclorito de sodio
-bisturí
-muestras
...
PROTOCOLO DE DESINFECCIÓN
Materiales:
-Alcohol
-Hipoclorito de sodio
-Agua deshionisada estéril
-Pinzas
-Papel
-Tejidos de...
PROTOCOLO DE DILUCIONES SERIADAS
Materiales:
-Micro pipeta 1
-Tubos de ensayo 12
-Gentamicina 2
-Asa de vidrio 1
-Cajas de...
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  1. 1. PROTOCOLO DE CULTIVO MONOSPORICO Materiales: -Hongo al que queremos replicar -Cajas de Petri -Agar PDA -Asa de punta -Asa de vidrio triangular -Pipeta de 1ml -Pipeteador -Mechero Proceso: - Primero se prepara el medio PDA para la cantidad de cajas necesarias - Para mayor protección se mete a la autoclave el agar, las cajas de pretri necesarias, el asa de punta, con la pipeta y el agua que se utilizara para el proceso. - Se sirve el medio de cultivo y se espera aprox 10 min para que este solidifique. - Con el asa de punta raspamos la superficie del hongo al que queremos replicar para que en este queden pegaras algunas conidias. - Para sembrar estas conidias, ponemos el asa sobre la caja de petri y con agua estéril lo goteamos, haciendo que las conidias caigan en la caja de petri con agar. - Con el asa de triangulo previamente remojada en alcohol y flameada se frota todo el medio hasta que este adsorba el agua y con ella las conidias. - Sellamos las cajas de pretri con papel chicle y esperamos aprox 8 días para el desarrollo total del hongo
  2. 2. PROTOCOLO DE AISLAMIENTO Materiales: -hongos -cajas de Petri -asas chuzo -alcohol -mechero -papel chicle -agar PDA - se esteriliza el material en el autoclave durante 45 minutos -luego se entra a la cabina de flujo laminar y previamente desinfectados -de la caja de Petri se va a sacar un trozo del hongo y lo pasaremos a l otra con el agar PDA -desinfectaremos el asa con el alcohol y el mechero -realizaremos lo misma acción con los hongos -al finalizar se marcan las cajas y se sellan bien con el papel chicle
  3. 3. PROTOCOLO DE PURIFICACIÓN Materiales: -Hongos aislados -cajas de Petri -asas bacterianas chuzo -alcohol -mechero -papel chicle -agar PDA -se esterilizan los materiales con el autoclave durante 45 minutos -luego se entra a la cabina de flujo laminar previamente desinfectados -de los hongos aislados se toma un trozo y al pasarlo a la otra caja de Petri se traslada el asa con el (mechero y alcohol) hacia la siguiente caja de Petri y se coloca en el centro de ella
  4. 4. PROTOCOLO DE MICROSCOPIA Materiales: -azul de lacto fenol -asa de chuzo -porta objeto -cubre objeto -hongos -mechero -guantes -microscopio Alcohol -se coge el porta objetos se le echa una gota de azul de lacto fenol -con el asa previamente esterilizada se coge un trozo del hongo y se esparce en el portaobjetos -se le coloca el cubre objetos sobre esta muestra y se retira el exceso de azul - se observa en el microscopio y se determina las características de ella
  5. 5. PROTOCOLO DE SIEMBRA Materiales: -papel chicle -pinzas -cajas de Petri -agar PDA -hipoclorito de sodio -bisturí -muestras - se esteriliza el material en el autoclave durante 25 minutos -Previamente esterilizados se entra a la cabina de flujo laminar para realizar el debido proceso el cual consta de cortar con el bisturí trozos de hojas tallos y vainas tanto bueno como malo para poder sembrar estos tejidos se les hace un proceso de desinfección (Anexo 1) -Se colocan de a 5 partes de cada muestra (hoja, tallo vaina, grano) en cada caja de pretri -Se marcan las cajas de pretri y se cella con papel chicle
  6. 6. PROTOCOLO DE DESINFECCIÓN Materiales: -Alcohol -Hipoclorito de sodio -Agua deshionisada estéril -Pinzas -Papel -Tejidos del cultivo de frijol -Cajas de Petri -Medio de cultivo (PDA) -Se esterilizan las cajas de Petri y el medio de cultivo en el autoclave - se cogen los tejidos del cultivo de frijol los cuales son: Hojas Tallos Vainas Luego se sumergen en hipoclorito de sodio duran te un minuto esto se hará para quitar los hongos superficiales y solo queden los hongos que de verdad estén afectando al cultivo, luego se sumergen en agua deshionisada estéril para quitar los reactivos y no vaya a afectar al medio de cultivo y después se vuelve a sumergir en agua deshionisada para rectificar que si se hallan eliminado los reactivos más adelante, se dejan secar estos tejidos en el papel para que absorba el agua y quede totalmente seco para poder sembrar en el medio de cultivo (PDA) -se disuelve el agar en las cajas de Petri para poder sembrar - se siembran los tejidos de frijol a los cuales se les hizo el proceso de desinfección se siembran cuatro tejidos (hojas, tallos y vainas) por cada caja de Petri que son aproximadamente 20 cajas. Se espera aproximadamente ocho días para que crezca algún microorganismo
  7. 7. PROTOCOLO DE DILUCIONES SERIADAS Materiales: -Micro pipeta 1 -Tubos de ensayo 12 -Gentamicina 2 -Asa de vidrio 1 -Cajas de Petri 14 -Schott 3 -Agar PDA 5.46 g -Agar SDX 9.1g -Mechero 1 -Vortex 1 -Agua desionizada estéril 9mlpor cada tubo -Puntas estériles *Se coge la tierra (10g por cada muestra), se mezcla con el agua desionizada estéril y se agita manualmente. *Se adiciona el antibiótico Gentamicina 0.14 ml (3 gotas) por cada 140 ml. Luego se vierte el agar en las cajas de Petri. *Adicionalmente se hará las diluciones seriadas, luego de la solución madre con una micro pipeta se toma 1 ml y se pasa al primer tubo 10-1, se mezcla en el vortex por 60 segundos ,después se toma de ese tubo(10-1) 1 ml y se repite el mismo proceso hasta llegar a 10-4. *Después, se toma 1 ml de las últimas diluciones 10-3 y 10-4 para pasarlos a la caja de Petri, se esparce en ella con el asa de vidrio (previamente flameado) *Se encuba a temperatura ambiente (25 a 27°c), se espera aproximadamente 5 días para ver si ha crecido algún microorganismo y observar el crecimiento.

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