Aplicación del equipo de laboratorio para el análisis de una muestra de ADN

1. “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”
UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
PRÁCTICA N° 01:
“USO DEL ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS - NANO DROP ONE C DEL
LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y BIOTECNOLOGÍA”
Asignatura:
Biotecnología
Docente:
Dr. Soto Gonzales, Hebert Hernan
Fecha:
15 de Septiembre del 2023
Grupo 2 - Integrantes:
Aragon Arce, Nicole Lucia - 2020205081
Mamani Apomayta, Thaiz Mayerlin - 2019205120
ILO – PERÚ
2023

2. 1. INTRODUCCIÓN
En todo laboratorio, de cualquier área al que pertenezca, se implica el uso de una gran
variedad de instrumentos y equipos, cuya función, composición y cuidado depende de la
aplicación o metodología que se les atribuya. Más concretamente gracias a los equipos de
laboratorio es posible realizar experimentos, controles de procesos y controles de calidad de
los materiales para asegurar la calidad de los productos.
El hombre para impulsar la práctica de experimentos en laboratorio, poco a poco empezaron
a surgir estos aparatos y que ahora son el nuevo complemento del laboratorio. Estos se
encargan de garantizar la precisión y calidad de ensayos y pruebas que afectan directamente
la salud y calidad de vida de las personas. Sin embargo, estos equipos tienen una vida útil
definida y deben ser revisados y pasados por el adecuado mantenimiento a cargo de
especialistas o reemplazados por nuevos cuando sea necesario.
Adicionalmente, algunos de estos implementos son usados en la vida cotidiana ya sea de
carácter médico, profesional o alimenticio. Por tal razón,es muy importante que los
materiales y equipos de uso común en el laboratorio se identifiquen por su nombre correcto y
uso específico que tiene cada una pero más importante saber manejarlo correctamente en el
momento oportuno teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales para el uso de
aquellos así lo requieran.
En este informe se dará una breve descripción y función del Espectrofotómetro UV-Vis -
Nano Drop One Cl y luego se detalla el procedimiento de uno de sus tantos usos, analizando
el ADN de un hongo.

3. ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN................................................................................................................2
2. OBJETIVOS......................................................................................................................... 4
3. MATERIALES Y MÉTODOS............................................................................................5
3.1 MATERIALES:..............................................................................................................5
3.1.1 Espectrofotómetro UV-Vis - Nano Drop One C.-................................................. 5
3.1.2 Micropipeta........................................................................................................... 7
3.1.3 Tip o punta...........................................................................................................11
3.1.4 Tubo de microcentrifugación.............................................................................. 13
3.1.5 Papel tissue..........................................................................................................14
3.1.6 Muestras de hongo.............................................................................................. 15
4. PROCEDIMIENTO...........................................................................................................15
5. RESULTADOS................................................................................................................... 18
6. CONCLUSIONES..............................................................................................................19
7. BIBLIOGRAFÍA................................................................................................................20

4. 2. OBJETIVOS
● Conocer la definición y funciones de los instrumentos básicos utilizados en el
laboratorio de Biología Molecular y Biotecnología.
● Aprender a usar correctamente los instrumentos, más concretamente el
Espectrofotómetro UV-Vis - Nano Drop One C, que se encuentran en el
laboratorio de Biología Molecular y Biotecnología.
● Analizar el ADN de la especie de un Hongo Filamentoso del Mar nombrado
N°29 para hallar su concentración y absorbancia, esto posteriormente será
utilizado para un proyecto de biorremediación para aguas contaminadas.

5. 3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 MATERIALES:
3.1.1 Espectrofotómetro UV-Vis - Nano Drop One C.-
El instrumento es un espectrofotómetro UV-visible compacto y
autónomo diseñado para el análisis de micro volúmenes de ácidos
nucleicos y una amplia variedad de proteínas purificadas. El sistema de
NanoDrop incluye un software precargado y una pantalla táctil, así
como un puerto donde se puede conectar a una impresora vía USB
(opcional). La innovadora tecnología de inteligencia de nuestras de
Thermo Scientific ayuda a una mejor precisión de medición e
identificación de contaminantes. Su sistema de retención de muestras
patentado permite la medición de muestras de alta concentración sin
necesidad de dilución, teniendo un ajuste de forma automática para
muestras tanto de bajas o altas concentraciones de la misma medición
de tal modo que cualquier muestra desconocida caiga siempre dentro
del rango de medida.
○ Características y funciones:
● Control local con sistema operativo Android y
pantalla táctil. No requiere de conexión a ordenador
para su total funcionamiento. Opcionalmente se
puede controlar mediante software de ordenador.
Posee pantalla táctil a color de alta resolución
(1280800) compatible con guantes de laboratorio.

6. ● Múltiples opciones de conectividad incluyendo 3
puertos USB, Wi-Fi, Bluetooth y Ethernet, para la
exportación y análisis de datos en otros formatos y
en ordenadores satélite.
● Introduce el sistema AcclaroTM que permite el
análisis automático de impurezas y un algoritmo
para corrección y reporte de los valores de
concentración de las muestras. Además posee una
opción que mide la integridad de las muestras
mediante un procesamiento digital de imagen.
○ Partes:
● Incluye un sistema de retención de muestras de
microvolumen patentado y diferentes funciones
generales.
● Lleva incorporado una pantalla táctil Android de
alta resolución de 7 pulgadas y un software de
control del instrumento muy fácil de utilizar. La
pantalla táctil se puede deslizar a izquierda o
derecha para adaptarla a las preferencias
personales, e inclinarse adelante o atrás para
obtener una visión óptima.
● Incluye un portacubetas UV-visibles para medir
muestras diluidas, ensayos colorimétricos, cultivos

7. celulares y estudios cinéticos. El sistema de cubetas
cuenta con esas características adicionales:
➢ Límites de detección más bajos.
➢ Opción de calentador de 37*C para análisis
y muestras sensibles a la temperatura.
➢ Opción de micro agitación para asegurar la
homogeneidad de la muestra y facilitar los
estudios cinéticos.
Imagen 01.Espectrofotómetro UV-Vis - Nano Drop One C. Imagen propia
3.1.2 Micropipeta
Son dispositivos ideales para las necesidades de medición de volumen
de líquidos que se llevan a cabo ya sea en análisis clínicos,
experimentos o ensayos de control de calidad. Forman parte del

8. instrumental de laboratorio empleado para absorber y transferir
pequeños volúmenes de líquidos que se quieran analizar.
Los volúmenes captables por estos dispositivos varían según el
modelo y tipo de pipeta: los más habituales, denominados p20,
p200 y p1000, admiten un máximo de 20, 200 y 1000 μl,
respectivamente. Cada tamaño diferente se encuentra diseñado
para medir líquidos dentro de diferentes rangos de volumen.
○ Características y funciones:
● Empleado para recolectar muestras en volúmenes
muy pequeños, en el orden de los microlitros para
su posterior análisis, y una adecuada distribución.
● Permite manipular muestras de experimentación y
pruebas en las diferentes áreas en las que son
utilizadas.
● Emplea puntas desechables, de plástico, que
habitualmente son estériles, para evitar el constante
lavado del equipo si se van a realizar varios ensayos
o exámenes con ella.
○ Precauciones:
● Volumen: Al utilizar se debe asegurar haber
interpretado adecuadamente el volumen que emite
y qué tip (dispositivo plástico que se coloca en el

9. extremo) se debe utilizar. El volumen puede estar
escrito en el costado o en la parte superior,
indicando la unidad de medida. Además de tomar
en cuenta que hay de volumen fijo o regulables.
● Apreciación: Para las micropipetas de volumen
variable existe el valor de apreciación. En estas
pipetas la apreciación se puede observar en la
ventana que muestra los números que cambian al
girar en un sentido o el contrario, el botón superior.
Por ejemplo: si al girar el botón, el número cambia
de 23 a 24 y la pipeta tenía un rótulo 10-50. Éste
último nos indica que sirve para emitir volúmenes
entre 10 y 50 ul y que la apreciación es 1 ul.
● Carga y descarga del volumen: La mayoría de las
micropipetas en uso tiene dos topes al oprimir el
botón de la parte superior. Por lo que debe
oprimirse lentamente hasta el primer tope.
Asimismo, para eliminar algún residuo luego de
terminada la toma, del mismo modo se oprime
lentamente hasta el segundo tope. Para retirar el tip
del recipiente, se puede descartar con el eyector de
puntas, en caso que la micropipeta lo posea.

10. ● Precisión y exactitud de las micropipetas: Si hay
sospecha que la precisión y/o la exactitud no son las
adecuadas, se debe sacar de circulación y
comunicar el problema.
○ Partes:
● Botón de accionamiento: Sirve para cargar y
descargar determinada cantidad de volumen
dependiendo de la capacidad del instrumento.
● Rueda de ajuste de volumen: Regula la cantidad de
volumen que se va a cargar según el rango del
instrumento.
● Indicador de volumen: Es la pantalla que muestra la
cantidad de volumen que tomará el instrumento.
● Eyector de tip o puntas. Para descartar los tip luego
de su uso, se presiona este botón con un recipiente
debajo que los reciba para descartarlos
posteriormente.
● Gancho: Sirve de apoyo para manipular de manera
adecuada el instrumento.

11. Imagen 02. Micropipeta de P20. Imagen propia
Imagen 03. Micropipeta de P10. Imagen propia
○ Tipos:
● P1000 es útil para volúmenes de 200 hasta 1000 µL
● P200 es útil para volúmenes de 20 hasta 200 µL.
● P20 es útil para volúmenes de 0.5 hasta 20 µL.
● P10 es útil para volúmenes de 0.5 hasta 10 µL.
3.1.3 Tip o punta.
Son tubos de plástico que tienen un estrechamiento en uno de sus
extremos, denominados punta cónicas, y en el otro extremo
presentan unas boquillas. Se utilizan para dispensar pequeños
volúmenes de líquido de manera muy precisa y se utilizan
conjuntamente con micropipetas o robots de dispensación de

12. líquidos. Se distribuyen en cajas de polipropileno, con tapa
encajable.
Influye mucho en la precisión y la exactitud de una buena pipeta
bien calibrada. Dependiendo del experimento que se esté
realizando, una elección incorrecta de puntas puede ocasionar una
contaminación, desperdicio de muestras valiosas o incluso, causar
daños físicos en forma de lesiones por estrés repetitivo (RSI).
En este caso, las puntas utilizadas son de baja retención, es decir,
se caracterizan por su cualidad de no 'retener' o retener líquido.
Imagen 04. Tip o punta de micropipeta de 20 µL. Imagen propia

13. Imagen 05. Tip o punta de micropipeta de 10 µL. Imagen propia
3.1.4 Tubo de microcentrifugación.
Es un pequeño contenedor cilíndrico de plástico o polipropileno,
con un fondo cónico y típicamente una tapa unida al cuerpo del
tubo para evitar su desprendimiento. Son empleados
profusamente en biología molecular y bioquímica no sólo para la
centrifugación, sino que, dado su bajo coste, se emplean a
menudo como simples viales contenedores de sustancias
químicas.
Están hechos químicamente resistentes a los alcoholes y
disolventes orgánicos leves. Tienen una pared transparente la cual
permite una fácil visualización del contenido del tubo que soporta

14. una temperatura de trabajo desde 20 o C a 121 o C y soportan una
centrifugación de 24.000 RCF en un rotor totalmente compatible.
Imagen 07. Tubo de microcentrifugación. Imagen propia
3.1.5 Papel tissue.
Es un papel fino y absorbente hecho de pulpa de celulosa. Su
textura es suave debido a sus micro-arrugas (crepado) y se
caracteriza por tener una alta absorción y sin dejar restos (bolitas
en el papel) siendo fabricado en capas para múltiples usos en el
hogar, e incluso laboratorios.
Imagen 08. Papel tissue. Imagen propia

15. 3.1.6 Muestras de hongo.
Las muestras utilizadas durante el proceso de análisis de ADN
pertenecen a determinadas clases de hongos (HONGO 29 Y
HONGO 30).
Imagen 09. Muestras de hongos analizados. Imagen propia
4. PROCEDIMIENTO
I. Iniciamos preparando las muestras de hongo para analizar. Colocando 10 µL de
agua pura con una micropipeta P20 adecuada para el volumen a tres tubos de
microcentrifugación.
II. Posteriormente tomamos 5 µL de ADN de un hongo (HONGO 29) y lo
vertemos a la primera dilución. Cargando y descargando para homogeneizar la
muestra.
III. Continuamos con el mismo método, haciendo uso de la misma cantidad de la
dilución hasta el tercer tubo.

16. IV. Ahora, empezaremos con el análisis de ADN de la muestra haciendo uso del
espectrofotómetro Nanodrop One C. Encendemos el equipo y en primer lugar,
mediremos agua pura para calibrar, debiendo dar resultados nulos.
Presionaremos en “Blanco”.
V. Próximamente cogeremos el primer tubo de la dilución, y con ayuda de la
micropipeta de P10, cargamos de 2 µL de muestra.
VI. Presionamos ligeramente el botón de accionamiento para sacar una microgota
que colocaremos en el área de muestra del espectrofotómetro. Cerramos la
cubierta y presionamos en “Medición”.
VII. Del mismo modo, repetiremos el proceso; siempre limpiando con papel tissue
el área de la muestra para evitar variantes en los datos.
VIII. Finalmente anotaremos los datos presentados en la pantalla del equipo, para la
futura identificación del ADN.
Imagen 10. Diluciones de las muestras de ADN. Imagen propia

17. Imagen 11. Preparación de las diluciones. Imagen propia
Imagen 12 y 13. Análisis de la muestra en blanco (agua pura). Imagen propia

18. Imagen 14, 15 y 16. Análisis de la muestra de ADN haciendo uso de la
micropipeta y el espectrofotómetro. Imagen propia
5. RESULTADOS
Tabla 1
Resultados obtenidos del espectrofotómetro de la muestra N° 29.
Número de
dilución
ng/uL A260/A280 A260/230
Primera dilución - 4,6 3,87 1,48
Segunda dilución - 22,1 1,89 0,83
Tercera dilución -27,3 1,81 0,81

19. 6. CONCLUSIONES
● Los objetivos establecidos al principio del experimento se han logrado de
manera efectiva. Se ha adquirido un conocimiento sólido sobre la definición y
funciones de los instrumentos utilizados en el laboratorio de Biología
Molecular y Biotecnología, en particular, el Espectrofotómetro UV-Vis - Nano
Drop One C.
● Los resultados del análisis del ADN del Hongo Filamentoso del Mar
proporcionan información valiosa para un proyecto de biorremediación de
aguas contaminadas. Los datos de concentración y absorbancia obtenidos
servirán como base para diseñar estrategias de tratamiento ambiental efectivas.
● El proceso de dilución y las mediciones realizadas con el espectrofotómetro
han sido ejecutados adecuadamente, lo que se refleja en la consistencia de los
resultados obtenidos en las tres diluciones. Esto asegura que los datos sean
confiables y precisos.
● Los valores de concentración del ADN del Hongo Filamentoso del Mar varían
en las tres diluciones, lo que indica que hay una concentración más baja a
medida que se avanza en las diluciones. Esto quiere decir que el
espectrofotómetro se encuentra operando de manera eficaz proporcionando
resultados correctos .

20. 7. BIBLIOGRAFÍA
● Tarqui Chavez, Mel. (2023). "INFORME DE SOBRE LOS EQUIPOS DE
LABORATORIO PRESENTADOS" CURSO: BIOTECNOLOGÍA.
● Cob Calan, N. (s.f.) Práctica 1: CONOCIMIENTO DEL MATERIAL Y EQUIPO DE
LABORATORIO. Curso de Química Inorgánica. ITESCAM.
● Research, I. (2022, 16 mayo). Laboratorio químico: instrumentos y materiales.
INFINITIA Industrial Consulting. Recuperado de:
https://www.infinitiaresearch.com/noticias/materiales-instrumentos-laboratorio-quimi
co/
● Kalstein. (2023). ¿Qué es una micropipeta? y sus funciones. Kalstein. Recuperado de:
https://www.kalstein.cl/que-es-una-micropipeta-y-sus-funciones/
● Radenti, J,;Cornaglia, M.; Véscovo, M.; Lehn, S.; Balmaceda,G.; Ferrer, A. y Paleari,
M. (2016) FUNDAMENTOS TEÓRICO-PRÁCTICOS PARA AUXILIARES DE
LABORATORIO. Laboratorio de Biología Ósea. Facultad de Ciencias Médicas.
Universidad Nacional de Rosario.
● Puntas de pipetas | VWR. (s. f.). Avantor. Recuperado de:
https://es.vwr.com/store/category/puntas-de-pipetas/8287316
● Labclinics. (2019). Guía para escoger las puntas de pipeta adecuadas.
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https://www.labclinics.com/2019/12/05/guia-para-escoger-las-puntas-de-pipeta
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● TUBOS MICROCENTRÍFUGA - Biolore. (2019, 6 septiembre). biolore.
Recuperado de:
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21. ● Tubo de Microcentrífuga/Envase para guardar semillas (1,5ml). (s. f.).
Recuperado de:
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● Papelera Alfa. (2020, 3 septiembre). Papel tissue - papelera Alfa. Recuperado
de: https://papeleraalfa.com/papel-tissue/