Este documento describe las partes y el funcionamiento de un espectrofotómetro, un instrumento que utiliza la luz para determinar la concentración de sustancias en soluciones. Explica que contiene una fuente de luz, un compartimiento de muestra, detectores, un monocromador y otras partes. También describe cómo preparar y medir una muestra, incluyendo los pasos de calibración y lectura de la absorbancia para determinar la concentración de la sustancia.
1. Centro de Bachillerato
Tecnológico Industrial y de
servicios 189
“Gral. Lucio Blanco”
Docente: María Elena Garza Pérez
Química Bióloga Farmacéutica
Modulo 1: auxiliar en los procesos
básicos de laboratorio.
Submodulo II: prepara soluciones
para los operaciones básicas de
laboratorio.
Equipo VII:
Esly Naomi Arteaga Ortiz
Yesenia Cruz Camacho
Ramón Omar Martínez
Johanna Berenice Duarte Ojeda
Perla Ortiz Vite
Brayan Arnulfo Morales
Jacqueline Gomez Obregón
2CLCM ¿?:02:2017
2. ¿Qué es el espectrofotómetro?
Se deriva de la palabra latina spectrum,
que significa imagen, y de la palabra griega
phos o photos, que significa luz.
Es uno de los principales instrumentos
diagnósticos y de investigación
desarrollados por el ser humano. Utiliza las
propiedades de la luz y su interacción con
otras sustancias, para determinar la
naturaleza de las mismas.
3. ¿Cuál es su uso?
Se usa en el laboratorio con el fin de determinar
la concentración de una sustancia en una
solución, permitiendo así la realización de
análisis cuantitativos.
4. Métodos o técnicas de uso.
Este permite:
-Caracterizarlo
-Identificarlo
-Cuantificarlo
El equipo genera:
-Calibración
-Tiempo de respuesta
-Resolución (purificación
6. Fuente de luz / fuente luminosa
La fuente de luz ilumina la muestra química o biológica, pero
para que realice su función debe cumplir con las siguientes
condiciones: estabilidad, direccionalidad, distribución de energía
espectral continua y larga vida. La energía radiante típica que
emite una lámpara de tungsteno que es la que mayormente se
usa en un espectrofotómetro está entre los 2 600 y los 3 000 kJ
(grados Kelvin).
7. Colimador.
El colimador es un lente que lleva el haz
de luz entrante con una determinada
longitud de onda hacia un prisma, el
cual separa todas las longitudes de onda
de ese haz logrando que se redireccione
hacia la rendija de salida.
8. Compartimiento de muestra.
Está diseñado para sostener la muestra que se quiere analizar dentro
del rayo de luz de longitud de onda determinada por el monocromador.
El portador de muestras lo diseñan los fabricantes de acuerdo al tipo
de espectrofotómetro y de muestra a analizar, por ello se encuentran
portadores de muestra con microceldas, aunque también tubos de
ensayo y otras variantes como las celdas de flujo continuo
9. Celdas.
Son los recipientes donde se depositan las
muestras líquidas a analizar. El material
del cual están hechas varía de acuerdo a la
región que se esté trabajando; son de vidrio
o plástico si se trabaja en la región visible,
de cuarzo si se trabaja en la ultravioleta y
de NaCl si se trabaja la región de
infrarrojo. Se caracterizan por tener dos
paredes correspondiente a los lados ópticos
por donde cruza el haz de luz.
10. Detector.
El detector se encarga de evidenciar una radiación para
que posteriormente sea estudiada y saber a qué tipo de
respuesta se enfrentarán (fotones o calor). El sistema de
detección recibe la energía lumínica proveniente de la
muestra y la convierte en una señal eléctrica
proporcional a la energía recibida. La señal eléctrica
puede ser procesada y amplificada, para que pueda
interpretarse a través del sistema de lectura.
11. Fotodetectores.
Los fotodetectores de un espectrofotómetro perciben la señal en
forma simultánea en 16 longitudes de onda y cubren al espectro
visible, de esta manera se reduce el tiempo de medida y minimiza
las partes móviles del equipo.
12. Monocromador
El monocromador de un espectrofotómetro aísla las radiaciones de
longitud de onda deseada, logrando obtener luz monocromática.
Un monocromador está constituido por las rendijas de entrada y
salida, colimadores y el elemento de dispersión.
13. ¿Cómo funciona?
I. Encender el espectrofotómetro antes de realizar la prueba teniendo en cuenta el tiempo de termostatización
recomendada por el fabricante.
II. Selecciona la longitud de onda de trabajo. Si tiene un fotocolorímetro seleccione el filtro de onda indicada.
III. Selecciona la temperatura de trabajo.
IV. Elegir una cubeta en buen estado. (sin deformaciones ni suciedad).
V. Llevar a cero de absorbancia con agua destilada.
VI. Vaciar la cubeta y enjuagarla con una pequeña porción de la solución a medir para evitar arrastrarse.
VII. Cargar la cubeta con la solución y leer la absorbancia por duplicado informando la observancia promedio.
VIII. Si se debe medir más de una solución, enjuagar la cubeta con una porción de la solución antes de medir y leer como
en el paso 7. Tener la precaución de empezar siempre por la solución más diluida.
15. Mantenimiento preventivo.
I. Colocar instrumento en un lugar en donde no esté sujeto a
vibraciones, calor excesivo, humedad o luz directa.
II. Proteger el instrumento del polvo. Nunca tocar las superficies
ópticastales como lentes y filtros.
III. Permitir que el instrumento se caliente antes de hacer algún
procedimiento.
IV. Se debe hacer un chequeo periódico(cada semana) de la calibración
de la longitud de onda, cuando se sospeche que ha variado, con el
Tubo deDidimium.
V. Verificar cada vez que se vaya a hacer lecturas y cuando varíe la
longitud de onda.
VI. Asegurarse de que las cubetas estén limpias y libres de ralladuras y
huellas digitales.