curso de biotecnología PRACTICA N.- 01 Uso del Espectrofotómetro UV-Vis - Nano Drop One C.pdf

1. INFORME
“Uso del Espectrofotómetro UV-
Vis - Nano Drop One C del
Laboratorio de Biología
Molecular y Biotecnología -
UNAM / ILO”
Curso:
Biotecnologia
Realizado por:
Cuellar Maquera, Romy Betzabet
(2019205112)
Callata Llampi, Yoselin Sheyla
(2020205013)
Docente:
Soto Gonzales, Hebert Hernan
2023
UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA
AMBIENTAL
“Año de la unidad, la paz y el desarrollo”
GRUPO 03

2. ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN 2
2. OBJETIVOS 3
3. MATERIALES Y MÉTODOS 4
4. PROCEDIMIENTO 6
5. RESULTADOS 7
6. CONCLUSIÓN 8
7. BIBLIOGRAFÍA 9
Anexos: 9

3. 1. INTRODUCCIÓN
El espectrofotómetro UV-Vis NanoDrop One C es un instrumento altamente
especializado utilizado en diversas aplicaciones científicas y de investigación. Este
dispositivo se utiliza para medir la absorbancia de muestras en el rango ultravioleta-visible
(UV-Vis), lo que permite analizar la cantidad de luz absorbida por una muestra en función de
la longitud de onda.
El NanoDrop One C se destaca por sus características únicas y su facilidad de uso.
Una de las principales ventajas de este espectrofotómetro es su capacidad para medir micro
volúmenes de muestra, lo que significa que solo se requiere una pequeña cantidad de muestra
para realizar las mediciones. Esto es especialmente útil cuando se trabaja con muestras
costosas o limitadas.
Además, el NanoDrop One C tiene un amplio rango de longitud de onda, que va
desde 190 nm hasta 850 nm. Esto permite la detección de una amplia gama de compuestos y
moléculas, lo que lo convierte en una herramienta versátil para diversas aplicaciones, como la
cuantificación de ácidos nucleicos, proteínas y otros compuestos biológicos.
Tiene características especiales que lo hacen adecuado para la medición de micro
volúmenes de muestras individuales de ADN, ARN y proteínas:
Medición de micro volúmenes: El NanoDrop One C es capaz de medir volúmenes de
muestra tan pequeños como 1-2 μL, lo que permite ahorrar tiempo y reducir la cantidad de
muestra requerida.
Amplio rango de longitud de onda: El espectrofotómetro NanoDrop One C puede
medir en el rango de longitud de onda de 190 a 850 nm, lo que permite la detección de una
amplia gama de compuestos.
Alta precisión y reproducibilidad: El NanoDrop One C utiliza una tecnología de
medición de trayectoria óptica corta, lo que proporciona mediciones precisas y reproducibles.

4. Software intuitivo: El espectrofotómetro NanoDrop One C viene con un software
fácil de usar que permite realizar análisis cuantitativos y cualitativos de muestras, así como el
cálculo automático de concentraciones y pureza.
Conectividad y almacenamiento de datos: El NanoDrop One C está equipado con
conectividad Wi-Fi y USB , lo que permite la transferencia de datos y la conexión a otros
dispositivos. Además, tiene capacidad de almacenamiento interno para guardar los resultados
de las mediciones.
En resumen, el espectrofotómetro UV-Vis NanoDrop One C es una herramienta
versátil y precisa para la medición de absorbancia en el rango UV-Vis . Su capacidad de medir
micro volúmenes y su software intuitivo lo hacen adecuado para una amplia gama de
aplicaciones en investigación científica y análisis de muestras biológicas.
2. OBJETIVOS
- Identificar los componentes principales de un espectrofotómetro uv-vis de absorción
molecular
- Conocer el manejo del Espectrofotómetro UV-Vis - Nano Drop One C del Laboratorio
de Biología Molecular y Biotecnología - UNAM / ILO.

5. 3. MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIALES Y EQUIPO
NANODROP ONE C
MICROPIPETA ELECTRONICA

6. MICROPIPETAS DE 10 MICROLITROS DE
AGUA
TUBOS DE MICROCENTRÍFUGA
MUESTRAS HOMOGENEIZADAS

7. PAÑOS DE LIMPIEZA FIBRA ÓPTICA
4. PROCEDIMIENTO
1. Habiendo recibido la introducción de los metodos espectrofotométricos de parte del
docente, identificar de manera visual los componentes principales de los instrumentos ópticos
existentes en el laboratorio.
2. Tomar nota de las observaciones realizadas.
3. Específicamente, identificar de igual manera los componentes principales del
espectrofotómetro UV-Vis - Nano Drop One C del Laboratorio de Biología Molecular y
Biotecnología - UNAM / ILO.
4. Encender el espectrofotómetro UV-Vis - Nano Drop One C del Laboratorio de Biología
Molecular y Biotecnología - UNAM / ILO, siguiendo el protocolo de encendido indicado por
el docente. Esperar unos minutos a que encienda.
5. Después de los 5 minutos transcurridos, tomar nota de las instrucciones de operación del
espectrofotómetro indicadas por el docente para comprender el funcionamiento del
instrumento, así como el cuidado de las micropipetas para el traslado de la muestra.
6. En unos tampones de resuspensión introducir agua y luego la muestra de hongo 30.
7. Con la ayuda de las puntas de la micropipeta extraer la muestra de los tampones de
resuspensión al espectrofotómetro UV-Vis - Nano Drop One C para obtener los resultados.
7. Tomar nota de las observaciones realizadas.

8. 5. RESULTADOS
Tabla 1. Resultados de la absorbancia de la muestra de Hongo 30.
De este modo la concentración de la muestra de ADN se calcula teniendo en cuenta el valor
de absorbancia obtenido a una longitud de onda de 260nm. Mientras que la relación de absorbancias
A260/280 y A260/230 se utilizan para evaluar la pureza de las muestras.
La relación A260/280 es muy estable y se considera que un ADN de pureza óptima tiene
un valor entre 1.8-2.0. Un ADN de pureza aceptable debe tener al menos una relación A260/280 >
1.6. Un valor A260/280 < 1.6 indica una posible contaminación por compuestos aromáticos como
fenoles y proteínas. Un radio A260/280 > 2.1 podría deberse a la presencia de ARN en la muestra.
A 230nm absorben contaminantes como sales caotrópicas, fenoles o carbohidratos. En
general, se considera que el ADN es puro cuando el ratio A260/230 se sitúa en torno 1.8-2.2. Un
ratio menor de 1.8 se relaciona con presencia de contaminantes en la muestra. Cuanto menor sea este
ratio la presencia de contaminantes en la muestra será mayor. Un ratio < 1.5 estaría indicando una
impureza relevante en la muestra que podría comprometer su funcionalidad. No obstante, esta
relación resulta mucho más variable que la relación A260/280 dependiendo de factores como la
concentración de ADN o de la composición del tampón de resuspensión de la muestra.
Tabla 2. Valores indicados de muestras de ADN.

9. Fuente: Banco ADN. PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD DE MUESTRAS DE ADN Y ARN
6. CONCLUSIÓN
● El espectrofotómetro UV-Vis NanoDrop One C es una herramienta altamente
especializada y versátil en el campo de la investigación científica . Sus características
únicas, como la capacidad de medir micro volúmenes de muestra y su amplio rango
de longitud de onda, lo convierten en una opción preferida para la cuantificación y
análisis de muestras biológicas y químicas.
● El espectrofotómetro NanoDrop One C también se destaca por su alta precisión y
reproducibilidad. Utiliza una tecnología de medición de trayectoria óptica corta, lo
que garantiza mediciones precisas y confiables. Además, su software intuitivo facilita
el análisis de los datos y el cálculo automático de concentraciones y pureza de las
muestras.

10. 7. BIBLIOGRAFÍA
● Banco ADN, PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD DE MUESTRAS DE ADN Y
ARN.
https://r.search.yahoo.com/_ylt=AwrFEypt7AFlf7wLgWt7egx.;_ylu=Y29sbwNiZjEEcG9zAz
EEdnRpZAMEc2VjA3Ny/RV=2/RE=1694653677/RO=10/RU=https%3a%2f%2fwww.banco
adn.org%2fdocs%2fprograma-control-calidad-muestras.pdf/RK=2/RS=m.tBESh_rjNcXK6I_
5ZTJkXwGQU-
● Matlock, B., & Wilmington, D. E. UV-Vis chemometric analysis of azo dyes using NanoDrop
QC Software.
● Amaya, C. A. L., Jara, C. H. Q., & López, C. S. C. (2022). COMPARACIÓN DE TRES
PROTOCOLOS DE EXTRACCIÓN DE ADN EN Myliobatis peruvianus. REBIOL, 42(2),
194-198.
Anexos:
Uso de las micropipetas con la muestra de hongo 30 en el espectrofotómetro.