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Práctica 1: Tizones y manchas foliares bacterianas
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Departamento de Microbiología
Laboratorio de Fitopatología
Grupo: 9QV1 Equipo: 1 Sección: 1
Alumnos:
Gutierrez Ramírez Erick
Pérez Vargas Kimberly Jocelyn
Sánchez Munguía Paulina Janine
Vargas Mondragón Santiago
Profesores:
Luna Romero Isaac Juan
Vasquez Mendez Luis
Jardines Martinez Abigail
Chavez Ramirez Belén 1
Introducción
Necrosis contínuas de
rápido avance en diversos
órganos de una planta
causados por hongos o
bacterias
Tizón
Máculas de varios
tamaños, circulares o
irregulares sobre las
hojas de una planta.
Mancha foliar
Aquella mancha
producida por una
infección bacteriana
en hojas de cualquier
edad.
Mancha foliar
bacteriana
Los tizones
bacterianos están
asociados a toxinas
Reyna, R., et al., 2014
2
Fig 1. Progreso de manchas foliares.
Imagen tomada de: INTA, 2016.
↑ Manchas
↑ Defoliación
↓ Crecimiento
❖ Alto contenido de proteína.
❖ Alto contenido de ác. fólico, tiamina y
niacina.
❖ Contiene K, Fe, Mg y Zn
❖ Gran cantidad de carbohidratos
complejos, fibra y antioxidantes
3
Raíz: axonomorfa
Tallo: arbustivo de 5-12 nudos
Entrenudos: cortos de 2-5 cm
Hojas: compuestas (3 foliolos), ápice delgado
Inflorescencia: terminal
Vainas: 4-30 cm
Semillas: 2-9/vaina
(Gepts y Debouck, 1991)
(ASERCA, 2018)
(CEDRSSA, 2020)
Hospedero:
Phaseolus
vulgaris
(Frijol)
Fig 2. Morfología de Phaseolus vulgaris.
Fig 3. Producción de frijol por estados de la República Mexicana.
Hospedero:
Nicotiana
tabacum
(Tabaco)
4
Raíz: axonomorfa
Tallo: recto por pocas ramificaciones,
presencia de tricomas
Hojas: sésiles en la mayoría de cultivos
Inflorescencia: panícula terminal
Semillas: muy pequeñas y ovoides (Sanzón y Zavaleta, 2011)
Fig 5. Reacción de hipersensibilidad positiva.
Fig 4. Morfología de Nicotiana tabacum.
Agente:
Xanthomonas
axonopodis pv.
phaseoli
5
(CABI, 2019)
(Francisco Francisco et al., 2013)
(Trujillo et al., 2001)
Fig 6. Micrografía de Xanthomonas
axonopodis pv. phaseoli. B: bacteria. Imagen
modificada de: Trujillo et al., 2001.
Características:
❖ Bacilos Gram -, con un flagelo polar.
❖ Aerobios estrictos
❖ Temperatura óptima 28°C
❖ Pigmento amarillo (xanthomonadina).
Fig 7. Lesiones necróticas rodeadas de halo amarillo y lesiones hundidas de
color marron rojizo. Tomado de: CABI., 2019.
Lesiones características en planta de frijol
Prevención
❖ Uso de semillas libres
de enfermedad.
❖ Tratamiento de
semillas infectadas.
❖ Buenas prácticas de
cultivo
❖ Siembra de plantas de
frijol resistentes
Agente:
Pseudomonas
savastanoi pv.
phaseolicola
6
(CABI, 2021)
(Braun-Kiewnick y Sands, 2001)
(Arnold et al., 2011)
Fig 8. Micrografía de Pseudomonas savastanoi pv.
phaseolicola. Imagen modificada de: Agrios, 2005.
Características del fitopatógeno
❖ Bacilos Gram -, con un flagelo polar.
❖ Aerobios estrictos
❖ Temperatura óptima 25-30°C
❖ En medio de cultivo con bajo contenido de hierro
producen un pigmento fluorescente color verde
amarillento.
Lesiones características en planta de frijol
Prevención
❖ Uso de semillas libres de
enfermedad.
❖ Buenas prácticas de
cultivo
❖ Siembra de plantas de
frijol resistentes
Fig 9. Lesiones necróticas rodeadas de halo amarillo pálido y lesiones
hundidas de color marron rojizo. Tomado de: Agrios, 2005 y Arnold et al., 2011,
Objetivos
Aplicar los métodos de aislamiento para bacterias
fitopatógenas a partir de tejidos enfermos y practicar
las técnicas para su identificación.
1
Observar y describir las enfermedades que afectan al
tejido parenquimático así como los síntomas que se
expresan como “tizones” y manchas foliares.
2
Demostrar la patogenicidad de las cepas aisladas
mediante la inoclación en plantas de frijol.
3
Aprender a utilizar las plantas de tabaco, como un
modelo biológico que permite, en ciertos géneros,
establecer su capacidad patogénica.
4
7
Medio de cultivo B de King
8
● Polipeptona…………….… 20 g
● Glicerol………………………. 10 g (15 mL)
● K2HPO4 (anhídrico).. 1.5 g
● MgSO4
⠂7H2
O….……….. 1.5 g
● Agar……………………….……. 15 g
● Agua destilada………… 1000 mL
→pH 7.2
Fig 10. Colonias de Pseudomonas fluorescens
en medio de cultivo B de King. Tomada de:
Romero et al., 2019.
Fundamento
❖ Permite la detección de la síntesis de
pioverdina.
❖ Sulfato de magnesio aporta los cationes
necesarios para la producción de
pioverdina → verde fluorescente.
Godoy et al., 2019.
Diagrama de flujo
9
5 min
hipersensibilidad
Referencias
❏ Ivancovich, A. J., & Lavilla, M. (2016). Propuestas de escalas para la evaluación a campo y en laboratorio del
tizón foliar y la mancha púrpura de la semilla, causadas por Cercospora kikuchii en soja. EEA Pergamino,
INTA.
❏ Reyna, R., Pérez, C., & Pérez G., (2014). Reconocimiento a campo de plagas y enfermedades forestales.
Mancha foliar bacteriana. Universidad de la República Uruguay. Facultad de Agronomía Cartilla, (43), 1-2.
❏ Gepts P, D Debouck (1991) Origin, domestication and evolution of the common bean (Phaseolus vulgaris L.). In:
Common Beans. Research for Crop Improvement. A van Schoonhoven, O Voysest (eds). C.A.B. International.
pp:7–53.
❏ Agencia de Servicios a la Comercialización y Desarrollo de Mercados Agropecuarios. (2018). El frijol: alimento
nutritivo y básico en la dieta mexicana. Recuperado de https://www.gob.mx/aserca/.
❏ Centro de Estudios para el Desarrollo Rural Sustentable y la Soberanía Alimentaria. (2020). Mercado del frijol,
situación y prospectiva. Palacio Legislativo de San Lázaro. Recuperado de
http://www.cedrssa.gob.mx/files/b/13/53Mercado%20del%20frijol.pdf
❏ CABI. (2019). Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (bean blight). https://www.cabi.org/isc/datasheet/56962
❏ Romero, R. V., Villanueva, A. R., Raya, T. A., Baños, B. S. (2019). Quitosano y extractos de Pseudomonas
fluorescens para el control de Alternaria alternata en jitomate (Solanum lycopersicum). Revista Mexicana de
Fitopatología, Mexican Journal of Phytopathology. 37. 10.18781/R.MEX.FIT.1812-2.
❏ Francisco Francisco, N., Gallegos Morales, G., Ochoa Fuentes, Y. M., Hernández Castillo, F. D., Benavides
Mendoza, A., & Castillo Reyes, F. (2013). Aspectos Fundamentales del Tizón Común Bacteriano (Xanthomonas
axonopodis pv. phaseoli Smith): Características, Patogenicidad y Control. Revista mexicana de fitopatología,
31(2), 147-160.
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0185-33092013000200006&lng=es&tlng=es 10
❏ Trujillo, G., Centeno, F., Contreras, N., & Borges, O. (2001). Análisis ultraestructural de la interacción de
Xanthomonas axonopodis PV. phaseoli con genotipos resistentes, moderadamente resistentes y susceptibles de
Phaseolus vulgaris L. . Interciencia, 26(11), 554-557. https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=33906205
❏ CABI. (2021). Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola (halo blight (of beans)).
https://www.cabi.org/isc/datasheet/44987
❏ Braun-Kiewnick, A., & Sands, D. C. (2001). Gram Negative Bacteria: Pseudomonas. In N. W. Schaad, J. B. Jones, and
W. Chun (Eds.). Laboratory Guide for Identification of Plant Pathogenic Bacteria (3rd ed., pp. 84-91). APSPRESS
❏ Godoy Montiel, L. A. (2017). Análisis genético de la resistencia raza-específica a Pseudomonas syringae pv.
phaseolicola (Psp) y Xanthomonas campestris pv. phaseoli (Xcp) agentes causales de bacteriosis de halo y común
en Phaseolus vulgaris. pp. 13-14.
❏ Arnold, D. L., Lovell, H. C., Jackson, R. W., & Mansfield, J. W. (2011). Pseudomonas syringae pv. phaseolicola: from
'has bean' to supermodel. Molecular plant pathology, 12(7), 617–627.
https://doi.org/10.1111/j.1364-3703.2010.00697.x
❏ Agrios, G. N. (2005). Plant Pathology (5th ed.). pp. 618-631
❏ Sanzón Gómez, Diana, & Zavaleta Mejía, Emma. (2011). Respuesta de Hipersensibilidad, una Muerte Celular
Programada para Defenderse del Ataque por Fitopatógenos. Revista mexicana de fitopatología, 29(2), 154-164.
Recuperado en 29 de agosto de 2022, de
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0185-33092011000200007&lng=es&tlng=es.
Referencias
11
Ciclo biológico de Pseudomonas savastanoi pv phaseolicola
12
Semillas infectadas Brote infectado Planta sana
Planta infectada Dispersión (estomas o hidatodos) Tejido parenquimático Nueva vaina infectada
Tipos de raíces
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Tizones y manchas foliares bacterianas

  • 1. Práctica 1: Tizones y manchas foliares bacterianas INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Departamento de Microbiología Laboratorio de Fitopatología Grupo: 9QV1 Equipo: 1 Sección: 1 Alumnos: Gutierrez Ramírez Erick Pérez Vargas Kimberly Jocelyn Sánchez Munguía Paulina Janine Vargas Mondragón Santiago Profesores: Luna Romero Isaac Juan Vasquez Mendez Luis Jardines Martinez Abigail Chavez Ramirez Belén 1
  • 2. Introducción Necrosis contínuas de rápido avance en diversos órganos de una planta causados por hongos o bacterias Tizón Máculas de varios tamaños, circulares o irregulares sobre las hojas de una planta. Mancha foliar Aquella mancha producida por una infección bacteriana en hojas de cualquier edad. Mancha foliar bacteriana Los tizones bacterianos están asociados a toxinas Reyna, R., et al., 2014 2 Fig 1. Progreso de manchas foliares. Imagen tomada de: INTA, 2016. ↑ Manchas ↑ Defoliación ↓ Crecimiento
  • 3. ❖ Alto contenido de proteína. ❖ Alto contenido de ác. fólico, tiamina y niacina. ❖ Contiene K, Fe, Mg y Zn ❖ Gran cantidad de carbohidratos complejos, fibra y antioxidantes 3 Raíz: axonomorfa Tallo: arbustivo de 5-12 nudos Entrenudos: cortos de 2-5 cm Hojas: compuestas (3 foliolos), ápice delgado Inflorescencia: terminal Vainas: 4-30 cm Semillas: 2-9/vaina (Gepts y Debouck, 1991) (ASERCA, 2018) (CEDRSSA, 2020) Hospedero: Phaseolus vulgaris (Frijol) Fig 2. Morfología de Phaseolus vulgaris. Fig 3. Producción de frijol por estados de la República Mexicana.
  • 4. Hospedero: Nicotiana tabacum (Tabaco) 4 Raíz: axonomorfa Tallo: recto por pocas ramificaciones, presencia de tricomas Hojas: sésiles en la mayoría de cultivos Inflorescencia: panícula terminal Semillas: muy pequeñas y ovoides (Sanzón y Zavaleta, 2011) Fig 5. Reacción de hipersensibilidad positiva. Fig 4. Morfología de Nicotiana tabacum.
  • 5. Agente: Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli 5 (CABI, 2019) (Francisco Francisco et al., 2013) (Trujillo et al., 2001) Fig 6. Micrografía de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. B: bacteria. Imagen modificada de: Trujillo et al., 2001. Características: ❖ Bacilos Gram -, con un flagelo polar. ❖ Aerobios estrictos ❖ Temperatura óptima 28°C ❖ Pigmento amarillo (xanthomonadina). Fig 7. Lesiones necróticas rodeadas de halo amarillo y lesiones hundidas de color marron rojizo. Tomado de: CABI., 2019. Lesiones características en planta de frijol Prevención ❖ Uso de semillas libres de enfermedad. ❖ Tratamiento de semillas infectadas. ❖ Buenas prácticas de cultivo ❖ Siembra de plantas de frijol resistentes
  • 6. Agente: Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola 6 (CABI, 2021) (Braun-Kiewnick y Sands, 2001) (Arnold et al., 2011) Fig 8. Micrografía de Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola. Imagen modificada de: Agrios, 2005. Características del fitopatógeno ❖ Bacilos Gram -, con un flagelo polar. ❖ Aerobios estrictos ❖ Temperatura óptima 25-30°C ❖ En medio de cultivo con bajo contenido de hierro producen un pigmento fluorescente color verde amarillento. Lesiones características en planta de frijol Prevención ❖ Uso de semillas libres de enfermedad. ❖ Buenas prácticas de cultivo ❖ Siembra de plantas de frijol resistentes Fig 9. Lesiones necróticas rodeadas de halo amarillo pálido y lesiones hundidas de color marron rojizo. Tomado de: Agrios, 2005 y Arnold et al., 2011,
  • 7. Objetivos Aplicar los métodos de aislamiento para bacterias fitopatógenas a partir de tejidos enfermos y practicar las técnicas para su identificación. 1 Observar y describir las enfermedades que afectan al tejido parenquimático así como los síntomas que se expresan como “tizones” y manchas foliares. 2 Demostrar la patogenicidad de las cepas aisladas mediante la inoclación en plantas de frijol. 3 Aprender a utilizar las plantas de tabaco, como un modelo biológico que permite, en ciertos géneros, establecer su capacidad patogénica. 4 7
  • 8. Medio de cultivo B de King 8 ● Polipeptona…………….… 20 g ● Glicerol………………………. 10 g (15 mL) ● K2HPO4 (anhídrico).. 1.5 g ● MgSO4 ⠂7H2 O….……….. 1.5 g ● Agar……………………….……. 15 g ● Agua destilada………… 1000 mL →pH 7.2 Fig 10. Colonias de Pseudomonas fluorescens en medio de cultivo B de King. Tomada de: Romero et al., 2019. Fundamento ❖ Permite la detección de la síntesis de pioverdina. ❖ Sulfato de magnesio aporta los cationes necesarios para la producción de pioverdina → verde fluorescente. Godoy et al., 2019.
  • 9. Diagrama de flujo 9 5 min hipersensibilidad
  • 10. Referencias ❏ Ivancovich, A. J., & Lavilla, M. (2016). Propuestas de escalas para la evaluación a campo y en laboratorio del tizón foliar y la mancha púrpura de la semilla, causadas por Cercospora kikuchii en soja. EEA Pergamino, INTA. ❏ Reyna, R., Pérez, C., & Pérez G., (2014). Reconocimiento a campo de plagas y enfermedades forestales. Mancha foliar bacteriana. Universidad de la República Uruguay. Facultad de Agronomía Cartilla, (43), 1-2. ❏ Gepts P, D Debouck (1991) Origin, domestication and evolution of the common bean (Phaseolus vulgaris L.). In: Common Beans. Research for Crop Improvement. A van Schoonhoven, O Voysest (eds). C.A.B. International. pp:7–53. ❏ Agencia de Servicios a la Comercialización y Desarrollo de Mercados Agropecuarios. (2018). El frijol: alimento nutritivo y básico en la dieta mexicana. Recuperado de https://www.gob.mx/aserca/. ❏ Centro de Estudios para el Desarrollo Rural Sustentable y la Soberanía Alimentaria. (2020). Mercado del frijol, situación y prospectiva. Palacio Legislativo de San Lázaro. Recuperado de http://www.cedrssa.gob.mx/files/b/13/53Mercado%20del%20frijol.pdf ❏ CABI. (2019). Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (bean blight). https://www.cabi.org/isc/datasheet/56962 ❏ Romero, R. V., Villanueva, A. R., Raya, T. A., Baños, B. S. (2019). Quitosano y extractos de Pseudomonas fluorescens para el control de Alternaria alternata en jitomate (Solanum lycopersicum). Revista Mexicana de Fitopatología, Mexican Journal of Phytopathology. 37. 10.18781/R.MEX.FIT.1812-2. ❏ Francisco Francisco, N., Gallegos Morales, G., Ochoa Fuentes, Y. M., Hernández Castillo, F. D., Benavides Mendoza, A., & Castillo Reyes, F. (2013). Aspectos Fundamentales del Tizón Común Bacteriano (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli Smith): Características, Patogenicidad y Control. Revista mexicana de fitopatología, 31(2), 147-160. http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0185-33092013000200006&lng=es&tlng=es 10
  • 11. ❏ Trujillo, G., Centeno, F., Contreras, N., & Borges, O. (2001). Análisis ultraestructural de la interacción de Xanthomonas axonopodis PV. phaseoli con genotipos resistentes, moderadamente resistentes y susceptibles de Phaseolus vulgaris L. . Interciencia, 26(11), 554-557. https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=33906205 ❏ CABI. (2021). Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola (halo blight (of beans)). https://www.cabi.org/isc/datasheet/44987 ❏ Braun-Kiewnick, A., & Sands, D. C. (2001). Gram Negative Bacteria: Pseudomonas. In N. W. Schaad, J. B. Jones, and W. Chun (Eds.). Laboratory Guide for Identification of Plant Pathogenic Bacteria (3rd ed., pp. 84-91). APSPRESS ❏ Godoy Montiel, L. A. (2017). Análisis genético de la resistencia raza-específica a Pseudomonas syringae pv. phaseolicola (Psp) y Xanthomonas campestris pv. phaseoli (Xcp) agentes causales de bacteriosis de halo y común en Phaseolus vulgaris. pp. 13-14. ❏ Arnold, D. L., Lovell, H. C., Jackson, R. W., & Mansfield, J. W. (2011). Pseudomonas syringae pv. phaseolicola: from 'has bean' to supermodel. Molecular plant pathology, 12(7), 617–627. https://doi.org/10.1111/j.1364-3703.2010.00697.x ❏ Agrios, G. N. (2005). Plant Pathology (5th ed.). pp. 618-631 ❏ Sanzón Gómez, Diana, & Zavaleta Mejía, Emma. (2011). Respuesta de Hipersensibilidad, una Muerte Celular Programada para Defenderse del Ataque por Fitopatógenos. Revista mexicana de fitopatología, 29(2), 154-164. Recuperado en 29 de agosto de 2022, de http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0185-33092011000200007&lng=es&tlng=es. Referencias 11
  • 12. Ciclo biológico de Pseudomonas savastanoi pv phaseolicola 12 Semillas infectadas Brote infectado Planta sana Planta infectada Dispersión (estomas o hidatodos) Tejido parenquimático Nueva vaina infectada