Este documento describe los pasos para montar cortes de tejido en portaobjetos para su coloración. Inicialmente se extienden y aplanan los cortes usando glicero-albúmina y calor. Luego se escurren y se secan los portaobjetos. Se marcan para identificación y se elimina la parafina restante antes de la coloración. También cubre incidentes comunes como burbujas de aire y cortes que no se pegan, y explica cómo preparar la solución de glicero-albúmina usada para el montaje

1. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
UNIDAD DIDÁCTICA 15
MONTAJE DE LOS CORTES Y PREPARACIÓN PARA SU COLORACIÓN.
1.- INTRODUCCIÓN.
2.- LÍQUIDOS DE EXTENSIÓN Y ADHERENCIA.
3.- EXTENSIÓN.
4.- ESCURRIDO.
5.- SECADO.
6.- MARCADO DE PORTAOBJETOS.
7.- PREPARACIÓN DE MUESTRAS ANTES DE SU COLORACIÓN.
8.- INCIDENTES MÁS COMUNES EN EL MONTAJE.
9.- GLICERO—ALBUMINA. (Preparación de la misma.).
CFGS Anatomía Patológica y Citología 79

2. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
1.- INTRODUCCIÓN.
El montaje de los cortes sobre portaobjetos requiere tres operaciones distintas:
extendido, adherencia y secado de la preparación.
Los cortes aislados y de la tira son irregulares y finalmente plisados. Para ser utilizados se
debe, sin modificar los caracteres de sus elementos, aplanarlos, extenderlos y fijarlos
sobre una lamina de cristal (portaobjetos).
Los portaobjetos de cristal deben estar muy limpios y sobre todo completamente
desengrasados, siendo de esta manera perfectamente transparentes y uniformemente
mojables.
Si sobraran portaobjetos para una posterior utilización, se deberán guardar en tarros
llenos de agua destilada.
2.- LÍQUIDOS DE EXTENSIÓN Y ADHERENTES.
Estos líquidos deben ser a la vez eficaces y totalmente invisibles, o sea que deben adherir
solidamente el corte sobre el portaobjetos, sin alterar en absoluto la transparencia ni la
colorabilidad.
En la actualidad el más utilizado en la Glicerina-Albúmina o (Glicero-Albúmina de Hayer),
compuesto de albúmina de huevo filtrada y glicerina a partes iguales, más un poco de timol
para su conservación.
3.- EXTENSIÓN Y ADHERENCIA.
Los portaobjetos una vez secos, se les coloca una gota de glicero-albúmina que es
extendida sobre toda la superficie del mismo.
Los cortes, bien aislados o en tiras, se colocan dentro de una bañera de estiramiento,
previo paso por alcohol de 50º, que contiene agua caliente (45ºC). La tira o los cortes
aislados en contacto con el agua caliente se extienden desapareciendo completamente el
plisamiento.
Una vez ocurrido esto, se desliza por debajo de los cortes un portaobjetos limpio e
impregnado de glicero-albúmina, elevándolo ligeramente quedará extendida la muestra
sobre él, después de lo cual se eliminará el exceso de agua y glicero-albúmina.
En algunas preparaciones que contienen núcleos fibrosos o cartilaginosos, se extienden con
frecuencia incompletamente y dejan algunos pliegues que no se pueden eliminar.
CFGS Anatomía Patológica y Citología 80

3. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
4.- ESCURRIDO.
Inmediatamente después de la extensión, los portaobjetos son escurridos inclinándolos
progresivamente de un lado y del otro y dejándolo seguidamente, durante algún tiempo en
posición inclinada, en algunos casos incluso se recurrirá a secarlos entre hojas de papel
filtro.
5.- SECADO.
Una vez realizado el escurrido, procederemos a secar las preparaciones, depositando los
portaobjetos sobre una superficie calentada, que permita la evaporación de los restos de
agua y una perfecta adherencia de los cortes sobre el portaobjetos.
6.- MARCADO DE LOS PORTAOBJETOS.
Con el fin de evitar todo error, los cortes deben ser grabados con lápiz diamante o de
esmeril al finalizar el secado. Este marcado se efectúa sobre la cara que tiene el corte a
fin de identificar fácilmente esta cara por simple contacto durante las operaciones
ulteriores.
7.- PREPARACIÓN DE MUESTRAS ANTES DE SU COLORACIÓN.
Los cortes así tratados y adheridos sobre el portaobjetos permanecen envueltos por una
fina película de parafina que es preciso hacer desaparecer antes de toda decoloración.
La eliminación de esta fina película de parafina, la realizaremos de la siguiente manera:
a) Introduciendo primero los portaobjetos en una estufa a una temperatura superior
al punto de fusión de la parafina utilizada (65-75ºC), y colocando los portaobjetos
en posición inclinada para que desprenda la parafina sobrante. El tiempo de
permanencia en la estufa será de entre 15 a 30 minutos.
b) Sucesivos baños de Touleno o Xilol (4 baños de 7-10 minutos cada uno), seguidos de
sucesivos baños de alcohol (3 ó 4 baños de una duración de un paso cada uno),
teniendo que ser este alcohol de 100 y 80º, llegando finalmente a un baño de agua
de una duración de un paso para hidratar los cortes.
CFGS Anatomía Patológica y Citología 81

4. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
8.- INCIDENTES Y CONTRATIEMPOS MÁS COMUNES EN EL MONTAJE.
LOS CORTES NO SE PEGAN.
Ocurre como consecuencia de:
¾ Empleo de una cuchilla poco afilada.
¾ El agua de extensión es demasiado caliente y funde la parafina antes de que hayan
desaparecido los pliegues.
¾ El agua de la extensión es demasiado fría y no produce el reblandecimiento de la
película de parafina.
¾ La pieza es dura y fibrosa.
Solución:
¾ Rehacer los cortes y vigilar la temperatura del agua de extensión.
PRESENCIA DE BURBUJAS DE AIRE DEBAJO DE LOS CORTES.
Ocurre como consecuencia de:
¾ Los cortes están insuficientemente pegados.
¾ Aire procedentes del agua durante su calentamiento y retenido debajo de los
cortes durante su secado.
Solución:
¾ Aplanar bien los cortes antes de eliminar el líquido de la extensión.
LOS CORTES NO SE ADHIEREN O SE DESPEGAN RÁPIDAMENTE.
Ocurre como consecuencia de:
¾ Los portaobjetos están mal desengrasados.
¾ La parafina ha fundido durante la extensión.
¾ El corte ha sido mal aplanado.
Solución:
¾ Usar portaobjetos adecuadamente limpios y totalmente desengrasados.
¾ Si la parafina ha fundido durante la extensión, eliminar y rehacer nuevamente el
corte.
¾ Secar lo más rápidamente posible los portaobjetos después del escurrido.
¾ Colodionar los portaobjetos.
CFGS Anatomía Patológica y Citología 82

5. PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN
9.- GLICERO-ALBUNINA.
Se bate una clara de huevo hasta que este a punto de nieve, se deja reposar hasta que el
fondo se vuelva líquido y se mide.
Se coge 1/3 de glicerina y se mezcla con la albúmina resultante de la clara de huevo batida,
se le añaden unos cristales de Timol y se guarda en frigorífico para su posterior uso.
CANTIDADES:
La cantidad de liquido reposado (albúmina) después de batir las claras de huevo, se miden y
añadimos la glicerina (1/3 del total del liquido reposado) y también unos cristales de Timol,
(muy pocos), para su conservación es imprescindible guardarla en frigorífico.
CFGS Anatomía Patológica y Citología 83