informe de MAQUETA DE ELECTROFORESIS EN GE LDE AGAROSA

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE
MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL : INGENIERIA AMBIENTAL
CURSO : BIOTECNOLOGIA
CICLO : VII
TEMA : SISTEMA DE ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA
DOCENTE : Dr. HERBERT SOTO
ESTUDIANTE :
ALLER GONZALES GILBER
FECHA :
20/11/2020

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INTRODUCCION
La electroforesis es utilizada para demostrar la migración de una molécula, ya sea de proteínas o ácidos
nucleicos cargada bajo la influencia de un campo eléctrico. Los ácidos nucleicos son de las moléculas
más biológicamente importantes, estas poseen unos grupos ionizables que pueden ser cationes o
aniones. Estas partes cargadas son las que se van a separar dependiendo de su carga al momento de
aplicar un voltaje por medio de los electrodos. La electroforesis de ácidos nucleicos se lleva a cabo en
geles de agarosa y es considerada uno de los métodos más sencillos y eficientes para separar fragmentos
de ADN, el cual una de sus características es que tienen carga negativa gracias a su grupo fosfato y una
vez que es expuesto a un campo eléctrico y en una solución buffer, migrará hacia el lado positivo.
Después de realizada la electroforesis los resultados podrán observarse utilizando la fluorescencia. El
bromuro de etidio o el SYBR Safe son los colorantes más utilizados ya que se intercalan en la base de los
ácidos nucleicos y emiten fluorescencia. el uso de este compuesto debe ser manejado con mucho
cuidado y con el cumplimiento riguroso de los protocolos de bioseguridad de los laboratorios debido a
que se considera un agente altamente cancerígeno.
OBJETIVOS
Objetivo General:
• Simular el proceso de electroforesis en gel de agarosa
Obejtivos Especificos:
• Plasmar los elementos necesarios para el proceso de electroforesis
• Entender el proceso de electroforesis y su metodologia

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MARCO TEORICO
La electroforesis es una técnica que emplean los cientificos en el laboratorio utilizada para separar el
ADN, el ARN, o moléculas o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica. Se utiliza una corriente
eléctrica para mover las moléculas y que se separen a través de un gel. Los poros del gel actúan como
un colador, permitiendo que las moléculas más pequeñas se muevan más rápido que las grandes. Las
condiciones utilizadas durante la electroforesis se pueden ajustar para separar moléculas en el rango
de tamaño que se desee.
La electroforesis es una técnica que se utiliza de forma generalizada en la que, fundamentalmente, se
aplica corriente eléctrica a moléculas biológicas, ya sean ADN, proteínas o ARN..., y se separan en
función de si son más grandes o más pequeñas. Se utiliza en una gran variedad de aplicaciones... como
en medicina forense para determinar la identidad de las personas que puedan haber participado en un
delito, mediante la vinculación de su patrón de ADN -su patrón de electroforesis- a uno que esté en una
base de datos. El proyecto genoma humano se llevó a cabo con algo que se llama electroforesis capilar,
mediante la separación de ADN en piezas más cortas y su separacion en geles de electroforesis que
permite a los patrones de A, C, T y G ser caracterizados.
También son muy importantes en la investigación de proteínas, y en la investigación de mutaciones
genéticas, porque cuando las proteínas o el ADN están mutados, son con frecuencia más o menos largos,
y por lo tanto, aparecen en un gel de electroforesis de manera diferente de lo normal. Las pruebas de
diagnóstico para muchos casos todavía se realizan mediante electroforesis. Es una técnica muy utilizada
en la investigación básica, muy importante para la comprensión de la función de genes y proteínas, pero
ahora ha irrumpido en el área de diagnóstico clínico y forense.
Una electroforesis se realiza generalmente en una especie de caja que tiene una carga positiva en un
extremo y una carga negativa en el otro. Y como todos aprendimos en las clases de física, cuando se
pone una molécula cargada en un entorno así, las moléculas negativas van a la carga positiva, y
viceversa. Al analizar las proteínas en un gel, en una de estas cajas, por lo general se toma la proteína
completa para ver lo grande que es.

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Cuanto más corta, más migran en el gel, de modo que las proteínas pequeñas terminará en la parte
inferior del gel, porque han ido más lejos, y las más grandes terminarán quedándose en la parte
superior. En el caso del ADN, el ADN es una molécula muy larga, así que no se puede hacer un gel de
una molécula entera de ADN de una célula. Es tan grande que nunca se metería en el gel, así que lo que
hacen los científicos es cortar el ADN con cosas como las enzimas de restricción, que cortan el ADN en
pedazos más manejables, y entonces esas piezas, dependiendo de lo grande que sean, migran más o
menos por el gel y terminan más arriba o más abajo.
METODOLOGIA
Para iniciar esta práctica se realizó la preparación del gel de agarosa, mezclando 100 ml de solución TAE
(buffer) con 2 g de agarosa y se llevó a una estufa por 150 segundos, esta preparación fue dejada en
reposo hasta alcanzar unos 50° c y seguidamente se agregó 10 ml de SYBR safe a la preparación
Al finalizar este proceso la solución anterior se aplicó en la bandeja y allí se depositó el peine para la
formación de los posos. Se dejó solidificar durante 30 minutos y se retiró el peine.

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Ya en la cámara de electroforesis se agregó una cantidad considerable de solución TAE, y se depositó la
bandeja con el gel en ella, es importante aclarar que la solución TAE debe cubrir el gel. Ahora es cuando
se van a depositar las muestras de ADN, para esto se debe preparar la muestra agregando 5 µl de buffer
de carga para completar 15µl de muestra. En los pozos de las esquinas se agregaron 7 µc de marcador
de peso molecular Ladder y 15µl de la muestra de ADN se depositaron dejando un pozo por medio.
(Figura 3). Se cerró la cámara para conectar los polos eléctricos a una fuente de poder a 100 voltios, el
voltaje y amperaje debe ser constante. Durante 45 minutos.
Luego con fines de tinción el gel se llevo a una solución de bromuro de etidio, esto para facilitar la
lectura de los fragmentos de ADN.
tras 15 o 20 minutos de tinción es necesario iluminar el gel con luz ultravioleta para que el bromuro de
etidio emita fluorescencia y sea posible detectar los fragmentos de adn separados si la fuente de luz
ultravioleta lleva acoplado a una cámara fotográfica es posible ver la imagen en un monitor y grabarla
en algún soporte informático lo que facilita el análisis posterior de los resultados.

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Determinamos el tamaño de los fragmentos separados en el gel por comparación con un patrón de
tamaños conocidos podremos conocer el tamaño de los fragmentos de nuestra muestra ya que
fragmentos de un mismo tamaño migrarán a una misma distancia en el gel.
existen distintas técnicas que permiten la separación de fragmentos de adn pero para muchas de las
aplicaciones la separación en gel de agarosa es la más empleada sus principales ventajas son que es
rápida y sencilla y que permite determinar mediante tinción con bajas concentraciones de colorante el
tamaño de los fragmentos separados.

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En la práctica de laboratorio simulada en la presente maqueta se realizó la electroforesis de un ADN
bacteriano. La electroforesis es una técnica de separación de moléculas en una mezcla por aplicación
de un campo eléctrico1 en gel de agarosa este “es un polisacárido extraído de un alga marina; se
disuelve con un amortiguador caliente, se vierte en un molde y se gelatiniza con el simple descenso de
temperatura”. en el gel de agarosa tenemos 12 pozos de los cuales solo se utilizaron 6, los pozos
número 3, 5, 7, 9 que contienen 10µl de ADN bacteriano con 5µl de TAE, “El buffer TAE (tris-acetato-
EDTA) es usado principalmente para electroforesis de agarosa debido a que permite una amplia
resolución del peso molecular de DNA”3 . los pozos de las esquinas contienen 7 µl de marcador de
peso molecular (Ladder) que funcionan como un patrón para comparar el resultado de los pares de
base de la muestra, “contiene 11 fragmentos de ADN desde 100 a 1,500 pares de bases.
Este marcador es ideal para la determinación del tamaño de fragmentos de ADN”4 . Las sustancias
que se encontraban en los pozos migraron luego de aplicarle fuerza eléctrica, la muestra migra hacia
el lado positivo de la cámara debido a los grupos fosfatos que le dan una carga negativa al ADN
haciendo que migre hacia el ánodo de la cámara. La concentración de la agarosa es de 2% “La
resolución y velocidad de separación de fragmentos de ADN por electroforesis son reguladas a través
de la concentración de agarosa (o acrilamida) en el gel y el voltaje aplicado durante la electroforesis”5
debido a esto las moléculas con menor tamaño migran con mayor rapidez hacia el polo positivo de la
cámara, y al aumentar la concentración de agarosa (poro pequeño)es más difícil el movimiento a
través del gel de esta manera se pueden identificar los fragmentos con bajo peso molecular.
Y gracias al bromuro de etidio que sirve como colorante se puede visualizar y comparar con el
marcador de peso molecular al colocar en el transluminador. Como se puede observar en la (figura 6)
el poso numero 6 contiene ADN con mayor cantidad de pares de bases debido a que a este poso se le
aplico mayor cantidad de ADN, sin embargo, todos los pozos contienen la misma cantidad de pares de
bases que es de aproximadamente 900 pares de bases, “Cuando se extrae el DNA plasmídico de las
bacterias, obtenemos algo que consideramos un producto purificado, pero habitualmente habrá
moléculas de plásmido en dos o tres conformaciones, formas topológicamente diferentes. Conocidas
como superenrollada, relajada y lineal de longitud completa, corresponden a la misma molécula y
tienen todas el mismo número de pares de bases (o “longitud” de la molécula), pero tienen diferente
forma, por lo que ocupan un volumen efectivo diferente y avanzan por el gel a distinta velocidad”6 .
El ADN superenrollado viaja más rápido por el gel de agarosa que el ADN relajada y lineal de longitud
completa. se observan las bandas anchas y difusas esto se debe a la baja cantidad de voltaje que se le
aplico y hay poca migración de la muestra de ADN. No se puede realizar la correcta lectura de la
electroforesis debido a que el patrón de peso molecular Ladder se ve muy difuso y no se pueden
definir la cantidad de pares de bases por consiguiente tampoco se puede hacer en cada una de las
muestras de ADN.

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CONCLUSIONES
La electroforesis en gel de agarosa es una de las técnicas más adecuadas para la visualización del ADN
ya que además de ser de fácil preparación, los colorantes como el SYBR Safe permiten su observación
al someterse a luz fluorescente. Una preparación no inadecuada del gel de agarosa hace que la
resolución de las bandas obtenidas sea más difícil de observar y analizar. El volumen de ADN y de
buffer de carga debe ser exacto (15µl) si esto no ocurre la práctica no podrá realizarse con éxito ya
que impedirá una adecuada observación de los resultados finales
BIBLIOGRAFIA
1. Lodish Harvey, Berk Arnold, Matsudaira Paul, Kaiser Chris, Monty Krieger, Scott
Matthew, Zipursky Lawrence, Darnell James.Biologia Celular y Molecular, 5ª edición,
editorial médica panamericana,2005.
2. Karp Gerald. Biologia celular y molecular conceptos y experimentos, 7a edición,
editorial Mc Graw Hill education, 2002.
3.https://www.velaquin.com.mx/products/buffers-para-electroforesis?
variant=37791147777
4. http://www.tnt-lab.com.ar/productos_ladders.htm
5. https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-
technology/dnasequencing-pcr-electrophoresis/a/gel-electrophoresis
6. http://biomodel.uah.es/an/plasmido/2/1-topo.htm