1. Nombre: Nancy Pulido Soler
Email Personal: nanhary81@yahoo.es
Estudiante Especialización En Biotecnología Agraria: UNAD - CEAD TUNJA
Profesión: Lic. En ciencias Naturales y Educación ambiental. UPTC
BIOTECNOLOGIA APORTES TRABAJO COLABORATIVO
RESUMEN
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es considerada una técnica
biotecnológica cuya finalidad es la amplificación o reproducción in vitro de un
número de copias de una región específica de ADN, en este caso bacteriano, para
su respectiva evaluación. Que cobra gran valor e importancia debido a sus
aplicaciones .
SUMMARY
Chain reaction (PCR) is considered a biotechnological technique whose purpose is
the in vitro amplification or reproduction of a number of copies of a specific region
of DNA, in this case bacterial for its evaluation. That is of great value and
importance due to their applications.
INTRODUCCION
Los ribosomas son las estructuras celulares encargadas de la síntesis de
proteínas y en su composición se encuentran tanto proteínas como distintas
moléculas de ARN conocidas como ARN ribosómico (rARN) se distinguen por su
tamaño que se traduce en diferentes velocidades de sedimentación cuando se
ultracentrifugan. Así, los ribosomas de procariotas contienen tres rARN,
denominados 5S, 16S 7 23S, mientras que los de eucariota poseen cuatro rARN
diferentes Los ribosomas son las estructuras celulares encargadas de la síntesis
de proteínas y en su composición. Así, los ribosomas de procariotas contienen tres
rARN, denominados 5S, 16S 7 23S, mientras que los de eucariota poseen cuatro
rARN diferentes.
Actualmente se está utilizando una herramienta biotecnológica de gran
importancia. PCR, que es una técnica de biología molecular descrita y
desarrollada en 1986 por Kary Mullis, cuando trabajaba en la compañía CETUS.
Cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN y

2. ADNc (ADN complementario) particular, partiendo de un mínimo de ADN; en teoría
basta partir de una única copia de ese fragmento original o molde.
JUSTIFICACION
Debido a la técnica PCR es de gran utilidad en una variedad de campos, incluidas
la biología molecular, la biotecnología, la genética, la epidemiología, las ciencias
forestales, las ciencias forenses, la microbiología, el diagnóstico de enfermedades
infecciosas, diagnóstico de virus, parásitos, bacterias de difícil cultivo.
Es importante que sé que se apliquen dichas técnicas y a que ofrece un
diagnóstico confiable y rápido.
MARCO TEORICO
LA TECNICA DE PCR
Hacer una aproximación a la molécula 16S del ARN ribosomal, implica remontarse
un poco en el próximo pasado en que el trabajo científico realizado por Carl
Woese Richard, permitió establecer claras diferencias estructurales de los
organismos procariotas. El dominio Eukarya agrupa, según esta clasificación a los
restantes reinos de organismos eucariotas.
El dominio Eucarya se caracteriza por tener células eucariotas, los lípidos de sus
membranas celulares son, predominantemente, diésteres de acilos grasos de
glicerol y sus ribosomas contienen rARN de tipo eucariota. El dominio Bacteria,
además de células procariotas, tiene membranas con lípidos del tipo diésteres de
glicerol y ribosomas con rARN de tipo bacteriano, mientras que las Arqueas se
diferencian de las bacterias tanto en el tipo de rARN de sus ribosomas como en
los lípidos de sus membranas, principalmente diésteres de glicerol isoprenoide o
tetraéteres de diglicerol, (Margulis, 2002).
Los trabajos de Woese se basaron en la comparación de algunas propiedades
estructurales de los rARN 16S y 18S que forman parte de la subunidad pequeña
de los ribosomas en organismos procariotas y eucariotas respectivamente; luego
su trabajo se amplió con el análisis de la secuencia de nucleótidos de los genes
que los codifican.
El ARNr 16S es la macromolécula más ampliamente utilizada en estudios de
filogenia y taxonomía bacterianas especialmente; este ARN 16S se encuentra en
todos los organismos, desde las bacterias hasta los humanos y su estabilidad
estructural y bioquímica a o largo de los milenios ha permitido determinaciones
precisas de las distancias filigenéticas entre diversos microorganismos
comparados. La comparación de las secuencias del gen 16S rRNA permite la
diferenciación entre organismos a nivel de género en todos los phyla principales

3. de bacterias, además de clasificar las cepas en múltiples niveles, incluyendo lo
que hoy se conoce como especie y el nivel de subespecie. El gen rARN 16S se
puede comparar no solo entre las bacterias, sino también con el gen de rARN 16S
de arqueobacterias y el gen de rARN 18S de eucariotas. Así, se tiene que la
precisión de los análisis depende fuertemente de la elección de los cebadores,
conocidos también como primers que son promotores híbridos en que la
polimerasa se une a una secuencia del promotor que normalmente está delante de
la secuencia que especifica el ARN; el primer nucleótido que está en el ARN
(incluyendo el promotor) es el +1 y todas las bases se toman desde ese punto de
referencia, delante – detrás +. El resto del promotor no se transcribe. Se diseñó un
promotor artificial combinando la región 35 del promotor Trp y la -10 del promotor
Lac, al cual se le dio el nombre de promotor Tac, este promotor resultó ser 5 veces
más potente que el Trp y 10 veces más que el de Lac; con el advenimiento de
tecnologías de secuenciación masiva en paralelo, la secuenciación directa de los
amplicones de PCR se hizo factible; una primera tecnología de alto rendimiento de
secuenciación fue aplicado con éxito para el análisis a gran escala de la
biodiversidad y fue clave para el descubrimiento de la “biósfera rara”. El uso de
primers subóptimos, o precisamente pares de iniciadores, pueden llevar a una
representación o de la selección frente a especies individuales o incluso grupos
enteros a conclusiones biológicas dudosas (Kildworth, 2012).
La secuencia de los oligonucleótidos que servirán de cebadores es uno de los
parámetros importantes a considerar en el diseño de una reacción de PCR, dada
la alta sensibilidad de la técnica de la PCR, ésta es muy susceptible de
contaminación con ADN exógeno que pueda ser amplificado, éste puede provenir
de ADN generado en amplificaciones previas por PCR, incorrecta manipulación de
las muestras, reactivos contaminados con ADN, etc, es recomendable siempre
incluir una reacción sin ADN como control negativo. Entre las precauciones a
seguir, a fin de evitar contaminación se puede separar las áreas de preparación de
las muestras (pre PCR) y de análisis de los productos de la reacción (post PCR),
esterilizar todas las soluciones y el material utilizado (Maldonado, 1996).

4. Práctica de laboratorio PCR realizada en la materia de biología molecular
laboratorio UNAD 2013:

5. Fig 3. Se observa en esta figura la secuencia del gen de electroforesis, en las seis
bandas utilizadas en este trabajo; de izquierda a derecha, las secuencias 1, 3, 4 y
6 de acuerdo con la descripción de los resultados obtenidos corrieron como se
esperaba; la secuencia 2 no corrió como se esperaba y la secuencia 5 no
evidenció presencia alguna.

6. Fig 4.

7. Fig.6
Fig 5.
Fig 7.
VIDEOS REALCIONADOS CON LA TECNICA DE PCR
1. ¿Qué es un PCR?
Contenido del video:
Que es el PCR.
Etapas.
Utilidad.
Enlace:
http://www.youtube.com/watch?feature=endscreen&v=o51jyCH_4fU&NR=1
http://www.youtube.com/watch?v=DZ7uNG9dy0E
2. APLICACIONES DE LA TECNICA DE PCR
Contenido del video:

8. Biotecnología actual aplicaciones agrícolas y ganaderas
http://www.youtube.com/watch?v=pn76dqS3Csc
En microbiología:
3. GENETICA Y PCR
Enlace:
http://www.youtube.com/watch?v=DZ7uNG9dy0E
CONCLUSIONES
La técnica PCR es de gran utilidad en una variedad de campos, incluidas la
biología molecular, la biotecnología, la genética, la epidemiología, las
ciencias forestales, las ciencias forenses, la microbiología, el diagnóstico de
enfermedades infecciosas, diagnóstico de virus, parásitos, bacterias de
difícil cultivo
.
Es significativo que sé que se apliquen dicha técnicas y a que ofrece un
diagnóstico confiable y rápido.
Es importe tener en cuenta que cuando se valla a utilizar PCR la secuencia
de oligonucleótidos que se usará como cebador es uno de los parámetros
más importantes debido a su alta sensibilidad y a que puede ser muy
susceptible a contaminarse , por eso es importante tener un ADN de control
negativo para controlar esta variable, se deben separar las áreas de las
muestras pre PCR ,los productos de la reacción post PCR ,las soluciones y
esterilizar los materiales.
BIBLIOGRAFIA
SECUENCIAS DE ADN RIBOSOMAL 16S EN MUESTRAS BACTERIANAS
UTILIZANDO LA TÉCNICA DE PCR. Riaño Rojas Laura María, Quintero
Ruiz Ludy Marcela, Pulido Soler Nancy, Fonseca Millán Arnulfo, Ríos Ortiz
Héctor Fabio. Universidad Nacional Abierta y a Distancia. UNAD. Escuela
de Ciencias Agrícolas Pecuarias y del Medio Ambiente EMCAPA.

9. MALDONADO, Eneida. Biología Molecular en Medicina. Ed: Limusa, S.A.
de CV. México D.F. 1996.
KLINDWORTH, Anna., PRUESSE, Elmer., SCHWERR, Timmy., PEPLIES,
Cristian., HORN, Mathias., GLOCKNER, Frank O. Evaluación de los Genes
16S Ribosomal RNA Genes Primers de PCR para Estudios de Diversidad
Clásicos y de Nueva Generación Basada en la Secuenciación. Oxford
Journals. Nucleic Acids Research. 31/10/2012