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Práctica de laboratorio PCR realizada en la materia de biología molecularlaboratorio UNAD 2013:
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Biotecnología actual aplicaciones agrícolas y ganaderashttp://www.youtube.com/watch?v=pn76dqS3CscEn microbiología:3. GENET...
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Práctica de laboratorio pcr

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Práctica de laboratorio pcr

  1. 1. Nombre: Nancy Pulido SolerEmail Personal: nanhary81@yahoo.esEstudiante Especialización En Biotecnología Agraria: UNAD - CEAD TUNJAProfesión: Lic. En ciencias Naturales y Educación ambiental. UPTCBIOTECNOLOGIA APORTES TRABAJO COLABORATIVORESUMENLa reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es considerada una técnicabiotecnológica cuya finalidad es la amplificación o reproducción in vitro de unnúmero de copias de una región específica de ADN, en este caso bacteriano, parasu respectiva evaluación. Que cobra gran valor e importancia debido a susaplicaciones .SUMMARYChain reaction (PCR) is considered a biotechnological technique whose purpose isthe in vitro amplification or reproduction of a number of copies of a specific regionof DNA, in this case bacterial for its evaluation. That is of great value andimportance due to their applications.INTRODUCCIONLos ribosomas son las estructuras celulares encargadas de la síntesis deproteínas y en su composición se encuentran tanto proteínas como distintasmoléculas de ARN conocidas como ARN ribosómico (rARN) se distinguen por sutamaño que se traduce en diferentes velocidades de sedimentación cuando seultracentrifugan. Así, los ribosomas de procariotas contienen tres rARN,denominados 5S, 16S 7 23S, mientras que los de eucariota poseen cuatro rARNdiferentes Los ribosomas son las estructuras celulares encargadas de la síntesisde proteínas y en su composición. Así, los ribosomas de procariotas contienen tresrARN, denominados 5S, 16S 7 23S, mientras que los de eucariota poseen cuatrorARN diferentes.Actualmente se está utilizando una herramienta biotecnológica de granimportancia. PCR, que es una técnica de biología molecular descrita ydesarrollada en 1986 por Kary Mullis, cuando trabajaba en la compañía CETUS.Cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN y
  2. 2. ADNc (ADN complementario) particular, partiendo de un mínimo de ADN; en teoríabasta partir de una única copia de ese fragmento original o molde.JUSTIFICACIONDebido a la técnica PCR es de gran utilidad en una variedad de campos, incluidasla biología molecular, la biotecnología, la genética, la epidemiología, las cienciasforestales, las ciencias forenses, la microbiología, el diagnóstico de enfermedadesinfecciosas, diagnóstico de virus, parásitos, bacterias de difícil cultivo.Es importante que sé que se apliquen dichas técnicas y a que ofrece undiagnóstico confiable y rápido.MARCO TEORICOLA TECNICA DE PCRHacer una aproximación a la molécula 16S del ARN ribosomal, implica remontarseun poco en el próximo pasado en que el trabajo científico realizado por CarlWoese Richard, permitió establecer claras diferencias estructurales de losorganismos procariotas. El dominio Eukarya agrupa, según esta clasificación a losrestantes reinos de organismos eucariotas.El dominio Eucarya se caracteriza por tener células eucariotas, los lípidos de susmembranas celulares son, predominantemente, diésteres de acilos grasos deglicerol y sus ribosomas contienen rARN de tipo eucariota. El dominio Bacteria,además de células procariotas, tiene membranas con lípidos del tipo diésteres deglicerol y ribosomas con rARN de tipo bacteriano, mientras que las Arqueas sediferencian de las bacterias tanto en el tipo de rARN de sus ribosomas como enlos lípidos de sus membranas, principalmente diésteres de glicerol isoprenoide otetraéteres de diglicerol, (Margulis, 2002).Los trabajos de Woese se basaron en la comparación de algunas propiedadesestructurales de los rARN 16S y 18S que forman parte de la subunidad pequeñade los ribosomas en organismos procariotas y eucariotas respectivamente; luegosu trabajo se amplió con el análisis de la secuencia de nucleótidos de los genesque los codifican.El ARNr 16S es la macromolécula más ampliamente utilizada en estudios defilogenia y taxonomía bacterianas especialmente; este ARN 16S se encuentra entodos los organismos, desde las bacterias hasta los humanos y su estabilidadestructural y bioquímica a o largo de los milenios ha permitido determinacionesprecisas de las distancias filigenéticas entre diversos microorganismoscomparados. La comparación de las secuencias del gen 16S rRNA permite ladiferenciación entre organismos a nivel de género en todos los phyla principales
  3. 3. de bacterias, además de clasificar las cepas en múltiples niveles, incluyendo loque hoy se conoce como especie y el nivel de subespecie. El gen rARN 16S sepuede comparar no solo entre las bacterias, sino también con el gen de rARN 16Sde arqueobacterias y el gen de rARN 18S de eucariotas. Así, se tiene que laprecisión de los análisis depende fuertemente de la elección de los cebadores,conocidos también como primers que son promotores híbridos en que lapolimerasa se une a una secuencia del promotor que normalmente está delante dela secuencia que especifica el ARN; el primer nucleótido que está en el ARN(incluyendo el promotor) es el +1 y todas las bases se toman desde ese punto dereferencia, delante – detrás +. El resto del promotor no se transcribe. Se diseñó unpromotor artificial combinando la región 35 del promotor Trp y la -10 del promotorLac, al cual se le dio el nombre de promotor Tac, este promotor resultó ser 5 vecesmás potente que el Trp y 10 veces más que el de Lac; con el advenimiento detecnologías de secuenciación masiva en paralelo, la secuenciación directa de losamplicones de PCR se hizo factible; una primera tecnología de alto rendimiento desecuenciación fue aplicado con éxito para el análisis a gran escala de labiodiversidad y fue clave para el descubrimiento de la “biósfera rara”. El uso deprimers subóptimos, o precisamente pares de iniciadores, pueden llevar a unarepresentación o de la selección frente a especies individuales o incluso gruposenteros a conclusiones biológicas dudosas (Kildworth, 2012).La secuencia de los oligonucleótidos que servirán de cebadores es uno de losparámetros importantes a considerar en el diseño de una reacción de PCR, dadala alta sensibilidad de la técnica de la PCR, ésta es muy susceptible decontaminación con ADN exógeno que pueda ser amplificado, éste puede provenirde ADN generado en amplificaciones previas por PCR, incorrecta manipulación delas muestras, reactivos contaminados con ADN, etc, es recomendable siempreincluir una reacción sin ADN como control negativo. Entre las precauciones aseguir, a fin de evitar contaminación se puede separar las áreas de preparación delas muestras (pre PCR) y de análisis de los productos de la reacción (post PCR),esterilizar todas las soluciones y el material utilizado (Maldonado, 1996).
  4. 4. Práctica de laboratorio PCR realizada en la materia de biología molecularlaboratorio UNAD 2013:
  5. 5. Fig 3. Se observa en esta figura la secuencia del gen de electroforesis, en las seisbandas utilizadas en este trabajo; de izquierda a derecha, las secuencias 1, 3, 4 y6 de acuerdo con la descripción de los resultados obtenidos corrieron como seesperaba; la secuencia 2 no corrió como se esperaba y la secuencia 5 noevidenció presencia alguna.
  6. 6. Fig 4.
  7. 7. Fig.6Fig 5.Fig 7.VIDEOS REALCIONADOS CON LA TECNICA DE PCR1. ¿Qué es un PCR?Contenido del video:Que es el PCR.Etapas.Utilidad.Enlace:http://www.youtube.com/watch?feature=endscreen&v=o51jyCH_4fU&NR=1http://www.youtube.com/watch?v=DZ7uNG9dy0E2. APLICACIONES DE LA TECNICA DE PCRContenido del video:
  8. 8. Biotecnología actual aplicaciones agrícolas y ganaderashttp://www.youtube.com/watch?v=pn76dqS3CscEn microbiología:3. GENETICA Y PCREnlace:http://www.youtube.com/watch?v=DZ7uNG9dy0ECONCLUSIONESLa técnica PCR es de gran utilidad en una variedad de campos, incluidas labiología molecular, la biotecnología, la genética, la epidemiología, lasciencias forestales, las ciencias forenses, la microbiología, el diagnóstico deenfermedades infecciosas, diagnóstico de virus, parásitos, bacterias dedifícil cultivo.Es significativo que sé que se apliquen dicha técnicas y a que ofrece undiagnóstico confiable y rápido.Es importe tener en cuenta que cuando se valla a utilizar PCR la secuenciade oligonucleótidos que se usará como cebador es uno de los parámetrosmás importantes debido a su alta sensibilidad y a que puede ser muysusceptible a contaminarse , por eso es importante tener un ADN de controlnegativo para controlar esta variable, se deben separar las áreas de lasmuestras pre PCR ,los productos de la reacción post PCR ,las soluciones yesterilizar los materiales.BIBLIOGRAFIASECUENCIAS DE ADN RIBOSOMAL 16S EN MUESTRAS BACTERIANASUTILIZANDO LA TÉCNICA DE PCR. Riaño Rojas Laura María, QuinteroRuiz Ludy Marcela, Pulido Soler Nancy, Fonseca Millán Arnulfo, Ríos OrtizHéctor Fabio. Universidad Nacional Abierta y a Distancia. UNAD. Escuelade Ciencias Agrícolas Pecuarias y del Medio Ambiente EMCAPA.
  9. 9. MALDONADO, Eneida. Biología Molecular en Medicina. Ed: Limusa, S.A.de CV. México D.F. 1996.KLINDWORTH, Anna., PRUESSE, Elmer., SCHWERR, Timmy., PEPLIES,Cristian., HORN, Mathias., GLOCKNER, Frank O. Evaluación de los Genes16S Ribosomal RNA Genes Primers de PCR para Estudios de DiversidadClásicos y de Nueva Generación Basada en la Secuenciación. OxfordJournals. Nucleic Acids Research. 31/10/2012

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