SELECCIÓN DE LA MUESTRA Y MUESTREO EN INVESTIGACIÓN CUALITATIVA.pdf
Microscopio m icrobiologia i
1. UNIVERSIDAD TECINA DE COTOPAXI
UA-CAREN
MEDICINA VETERINARIA
Nombre:
Enrique Almeida
Curso:
3ero Ciclo
Fecha:
17 de Abril del 2014
Docente:
Dr. Edwin Pino
Tema:
Tipos de Microscopios
2. Microbiología.
Antecedentes....................................................................................................................... 3
Microscopio. ....................................................................................................................... 4
Tipos de Microscopio. .................................................................................................... 4
El microscopio óptico. .................................................................................................... 4
• Microscopio vertical................................................................................................. 4
• Microscopio invertido............................................................................................... 4
• Microscopio estereoscópico...................................................................................... 5
• Microscopio quirúrgico. ........................................................................................... 5
• Microscopios fotónicos especiales. .......................................................................... 6
El microscopio óptico de contraste de fases. .............................................................. 6
El microscopio óptico de campo oscuro. .................................................................... 6
El microscopio óptico de fluorescencia. ..................................................................... 7
El microscopio electrónico. ............................................................................................ 7
El microscopio electrónico explorador. ...................................................................... 8
Bibliografía. ................................................................................................................ 8
3. Antecedentes.
El microscopio se inventó, hacia 1610, por Galileo, según los italianos, o por
Jensen, en opinión de los holandeses. La palabra microscopio fue utilizada por
primera vez por los componentes de la "Accademia dei Lincei" una sociedad
científica a la que pertenecía Galileo y que publicaron un trabajo sobre la
observación microscópica del aspecto de una abeja.
Sin embargo las primeras publicaciones importantes en el campo de la
microscopia aparecen en 1660 y 1665 cuando Malpighi prueba la teoría de Harvey
sobre la circulación sanguínea al observar al microscopio los capilares sanguíneos
y Hooke publica su obra Micrographia.
A mediados del siglo XVII un comerciante holandés, Leenwenhoek, utilizando
microscopios simples de fabricación propia describió por primera vez protozoos,
bacterias, espermatozoides y glóbulos rojos.
Durante el siglo XVIII el microscopio sufrió diversos adelantos mecánicos que
aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron
mejoras ópticas. Las mejoras más importantes de la óptica surgieron en 1877
cuando Abbe publica su teoría del microscopio y por encargo de Carl Zeiss
mejora la microscopía de inmersión sustituyendo el agua por aceite de cedro lo
que permite obtener aumentos de 2000A principios de los años 30 se había
alcanzado el limite teórico para los microscopios ópticos no consiguiendo estos,
aumentos superiores a 500X o 1000X sin embargo existía un deseo científico de
observar los detalles de estructuras celulares ( núcleo, mitocondria... etc.).
El microscopio electrónico de transmisión (T.E.M.) fue el primer tipo de
microscopio electrónico desarrollado este utiliza un haz de electrones en lugar de
luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000 X. Fue
desarrollada por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente,
en 1942 se desarrolla el microscopio electrónico de barrido
4. Microscopio.
El microscopio es un instrumento esencial de la investigación en microbiología.
Las unidades de medición empleadas aquí son la micra o micrómetro, el
nanómetro y el angstrom.
Tipos de Microscopio.
Existen diversas clases de microscopios, según la conformación, la naturaleza de
los sistemas de luz y otros elementos utilizados para obtener las imágenes.
El microscopio óptico.
Puede ser monocular, binocular, trinocular. En los microscopios binoculares la
observación se hace con los dos ojos y esto permite una observación más cómoda
y se percibe una mayor nitidez de los detalles en la imagen. Se fabrican en
diferentes tamaños incluyendo microscopios pequeños portátiles o de viaje.
Dentro de los tipos de microscopios se describen:
• Microscopio vertical.
Es el microscopio convencional, perfeccionado a partir de los modelos antiguos,
que posee la fuente de luz ubicada en la base, por debajo de la platina. Es el
microscopio de uso más común.
• Microscopio invertido.
La estructura del microscopio es invertida en comparación al microscopio
convencional. La fuente de luz está ubicada por encima de la platina y el principio
de funcionamiento y formación de la imagen es el mismo que el del microscopio
tradicional. Utilizado principalmente para cultivos celulares (células vivas) sin
una preparación previa y para monitorear actividades (crecimiento,
comportamiento)
5. • Microscopio estereoscópico.
Este tipo de microscopio proporciona una imagen estereoscópica, en tres dimensiones
(3D) del espécimen. Se fundamenta en la visión binocular convencional, en la que los dos
ojos observan el espécimen con ángulos levemente distintos. El microscopio
estereoscópico debe ser binocular. Se utiliza para observar especímenes de gran tamaño,
sin corte o preparación previa puesto que emplea luz incidente y no funciona por trans-
iluminación. Es ideal para realizar micro disección
• Microscopio quirúrgico.
Es un microscopio que se emplea en microcirugía. Proporciona un campo muy bien
iluminado y un aumento de las estructuras anatómicas, facilitándole al cirujano una
mayor visibilidad de los tejidos sanos y patológicos que serán manipulados más
cuidadosamente y con menores posibilidades de lesión. Algunos modelos más
sofisticados tienen piezas automatizadas robóticas. Se utiliza principalmente en
intervenciones quirúrgicas en las que se amerite una minuciosa disección, como por
ejemplo del cráneo y cerebro o del globo ocular
6. • Microscopios fotónicos especiales.
Ciertos especímenes, principalmente las células vivas o muestras no coloreadas, al ser
observados en el microscopio común de campo claro, muestran un muy pobre contraste
de sus estructuras y no aportan datos relevantes, a pesar del poder de resolución de los
objetivos empleados. Para ello se han creado microscopios con ciertas particularidades
que permiten la observación de ese tipo de especímenes con un incremento muy
satisfactorio del contraste
El microscopio óptico de contraste de fases.
El microscopio de contraste de fases hace posible ver fácilmente pequeñas células,
incluso sin teñir. Las células tienen un índice de refracción distinto de su alrededor y esta
diferencia puede utilizar separa crear una imagen de mucho mayor contraste que la que
puede obtenerse con el microscopio óptico normal.
En este microscopio la fuente de luz es un cono hueco de luz que pasa a través de un
diafragma anular al condensador. En el objetivo un anillo de contraste de fases desplaza
la fase de luz que lo atraviesa en un cuarto de longitud de onda. La luz que pasa retardada
atraviesa el anillo y el ojo la ve como luz blanca normal. La luz que pasa a través de una
muestra con índice de refracción diferente del índice del medio es retardada y tiene un
recorrido más largo, llegando al ocular fuera de fase.
El microscopio óptico de campo oscuro.
El microscopio de campo oscuro es un microscopio óptico ordinario cuyo sistema
condensador ha sido modificado para dirigir la luz a la preparación desde los lados de tal
modo que sólo la luz difractada por la preparación pasa al ocular y se hace visible. A
causa de esta disposición la muestra aparece iluminada sobre un fondo oscuro. La
microscopia de campo oscuro ha posible la observación en estado vivo de partículas y
7. células que de otra manera estarían por debajo de los límites de resolución del
microscopio óptico, aunque resulten visibles pocos detalles estructurales.
El microscopio óptico de fluorescencia.
Se utiliza para poner de manifiesto muestras que tienen fluorescencia, bien a causa de la
presencia en su interior de sustancias materiales fluorescentes o que han sido tratadas con
colorantes fluorescentes. La fluorescencia es la propiedad que tienen muchas sustancias
químicas de emitir luz de un color después de excitarlas con luz de otro color. En el
microscopio de fluorescencia la luz de excitación es eliminada con un filtro colocado
entre el objetivo y el ocular, de modo que sólo se ve la luz emitida.
El microscopio electrónico.
Para estudiar la estructura interna de los microorganismos es esencial el uso del
microscopio electrónico. En este microscopio se utilizan electrones en vez de rayos de
luz, y como lentes funcionan unos electroimanes. Todo el sistema opera en el vacío.
Cuando los electrones pasan a través de la preparación algunos son difractados creando
entonces una imagen que se hace visible en una pantalla sensible a los electrones. La
resolución obtenida con el microscopio electrónico es mucho mayor que la conseguida
con el microscopio óptico. Mientras que con estructuras más pequeñas que pueden
observarse tienen unos 0’2 µm, con el microscopio electrónico pueden verse fácilmente
objetos de 0’001 µm (= 1 nm = 10-9 m). Con el microscopio electrónico es posible ver
muchas sustancias incluso de tamaño molecular. Sin embargo, a causa de la naturaleza de
este instrumento sólo pueden examinarse objetos muy delgados. Si se está interesado en
ver estructuras internas, incluso una sola bacteria es demasiado gruesa para ser observada
directamente. Por consiguiente, para preparar muestras para el microscopio electrónico se
necesitan técnicas especiales de cortes ultra finos. Para seccionar las células primero
deben ser fijadas y deshidratadas, realizándose habitualmente esto último transfiriendo las
células a un disolvente orgánico. Después de la deshidratación la muestra es incluida en
plástico y en este plástico se cortan secciones finas utilizando un ultra micrótomo, por lo
general equipado con una cuchilla de diamante. Una sola célula bacteriana, por ejemplo,
puede cortarse en cinco o seis secciones muy finas, que son examinadas después
individualmente con el microscopio electrónico. Para obtener suficiente contraste, las
preparaciones se tratan con colorantes especiales de la microscopia electrónica, tales
como ácido ósmico, permanganato, uranio, lantano o plomo. Estos materiales están
compuestos por átomos de elevado peso molecular y, por ello, dispersan bien los
electrones. Las estructuras celulares teñidas con uno de esos materiales presentan un
contraste muy aumentado y, por tanto, se ven mejor.
8. El microscopio electrónico explorador.
Otro instrumento reciente para examinar las estructuras superficiales es el microscopio
electrónico explorador (“scanning electron microscope”). El material que se estudia es
recubierto con una película fina de un metal pesado tal como el oro. El rayo de electrones
es dirigido sobre la preparación y la va recorriendo y explorando por todas la superficie.
Los electrones dispersados por el metal pesado activan una pantalla de observación
produciendo una imagen. Con el microscopio electrónico explorador pueden observarse
incluso muestras muy grandes, siendo muy buena la profundidad de campo. El aumento
que puede obtenerse oscila entre uno tan bajo como x15 y uno tan alto como x100000,
pero sólo puede observarse la superficie de un objeto.
Bibliografía.
http://www.tiposde.org/ciencias-exactas/27-tipos de
microscopios/#ixzz2iwBc4Z7m
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/ca
pitulo4_8.htm
http://personales.mundivia.es/mggalvez/micro2.htm