Este documento evalúa si el polimorfismo -308G/A del gen TNF-α confiere susceptibilidad a desarrollar tuberculosis pulmonar en la población venezolana. Se estudiaron 87 individuos venezolanos divididos en pacientes con tuberculosis pulmonar (n=52) y controles sanos (n=35). No se encontraron diferencias estadísticamente significativas en la distribución de genotipos y alelos entre los dos grupos, lo que sugiere que esta variante genética no confiere susceptibilidad a la tuberculosis en la población

1. RESUMEN ABSTRACT
Introduction: El Factor de Necrosis Tumoral á desempeña un
importante papel inmunoregulador en el control de la
infección por M. tuberculosis y el polimorfismo del gen que
lo codifica puede estar implicado en la susceptibilidad a la
tuberculosis (TB). Estudios poblacionales han demostrado
que la variante -308G/A del gen TNF- puede conferir
susceptibilidad a esta enfermedad. Objetivo: Evaluar si el
polimorfismo -308G/A del gen TNF- confiere susceptibilidad
a desarrollar TB en la población venezolana. Métodos: Se
incluyeron 87 individuos venezolanos, no relacionados,
quienes se clasificaron en dos grupos: pacientes con TB
Pulmonar (n=52) e individuos sanos (n=35). Se extrajo una
muestra de sangre periférica y posteriormente el ADN de los
leucocitos periféricos. Se amplificó la región del gen TNF-
que incluye el polimorfismo mediante PCR-SSP, utilizando
un estuche comercial. Las frecuencias genotípicas y alélicas
fueron determinadas mediante conteo directo. A los
Genotipos se les aplicó diferencias de proporciones y a los
Alelos la prueba de chi-cuadrado de Pearson y resultados
con valores de p <0.05 fueron considerados
estadísticamente significativos. Resultados: En ambos
grupos observamos la presencia de los tres genotipos,
presentando el genotipo silvestre G/G la mayor frecuencia y
el genotipo homocigoto A/A la menor frecuencia. Sin
embargo, no se observaron diferencias estadísticamente
significativas en la distribución de genotipos y alelos entre
pacientes y controles (p > 0.05). Conclusiones: La
distribución de los genotipos y alelos de la variante -308G/A
del gen TNF- es similar entre los pacientes con TB e
individuos sanos expuestos al M. tuberculosis, sugiriendo
que esta variante no confiere susceptibilidad al desarrollo de
TB en la población venezolana.
Palabras clave: Factor de Necrosis Tumoral, Población
venezolana, Polimorfismos, Tuberculosis pulmonar
Introduction: Tumor Necrosis Factor á (TNF-á) plays an
important immunoregulatory role in controlling the
infection by M. tuberculosis and polymorphism of the gene
encoding it may be involved in susceptibility to tuberculosis
(TB). Population studies have shown that the variant -
308G/A TNF- gene may confer susceptibility to this disease.
Objectives: To investigate the association of -308G/A TNF-
gene polymorphisms and tuberculosis susceptibility in
Venezuelan population. Methods: Genomic DNA from the
peripheral blood leukocytes were obtained from 87
unrelated Venezuelan subjects (Pulmonary TB=52, healthy
controls = 35). The region of the IFNã gene polymorphisms
was amplified by PCR-SSP, using a commercial kit. The allele
and genotype frequencies were determined by direct
counting, the differences between groups with the
Pearson`s chi-scuare test.
Results: The -308 G/G genotype were more frequent in both
groups; the comparison of the allele and genotype
frequencies for the polymorphisms investigated revealed no
significant differences between the tuberculosis patients
and controls (p > 0.05)
Conclusions: None the genotypes and alleles of variant -
308G/A TNF- gene showed significant association with
tuberculosis susceptibility in the study population
Keywords: Pulmonary Tuberculosis, Polymorphisms, Tumor
necrosis factor á, Venezuelan population
Polimorfismo -308G/A del gen TNF-
y susceptibilidad a la tuberculosis
pulmonar en pacientes Venezolanos:
Estudio preliminar
a a, b b
Zhenia M. Fuentes-Alcalá , Angel R. Villasmil-Colina , Violeta Ogando ,
a b
Lisseloth Garrido-Mata , Mercedes Fernandez-Mestre
a
Servicio de Neumología, Hospital Dr. José Ignacio Baldó, Caracas,Venezuela
b
Sección Inmunogenética, Laboratorio de Fisiopatología,
Centro de Medicina Experimental, Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas
*Autor para correspondencia.
Correo electrónico: mfernand@ivic.gob.ve (Mercedes Fernández).
Fax: 58-212-5041086
Año 4. No 7. enero- junio 2013 17 - 22 17

2. 18
La amenaza que representa la tuberculosis (TB)
para la salud pública mundial ha incrementado la
necesidad de establecer nuevas estrategias para
su prevención y tratamiento (1). Por ello, las
investigaciones han sido enfocadas en la
interrelación hospedador-patógeno, sobre todo
por el hecho de que en ausencia de
inmunosupresión manifiesta y pese a la alta
prevalencia de TB, la especie humana es
generalmente inmune a esta enfermedad, pues
sólo un porcentaje cercano al 10% de las
personas expuestas al Mycobacterium
tuberculosis desarrollan manifestaciones clínicas,
con crecientes evidencias de que factores
genéticos del hospedero influyen en el desenlace
de esta exposición (2).
Haldane, en los años 50, propuso que el
mantenimiento de múltiples genes que confieren
al hospedero susceptibilidades relativas a las
enfermedades infecciosas, podría verse
favorecida por la evolución (3). Dando soporte a
esta hipótesis, ciertas poblaciones podrían tener
una susceptibilidad incrementada a la infección y
a la progresión clínica de enfermedades causadas
por micobacterias. Estudios casos-controles han
identificado asociaciones entre el desarrollo de la
enfermedad tuberculosa y algunos genes
involucrados en la respuesta inmune a
Mycobacterium tuberculosis (4-7).
El papel de las citoquinas en la inmunidad celular
desarrollada en contra del Mycobacterium
tuberculosis está bien establecido (8) y la
influencia de los polimorfismos genéticos (SNP)
en la eficiencia de esta respuesta está siendo
ampliamente investigada. El Factor de Necrosis
Tumoral (TNF-) es una citoquina que juega
múltiples papeles en la respuesta inmune y
patológica en la TB; Mycobacterium tuberculosis
induce la secreción de TNF- por parte del
macrófago, células dendríticas y linfocitos T, y es
de gran importancia para limitar la infección y
p r e v e n i r l a d i s e m i n a c i ó n d e e s t e
microorganismo; participando específicamente
en la formación del granuloma y como principal
factor en la destrucción del tejido pulmonar
mediada por el hospedero.(8-10)
La controversia generada ante los resultados de
los estudios realizados en diferentes grupos
étnicos (11-21) ha despertado el interés por
conocer si la asociación de estos polimorfismos
con la resistencia y/o susceptibilidad a la
tuberculosis está también presente en nuestra
población; el objetivo de la presente
investigación fue evaluar el papel del SNP -
308G/A del gen TNF- y susceptibilidad a
desarrollar TB pulmonar en población
venezolana.
INTRODUCCIÓN
MATERIAL Y MÉTODOS
Se incluyeron 87 individuos venezolanos de
tercera generación (padres y abuelos
venezolanos), no relacionados, mayores de 18
años, sin consideración de sexo, los cuales se
agruparon en:
Grupo 1 (Pacientes con tuberculosis pulmonar):
individuos con diagnóstico clínico de tuberculosis
pulmonar, diagnosticados en el Servicio de
Neumología del Hospital José Ignacio Baldó del
Algodonal. (Consulta externa y hospitalización.
Grupo 2 (Controles): individuos sanos sele-
ccionados del personal del Servicio de
Neumología del Hospital José Ignacio Baldó del
Algodonal (paramédicos y médicos), quienes han
trabajado por más de 10 años en el servicio
expuestos a la infección (prueba de tuberculina o
PPD positiva) y sin ningún tipo de manifestación
clínica de la enfermedad al momento de la toma
de muestra de sangre. En ambos grupos se
excluyeron aquellos individuos con
enfermedades (diabetes, cáncer, SIDA,
nefropatías) y condiciones asociadas (embarazo,
alcoholismo o drogadicción). Previo a la
recolección de las muestras del grupo de
pacientes y controles, se les solicitó la firma de un
consentimiento informado aprobado por los
Comités de Bioética del IVIC y del Hospital José
Ignacio Baldó del Algodonal de Caracas.
Año 4. No 7. enero- junio 2013Polimorfismo -308G/A del gen TNF-...

3. Criterios para el diagnóstico de TB
Los pacientes fueron seleccionados de acuerdo a
los criterios diagnósticos de la Norma Nacional
Venezolana del Programa Nacional Integrado de
Control de la Tuberculosis vigente, con exámenes
de dos Baciloscopias (BK) positivo, síntomas
clínicos de TB y radiografías de tórax consistente
con enfermedad activa (22,23) .
Prueba de tuberculina en piel (PTP)
La prueba intradérmica de tuberculina (PT) fue
realizada utilizando 1 Unidad de Tuberculina (0,1
ml) de Derivado Proteico Purificado (PPD) RT23 y
las induraciones se midieron después 48 horas.
Una medida >10 mm se consideró como positiva.
Genotipificación de la variante -308G/A del gen
TNF-
El ADN genómico fue extraído de las células
blancas de sangre periférica siguiendo el
protocolo descrito por Bunce (24). La
genotipificación de la variante -308G/A del gen
TNF- se realizó a través de la reacción en cadena
de polimerasa con iniciadores de secuencia
específica (PCR-SSP), utilizando el estuche
Cytokine Genotyping Tray (One Lambda, Inc.
Canoga Park, CA). Los productos amplificados
fueron verificados en geles de agarosa al 2.5%
Análisis Estadístico
Las frecuencias genotípicas y alélicas fueron
determinadas mediante conteo directo. A los
Genotipos se les aplicó diferencias de
proporciones y a los Alelos la prueba de chi-
cuadrado de Pearson. Resultados con valores de
p <0.05 fueron considerados estadísticamente
significativos.
tabla 1 se muestra la frecuencia de los genotipos -
308G/A del gen TNF- en individuos sanos y
pacientes. En ambos grupos observamos la
presencia de los tres genotipos posibles, (A/A,
A/G, G/G), presentando el genotipo homocigoto
salvaje G/G la mayor frecuencia (73.08% en
pacientes y 82.86% en individuos sanos) y el
homocigoto mutado A/A la menor frecuencia. En
los pacientes y en controles la frecuencia alélica
más baja correspondió al alelo A y la más alta al
alelo G. Sin embargo, al comparar las frecuencias
alélicas y genotípicas entre pacientes y controles,
no se encontraron diferencias significativas
(p>0.05).
19
DISCUSIÓN
La contribución del TNF-á a la patogénesis de la
tuberculosis, está ampliamente demostrada;
cumple un importante rol en la formación y
mantenimiento de granulomas (25) , así como
también en la defensa del huésped a M.
tuberculosis por su acción sinérgica con el
interferón-ã (IFN-ã) para activar los macrófagos
permitiendo la perpetuación de la enfermedad
(26,27). Investigaciones previas han demostrado
que los ratones deficientes en TNF-á exhiben una
mala formación de granulomas con áreas de
extensa necrosis, lo que ocasiona una amplia
diseminación de M. tuberculosis y la rápida
muerte de los animales (28). Los primeros datos
obtenidos de los pacientes con artritis
reumatoide y que fueron tratados con
Antagonistas de TNF-á mostraron que el
bloqueo de esta citoquina podía conducir a la
reactivación de la tuberculosis (29). Todo esto
conlleva a proponer al gen del TNF-á como un
candidato a estudiar en la susceptibilidad o
resistencia a la enfermedad tuberculosa.
La región promotora del gen de TNF-a es
altamente polimórfica. En 1992, se descubrió un
polimorfismo genómico en la posición -308
dentro de una región reguladora del locus del
TNF-á (rs1800629 G / A) (30). En 2001, Selvaraj
y colaboradores (11) demostraron una asociación
entre polimorfismos del TNF-308 y riesgo a TB;
posteriormente, otros investigadores han tratado
de implicar a los polimorfismos en TNF en la
RESULTADOS
El análisis realizado permitió establecer las
frecuencias alélicas y genotípicas de la variante
polimórfica del gen -308G/A del gen TNF- en
ambos grupos. Para investigar la posible
influencia del polimorfismo -308G/A del gen
TNF- en la tuberculosis pulmonar, se realizaron
comparaciones de las frecuencias genotípicas
entre los pacientes y los individuos sanos. En la
Año 4. No 7. enero- junio 2013 Polimorfismo -308G/A del gen TNF-...

4. 20
patogénesis de la TB –y los resultados han sido
inconsistentes. –
En nuestra serie de pacientes, la distribución de
genotipos y alelos del polimorfismo TNF- -
308G/A fue similar a la encontrada en controles
sanos, presentando el genotipo homocigoto
+874 G/G y el alelo G la mayor frecuencia en
ambos grupos estudiados; estas diferencias no
fueron estadísticamente significativas, en
concordancia a lo descrito por Selvaraj (11),
Kumar (12) y Sharma (13) en la India y por Wu
(14), Oh (15), Vejbaesya (16) y Ates (17), en
población China, Coreana, Tailandesa y Turca.
Estudios realizados en población Americana por
Larcombe (18) en Canada y por Henao y
colaboradores (19) en Colombia, tampoco
demostraron asociación del polimorfismo TNF- -
308G/A con susceptibilidad a TB pulmonar a
diferencia de Amirzargar (20) en población Iraní y
Correa (21) en población Colombiana quienes si
encontraron asociaciones positivas. Metanálisis
que incluyeron un importante número de
estudios (31-33) concluyeron que este
polimorfismo no se asoció con la susceptibilidad a
la tuberculosis en la población total.
Estas diferencias en los resultados de los estudios
realizados en distintos países pueden ser
atribuidas a variaciones étnicas que persisten en
diferentes poblaciones, a los diseños de los
estudios y a los criterios de selección de
pacientes. La principal limitación de esta
investigación es el tamaño de la muestra, que
consideramos debe ser ampliada, sin embargo,
nuestros hallazgos pueden ser explicados por el
mestizaje étnico existente en la población
venezolana, enfatizando que las poblaciones que
viven en el Continente Americano son altamente
mestizas debido a las migraciones continuas de
poblaciones del mismo continente y de otros
continentes (34,35).
En conclusión, nuestros resultados sugieren que
la variante -308G/A del gen TNF- no confiere
susceptibilidad al desarrollo de TB pulmonar en la
población venezolana.
Agradecimiento
Nuestra gratitud a los paciente, al personal del
Servicio de Neumología del Hospital José Ignacio
Baldó del Algodonal y de la Coordinación
Nacional de Salud Respiratoria .
Conflicto de intereses
Los autores declaran no tener ningún conflicto de
intereses.
REFERENCIAS
Caminero JA. Guía de la Tuberculosis para
Médicos Especialistas. 1ra ed. Paris:
UICTER; 2003.
Smith I, Nathan C, Ana P. Progress and New
Directions in Genetics of Tuberculosis. An
NHLBI Workin Group Report. Am J Respir
Crit Care Med 2005; 172: 1491-1496.
Maliarik MJ, Iannuzzi MC. Host genetic
factors in resistance and susceptibility to
tuberculosis infection and disease. Semin
Respir Crit Care Med. 2003; 24(2):223-
228.
Haldane JBS. Disease and evolution. Ricerca
Scientifica Supplement 1949; 19: 68–76.
Li H-T, Zhang T-T, Zhou Y-Q, Huang Q-H,
Huang J. SLC11A1 (formerly NRAMP1)
gene polymorphisms and tuberculosis
susceptibility: a meta-analisis. Int J Tuberc
Lung Dis 2006; 10(1): 3-12.
Lewis SJ, Baker I, Davey Smith G. Meta-
analysis of vitamin D receptor
p o l y m o r p h i s m s a n d p u l m o n a r y
tuberculosis risk. Int J Tuberc Lung Dis
2005; 9(10): 1174-1177.
Delgado JC, Baena A, Thim S, Goldfeld AE.
Ethnic-specific genetic associations with
pulmonary tuberculosis. J Infect Dis 2002;
186:1463–1468.
1
2
3
4
5
6
7
Año 4. No 7. enero- junio 2013Polimorfismo -308G/A del gen TNF-...

5. Vejbaesya S, Chierakul N, Luangtrakool P,
Sermduangprateep C. NRAMP1 and TNF-
alpha polymorphisms and susceptibility to
tuberculosis in Thais. Respirology.
2007;12:202–206
Ates O, Musellim B, Ongen G, Topal-
Sarikaya A. Interleukin-10 and tumor
necrosis factor-alpha gene polymorphisms
in tuberculosis. J Clin Immunol. 2008;
28:232–236
Larcombe LA, Orr PH, Lodge AM, Brown JS,
Dembinski IJ, Milligan LC et al. Functional
gene polymorphisms in canadian aboriginal
populations with high rates of tuberculosis.
J Infect Dis. 2008; 198:1175–1179.
Henao MI, Montes C, Paris SC, Garcia LF.
Cytokine gene polymorphisms in
Colombian patients with different clinical
presentations of tuberculosis. Tuberculosis
(Edinb) 2006; 86:11–19.
Amirzargar AA, Rezaei N, Jabbari H, Danesh
AA, Khosravi F, Hajabdolbaghi M, et al.
Cytokine single nucleotide polymorphisms
in Iranian patients with pulmonary
tuberculosis. Eur Cytokine Netw.
2006;17:84–89.
Correa PA, Gomez LM, Anaya JM.
P o l y m o r p h i s m o f T N F - a l p h a i n
autoimmunity and tuberculosis. Biomedica.
2004; 24(Supp 1):43–51.
Norma del Programa Nacional Integrado de
Control de la Tuberculosis. MSDS. 2005.
González A, García JR, Lobo O.
Tuberculosis. 2da ed. Caracas: DISINLIMED;
2002.
Bunce M. PCR-SSP typing. In: Lidwell JL,
Navarrette C, eds. Histocompatibility
testing. London: Imperial College Press;
2000. p. 167-176.
Bellamy R. Genetic susceptibility to
tuberculosis. Clin Chest Med. 2005; 26(2):
233-246.
Raja A. Immunology of Tuberculosis. Indian
J Med Res, 2004; 120: 212-232.
Blanchard DK, Michelini-Norris MB,
Friedman H, Djeu JY. Lysis of mycobacteria-
infected monocytes by IL-2 activated killer
cells: role of LFA-1. Cell Immunol 1989;
119: 402-411.
Selvaraj P, Sriram U, Mathan Kurian S,
Reetha AM, Narayanan PR. Tumour
necrosis factor alpha (- 238 and - 308) and
beta gene polymorphisms in pulmonary
tuberculosis: haplotype analysis with HLA-
A, B and DR genes. Tuberculosis
(Edinb)2001; 81(5–6):335–341
Kumar V, Khosla R, Gupta V, Sarin BC,
Sehajpal PK. Differential association of
tumour necrosis factor-alpha single
nucleotide polymorphism (-308) with
tuberculosis and bronchial asthma. Natl
Med J India. 2008;21:120–122.
Sharma S, Ghosh B, Sharma SK. Association
of TNF polymorphisms with sarcoidosis, its
prognosis and tumour necrosis factor (TNF)-
alpha levels in Asian Indians. Clin Exp
Immunol. 2008; 151: 251–259.
Wu F, Qu Y, Tang Y, Cao D, Sun P, Xia Z.
Lack of association between cytokine gene
polymorphisms and silicosis and pulmonary
tuberculosis in Chinese iron miners. J Occup
Health. 2008; 50: 445–454.
Oh JH, Yang CS, Noh YK, Kweon YM, Jung
SS, Son JW, Kong SJ, et al. Polymorphisms
of interleukin-10 and tumour necrosis
factor-alpha genes are associated with
newly diagnosed and recurrent pulmonary
tuberculosis. Respirology. 2007; 12:
594–598.
168
9
10
11
12
13
14
15
17
18
19
20
21
22
23
24
21Año 4. No 7. enero- junio 2013 Polimorfismo -308G/A del gen TNF-...

6. 22
Wang Q, Zhan P, Qiu L, Quian Q, Yu L. TNF-
308 gene polymorphism and tuberculosis
susceptibility: a meta-analysis involving 18
studies. Molecular Biology Reports 2012;
39: 3393-3400
Zhu H, Zhang Z, Lei X, Feng J, Zhang F,
Wang Y. Tumor necrosis factor alpha -
308G>A, - 863C>A, - 857C>T gene
polymorphisms and tuberculosis
susceptibility: A meta-analysis. Gene 2012;
509:206-214.
Makhatadze NJ, Franco MT, Layrisse, Z. HLA
Class I and Class II Allele and Haplotype
Distribution in the Venezuelan Population.
Hum Immunol. 1997; 55:53-58
Cao K, Hollenbach J, Shie X, Shi W, Chopek
M, Fernández-Viña A. Analysis of the
Frequencies of HLA-A, B and C Alleles and
Haplotypes in the Five Major Ethnic Groups
of the United States reveals Hihg Levels of
Diversity in These Loci and Contrasting
Distribution Patterns in These Populations.
Hum Immunol. 2001; 62:1009-1030
Flynn JL, Chan J. Immunology of
tuberculosis. Annu Rev Immunol. 2001;19:
93–129.
Berner MD, Sura ME, Alves BN, Hunter KW
Jr. IFN-gamma primes macrophages for
enhanced TNF-alpha expression in response
to stimulatory and non-stimulatory
amounts of microparticulate beta-glucan.
Immunol Lett. 2005;98:115–122
Mohan VP, Scanga CA, Yu K, Scott HM,
Tanaka KE, Tsang E, et al. Effects of tumor
necrosis factor alpha on host immune
response in chronic persistent tuberculosis:
possible role for limiting pathology. Infect
Immun. 2001;69:1847–1855.
Bean AG, Roach DR, Briscoe H, France MP,
Korner H, Sedgwick JD, et al. Structural
deficiencies in granuloma formation in TNF
gene-targeted mice underlie the
heightened susceptibility to aerosol
Mycobacterium tuberculosis infection,
which is not compensated for by
lymphotoxin. J Immunol. 1999;
162:3504–3511.
Gómez-Reino JJ, Carmona L, Valverde VR,
Mola EM, Montero MD. Treatment of
rheumatoid arthritis with tumor necrosis
factor inhibitors may predispose to
significant increase in tuberculosis risk: a
multicenter active-surveillance report.
Arthritis Rheum. 2003; 48:2122–2127.
Wilson AG, di Giovine FS, Blakemore AI.
Single base polymorphism in the human
TNFa gene detectable by Nco1 restriction of
PCR product. Hum Mol Genet 1:353
Pacheco AG, Cardoso CC, Moraes MO.
IFNG +874T/A, IL10 - 1082G/A and TNF
- 308G/A polymorphisms in association
with tuberculosis susceptibility: a meta-
analysis study. Hum Genet 2008; 123:
477–484
3225
26
27
28
29
30
31
33
34
35
Año 4. No 7. enero- junio 2013Polimorfismo -308G/A del gen TNF-...