1. Características Diferenciales
de Identificación
Mlgo. Eric Rodriguez

2.  Es posible efectuar una identificación
preliminar de Enterobacteriaceae
sobre la base de las características de
las colonias y reacciones químicas en
medios de aislamiento primario.

3.  Para una mayor identificación de
especie requiere la determinación de
otras características fenotípicas que
reflejan el código genético e
identidad única del microorganismo
en estudio.

4.  Las pruebas más ampliamente usadas
para evaluar aquellas características
metabólicas por las que identifican a
las Enterobacteriaceae, excepto unas
pocas especies raras o atípicas.

5.  ONPG(ortonitrofenilgalactosidasa)
 ProduccióndeIndol
 RojodeMetilo
 PruebadeVP(p.deacetilmetilcarbinol)
 UtilizacióndeCitrato
 ProduccióndeUreasa
 Descarboxilacióndelisina, ornitinay
arginina
 ProduccióndeFenilalaninadeaminasa
 ProducciónH2S
 Motilidad

7. Producción de Indol
 El indol es un compuesto que se genera
mediante la desaminación reductiva
del triptófano.
 Esta reacción es llevada a cabo por algunas
bacterias que poseen la enzima triptofanasas,
produciendo Indol, ácido pirúvico y amoniaco
(NH3)

8.  El indol puede detectarse en un medio de
prueba con triptófano, observando la
aparición del color rojo al adicionar el
reactivo de Ehrlich o Kovac que contiene
p-dimetilaminobenzaldehido
 Siendo el reactivo más sensible el de
Ehrlich y preferible cuando se evalúa
bacilos no fermentadores o anaerobios

9.  Medios con Triptófano
 Caldo con triptófano
 Agar sulfuro indol motilidad
(SIM)
 Agar ornitina indol motilidad
(MIO)
P-dimetilaminobenzaldehido

10.  Caldo con Triptófano
 Reacción Indol
positivo

11. SIM
SH2+ Ind+
Mot+
SH2+ Ind-
Mot-
SH2- Ind+
Mot+
SH2- Ind-
Mot-

13. Determinar habilidad de las
bacterias para producir ácidos
estables por fermentación de la
glucosa.
ROJO DE METILO

14. FUNDAMENTO
 Una de las pruebas bioquimicas que se
utilizan para identificar los diferentes
géneros de enterobacterias lo constituyen
el tipo y la proporción de productos de
fermentación que se originan por la
fermentación de la glucosa.
 Las enterobacterias son anaerobios
facultativos que utilizarán la glucosa en dos
fases: primero la metabolizarán
aeróbicamente (respiración oxidativa)
consumiendo rápidamente el oxígeno del
medio, para, en segundo lugar, continuar
metabolizándola por vía anaerobia
(fermentación).

15.  Esta diferencia en el metabolismo
bacteriano podría ser reconocida por
la adición de un indicador como rojo
de metilo, para revelar la presencia
de productos ácidos,
 y por la adición de Alfa-Naftol e
Hidróxido de Potasio para evidenciar
la presencia de productos finales
neutros.

16.  Fermentación ácido mixta:
La realizan las bacterias del grupo de
E.coli y los productos finales son
ácidos orgánicos (ácidos fórmico,
acético, láctico y succínico) que
provocan un fuerte descenso del pH
inicial del medio.
Puede detectarse por el viraje del
indicador de rojo de metilo que
permanece amarillo por encima de pH
5,1 y rojo por debajo de 4,4.

17.  El rojo de metilo es un indicador de
pH. Por lo tanto, permite
determinar la formación de ácidos
que se producen durante la
fermentación de un carbohidrato.
 Una reacción positiva indica que el
microorganismo realiza una
fermentación de la glucosa por la
vía ácido-mixta.

19. MEDIOS DE CULTIVO
El Medio es el Caldo RMVP o Caldo de Clark y Lubs.
Disuelva los ingredientes en agua destilada y
esterilice en autoclave por 15 minutos a 121°C a
15 libras de presión.
Solución indicadora de Rojo de Metilo:
Se prepara disolviendo 0.1 gr de este indicador
en 300 ml de Etanol al 95% y diluyendo luego
con agua hasta 500 ml.

20. Inocule con el asa de platino transfiriendo una
porción de cultivo puro. Incube a 37°C por 24 a 48
hrs.
Incubar a 35°C durante 48 horas.
Finalizado el tiempo de incubación transfiera 5ml de
cultivo a un tubo
Agregar 5 gotas del reactivo de rojo de metilo a uno
de los tubos y al otro añadir los Reactivos A y B
(0,6ml del KOH y 0,2ml del Alfa-Naftol).

21. INTERPRETACION
La prueba es positiva si se desarrolla de un
color rojo estable. Esto indica que la
producción de ácido es suficiente para
producir el viraje del indicador y el
microorganismo fermentó la glucosa por la vía
de ácido mixta.
Un color anaranjado, intermedio entre el rojo
y el amarillo no es considerado como positivo.

22. EJEMPLOS:
(+) Escherichia coli
( - ) Enterobacter aerógenes