Universidad de Carabobo - Facultad de Ciencias de la Salud sede Carabobo - Bioanálisis. Parasitología. Módulo III, Tema 7: Amibiasis, amebas comensales y de vida libre.
1. FACULTAD DE CIENCIAS
DE LA SALUD
ESCUELA DE
BIOANÁLISIS
Universidad de Carabobo
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Bioanálisis
Asignatura Parasitología
2. Amibiasis, amebas comensales y
de vida libre.
Taxonomía, Morfología y Ciclo
Evolutivo.
Mecanismos Patogénicos,
Patología y Sintomatología.
Diagnóstico clínico y de
laboratorio.
Epidemiología, Tratamiento y
Profilaxis.
MSc. Diana Graterol
Parasitosis Intestinales:
Amebas Comensales y
Patógenas
3. 3
Amibas parásitos del hombre
Género Especie Hábitat
Entamoeba
coli
hartmanni
gingivalis
histolytica
dispar
Luz del Intestino Grueso
Luz del Intestino Grueso
Cavidad Bucal
Mucosa del Intestino Grueso
Luz del Intestino Grueso
Endolimax nana Luz del Intestino Grueso
Iodamoeba bütschlii Luz del Intestino Grueso
Complejo
Entamoeba
spp.
4. Clasificación Taxonómica
4
Reino: Protista
Sub-reino: Protozoa (unicelular, protozoario)
Phylum: Amoebozoa (prolongaciones membrana plasmática)
Sub-phylum: Conosa (emisión pseudópodos)
Clase: Archamoebae (pseudópodos base ancha y extremos redondeados)
Orden: Amoebida (trofozoítos con un solo núcleo)
Familia: Entamoebidae
Géneros:
Entamoeba (histolytica, dispar, coli, hartmanni,
gingivalis, polecki)
Endolimax nana
Iodamoeba bütschlii
5. Estadios amebas
5
Trofozoíto Forma vegetativa
- Capacidad alimentación, multiplicación,
invasión, locomoción.
- Membrana plasmática fina y frágil.
- Emite pseudópodos.
Quiste Forma resistencia
- Forma parasitaria infectante.
- Pared gruesa.
7. Evolución amebas
7
Cuando el trofozoíto se
encuentra en un
ambiente desfavorable,
se desprende de la
mucosa e inicia el
enquistamiento en la
luz del intestino grueso.
Adquieren una forma
esférica, se deshidratan
y excretan parte de las
reservas alimenticias
presentes en vacuolas
digestivas.
Se reproducen sus
núcleos, sintetizándose
otro a partir del que
posee el trofozoíto.
Presentan divisiones
nucleares sucesivas.
Quiste maduro
tetranucleado que se
elimina con las heces.
8. 8
Amebiosis/Amibiasis
Afecta al intestino grueso.
Nombre científico: Ent- “intestino”; amoeba-“ameba”, hist-
“tejido” y lisis- “destrucción”, y por sí solo explica la naturaleza de
la enfermedad que provoca.
El trastorno implica una destrucción de los tejidos intestinales.
Prevalencia 400 – 500 millones.
Morbilidad 25 – 50 millones.
Entamoeba histolytica
ENFERMEDADES DE NOTIFICACIÓN OBLIGATORIA
Dentro de las 1eras 5 causas de consulta
9. 9
Amebiosis/Amibiasis
Historia:
1.875 Fedor A. Lösch (San
Petesburgo, Rusia)
Observación microscópica en heces disentéricas de un
campesino. Amoeba coli.
1.925 Emile Brumpt (Francia)
Dos especies morfológicamente idénticas:
Entamoeba histolytica (patógena)
Entamoeba dispar (no patógena)
Actualidad Complejo Entamoeba spp.
E. histolytica ≠ E. dispar, E. moshkovskii, E. bangladeshi
Serotipos diferentes
Producción de Acs
Invasión de tejidos
No Patógena
WHO/PAHO/UNESCO: Expert Consultation on Amoebiasis.
México, 28-29 January, 1.997 (Summary) Weekly Epidemiological
Record. WHO 4 april 1997
14. 14
Morfología Entamoeba histolytica
Trofozoíto
Un solo núcleo.
Cromatina periférica adherida membrana nuclear (granos finos,
distribución regular).
Cariosoma puntiforme, localización central.
Presencia hematíes y células fagocitadas.
20 a 40 micras.
Forma parasitaria activa
invasora de tejidos
1. Núcleo
2. Cariosoma central
3. Cromatina nuclear
4. Endoplasma
5. Ectoplasma
6. Pseudópodo
15. 15
Morfología Entamoeba dispar
No se puede distinguir mediante microscopía óptica entre E.
histolytica y E. dispar
Trofozoíto
Un solo núcleo.
Cromatina periférica adherida membrana nuclear (granos finos,
distribución regular).
Cariosoma puntiforme, localización central.
Ausencia de hematíes y células fagocitadas.
20 a 40 micras.
16. 16
Morfología Entamoeba spp.
Quiste
Forma parasitaria de
eliminación e infectante
1. Núcleo (1 - 4)
2. Cariosoma central
3. Cromatina periférica
4. Cuerpos cromatoides
5. Pared quística
1 a 4 núcleos.
Cromatina periférica (fina, regular).
Cariosoma puntiforme, localización central.
Presencia cuerpos cromatoidales (alargados, forma bastón, extremos
redondeados).
10 a 16 micras.
17. 17
Morfología Entamoeba hartmanni
Trofozoíto
Un solo núcleo.
Cromatina periférica adherida (granos finos, distribución
regular).
Cariosoma puntiforme, localización central.
5 a 8 micras.
Quiste
18. 18
Morfología Entamoeba gingivalis
Trofozoíto
Un solo núcleo.
Cromatina periférica (fina, regular).
Cariosoma puntiforme, localización central.
5 a 8 micras.
Carece forma quística.
Ameba comensal cavidad bucal.
Frecuente casos mal aseo bucal, placa bacteriana e infecciones
bucales.
27. Mecanismos Patogénicos
27
Adhesión: Adhesinas y Receptores.
Citólisis dependiente de contacto: La
actividad de cisteína proteasas
(agresividad de los trofozoítos)
• Amebaporo: Muerte celular por choque
osmótico.
• Cisteina proteasas: Destrucción de la
matriz extracelular, donde degradan
fibronectina, laminina y colágeno. La
EhCP5 es la proteasa de E. histolytica;
contribuye a la evasión de la respuesta
inmune.
Fagocitosis: Proceso multifactorial, entre
ellos la adhesión, la polimerización de
ciertas proteínas, la acción de enzimas
digestivas y la exocitosis.
28. Patogenia E. histolytica
28
Acciones Mecánicas
• Emisión de proteínas con actividad
lectina (Gal/GalNAc, 260 kDa)
• Adhesinas
• Ricas en serina (STIRP, SREHP)
Acciones Líticas
• Secreción de sustancias
proteolíticas
• Lisis de elastina, colágeno y
matriz extracelular
29. Patogenia Entamoeba histolytica
29
Ulcera en forma de “botón” o “cuello de botella”
Los trofozoítos causan necrosis al epitelio intestinal, penetran la mucosa y se dirigen
hasta la submucosa, punto en el cual se extienden en sentido perpendicular respecto de
la dirección de su penetración.
34. Amebiasis pulmonar
34
Poco frecuente.
Se produce por contigüidad a partir
del hígado.
Necrosis. Reacción vascular y
exudado fibrinoso.
Infección bacteriana secundaria.
35. Amebiasis cutánea
35
Poco frecuente.
Suele presentarse proceso
ulcerativo en niños que
utilizan pañales, afectando
la piel de la región anal y
perianal.
Afección del pene (pacientes homosexuales).
36. Manifestaciones Clínicas
36
•Asintomáticos
•Sintomáticos
- Agudos: dolor
abdominal,
evacuaciones con
moco y sangre,
tenesmo, vómitos,
malestar general.
- Crónicos: astenia,
enflaquecimiento,
flatulencia, dolores
abdominales,
insomnio.
•Dolor hipocondrio
derecho, nauseas,
vómitos, fiebre,
escalofríos, perdida de
peso y enflaquecimiento.
•Ictericia.
•Hepatomegalia.
•Puntada de costado,
expectoración con esputo
oscuro (marrón),
escalofríos, fiebre, tos,
dolor torácico,
leucocitosis.
Intestino Hígado Pulmón
Trofozoíto en corte de intestino
40. Diagnóstico Amibiasis
40
Fijadores:
Solución concentrada:
Acido acético glacial……….5 ml
Glicerina……………………...1,5 ml
Solución Schaudinn……...….93,5 ml
Solución trabajo:
Solución concentrada………..100 ml
Alcohol polivinílico……………5 grs
Calentar a 75º C. Almacenar en frasco ámbar
Alcohol polivinílico
41. Diagnóstico Amibiasis
41
Tinción de Hematoxilina férrica:
Solución concentrada A:
Hematoxilina ……………10 grs.
Etanol absoluto…………1000 ml
Solución concentrada B:
Sulfato ferroso de amonio……10 grs.
Sulfato férrico de amonio ……10 grs.
Acido clorhídrico……………….10 ml
Agua destilada…………………..1000 ml
Solución de trabajo:
Solución concentrada A……15 ml.
Solución concentrada B …..15 ml.
42. Tinción de Hematoxilina férrica
42
Frotis en lámina
portaobjeto
Incubación Sol.
Schaudinn 12 h
a temp. amb
Yodo 3% -
Etanol 70%
5 min
Etanol 95%
5 min
Etanol 70%
5 min
H2O
destilada
10 min
FIJACIÓN HIDRATACIÓN
Sol. de
trabajo
5 min
H2O
grifo
5 seg
Núcleo
H2O
destilada
10 min
Etanol 70%
5 min
TINCIÓN
Medio de
montaje Cubreobjetos
Listo para
observar
Etanol 95%
5 min
Etanol
absoluto
5 min
Xileno
10 min
DESHIDRATACIÓN
MONTADO
45. 45
Diagnóstico Entamoeba spp.
Trofozoíto en Solución Salina
Desplazamiento unidireccional
La muestra debe procesarse lo
más pronto posible (Máximo 30
minutos luego de consignada la
muestra al laboratorio)
Pseudópodo
unidireccional
51. Diagnóstico Amibiasis
51
Método de Faust:
Técnica de concentración por flotación útil para la visualización de quistes
y huevos livianos.
Se utiliza solución de sulfato de zinc al 33% p/v.
Se utiliza la fuerza centrífuga.
Se toma con asa de platino o punta de pipeta la porción correspondiente al
menisco.
52. Diagnóstico Amibiasis
52
2 a 3 min
2000 rpm
Volcar
sobrenadante
Solución de ZnSO4
(33%) (d: 1,180)
Gota de
Lugol
100x / 400x
Filtrado
H2O
2 a 3 min
2000 rpm
Sacar de la
superficie
con ansa
Método de Faust:
53. Diagnóstico Amibiasis
53
Métodos inmunológicos:
- Captura coproantígenos
Es capaz de diferenciar entre E. histolytica y E. dispar
- ELISA indirecto
- Inmunoblot
- Inmunofluorescencia
- Reacción fijación complemento
- Contrainmunoelectroforesis
Anticuerpos (suero)
Sólo da positivo
en amibiasis
invasiva
Antígenos (heces)
55. Ecología
55
E. histolytica: 480 millones parasitados
Distribución mundial COSMOPOLITA
Países tropicales y subtropicales-subdesarrollados
Mayor incidencia:
América Latina (México, Honduras, Salvador, Nicaragua,
Costa Rica).
África.
Asia.
56. 56
Epidemiología
Reservorio o Fuente Infección:
Hombre enfermo Antroponosis
Portadores sanos, casos subagudos y crónicos.
Forma parasitaria eliminación: quistes
Mecanismo transmisión: Vía Oral
Expendedores alimentos.
Agua y alimentos contaminados.
Empleo heces humanas como abono.
Vectores mecánicos (moscas).
Hospedador susceptible: Hombre (desnutrición, inmunosupresión,
mujeres embarazadas, niños).
60. 60
Amibas de vida libre
Parásitos facultativos capaces de vivir como parásitos y amibas
anfizoicas, con formas quísticas y trofozoíticas (flagelado).
Hábitat natural: aguas termales, dulces, potables, polvo, aire.
Mecanismo de transmisión: penetración vía mucosa nasal.
Naegleria fowleri produce meningoencefalitis amebiana primaria y
Acanthamoeba sp. infecta el sistema nervioso central causando
encefalitis amebiana granulomatosa.
Naegleria fowleri – Acanthamoeba sp.
61. 61
Amibas de vida libre
eventualmente patógenas
Familia Género Especie Patología
Hartmannellidae Hartmannella
hyalina, agricola,
glebae, rhyzoides
Meningoencefalitis
Amebiana Primaria
Acanthamoebidae Acanthamoeba
castellani, culbertsoni,
polyphaga
Vahlkampfiidae Naegleria fowleri
63. 63
Morfología Naegleria fowleri
Trofozoíto
(forma ameboide)
Forma
flagelada
Quiste
Forma cilíndrica u oval
22 x 7 micras
Pseudópodos lobópodos
Cariosoma grande y central
Un solo núcleo
Cariosoma grande y central
Aspecto estrellado
Trofozoíto
(forma ameboide)
Forma
flagelada
Quiste
Piriforme con dos flagelos
largos en la porción más
ancha, con los que se mueve
formando círculos
66. Patología Naegleria fowleri
66
Meningoencefalitis amebiana:
Rigidez nuca, convulsiones, vómitos, coma
Síntomas:
Fiebre, cefalea, dolor garganta, rinitis
Muerte
72 horas
6 días
Período de incubación 3-5 días
Tratamiento: Anfotericina B – Polimixina B
68. Diagnóstico Naegleria fowleri
68
Meningoencefalitis amebiana:
Muestra: Líquido cefalorraquídeo
Aumento presión LCR
Aspecto turbio
Aumento Polimorfonucleares
Aumento proteínas (albúmina)
Disminución glucosa
Presencia amebas
69. Diagnóstico Naegleria fowleri
69
Examen directo, Tinción con GIEMSA.
PCR.
Cultivo en medio Chichillas: medio enriquecido con
Escherichia coli. Positividad a los 8 días post cultivo.
Se realiza a temperatura ambiente (29-31oC).
Se adicionan 3 mL de agua destilada estéril a temp.
ambiente a la superficie de las placas de cultivo.
Con una espátula de Drigalsky se toma parte del cultivo y
se realiza examen al fresco observándose las formas
flageladas.
Prueba de flagelación:
71. Diagnóstico Acanthamoeba sp.
71
Queratitis ocular:
Muestra: raspado o biopsia córnea, lentes de contacto y
soluciones de limpieza de lentes.
Cultivo en medios específicos
Láminas coloreadas
72. Conclusiones
72
Entamoeba histolytica
“A” F.I.P. o Reservorio
“B”
Forma P. Infectante
Puerta de Entrada
Mecanismo Transmisión
Hábitat
Forma P. Eliminación
Medio de Eliminación
Puerta de Salida
“C” Hospedador Susceptible
Método Diagnóstico Elección
Hombre infectado - Portadores Sanos
Quistes maduros
Pasivo - Alimentos, Agua
Boca
Duodeno y Yeyuno
Trofozoítos (Fase Aguda) y Quistes (Fase
Crónica)
Heces
Ano
Hombre sano - Escolares
Faust
73. Para Recordar
73
Las amibas parásitos comensales que habitan en la luz del intestino
grueso del hombre son:
Entamoeba gingivalis es una amiba parasito comensal que habita en:
y posee solo la forma evolutiva de:
La Estructura nuclear de Entamoeba histolytica se caracteriza por
tener:
Entamoeba coli, Entamoeba hartmanni, Entamoeba
dispar, Iodamoeba bütschlii, Endolimax nana.
Cavidad Bucal Trofozoíto
Cromatina periférica regular, cariosoma puntiforme y central
74. Para Recordar
74
Las amibas parásitos comensales que comparten características nucleares
con Entamoeba histolytica son:
Según el Informe de Expertos de la OMS de 1997 se confirma que existen
dos especies de amibas morfológicamente idénticas que son:
Término “Amibiasis” con síntomas o sin síntomas se debe atribuir solo a:
Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni y
Entamoeba gingivalis.
Entamoeba histolytica y Entamoeba dispar
Entamoeba histolytica
75. Bibliografía
75
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Botero D, Restrepo M. (2012). Parasitosis humanas. 5ta Edición. Colombia: Corporación para Investigaciones
Biológicas.
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Gállego Berenguer J. (2007). Manual de Parasitología: morfología y biología de los parásitos de interés
sanitario. España: Edicions de la Universitat de Barcelona.
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Venezuela: Editorial de la Universidad del Zulia (Ediluz).
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Tomo I.