Este documento resume las principales infecciones bacterianas que se encuentran en la práctica clínica, incluyendo neumonía bacteriana, gastroenteritis y meningitis. También describe varias pruebas bioquímicas comúnmente usadas para identificar bacterias del género Enterobacteriaceae, como las pruebas de citrato, ureasa, Voges-Proskauer, rojo de metilo, SIM y MIO. Finalmente, explica en detalle los principios, medios de cultivo y procedimientos de estas pruebas bioquímicas

1. Cátedra de Microbiología
Clase 11:
Infecciones bacterianas frecuentes en la
práctica clínica
Carlos Guanín Cabrera

2. Neumonía
bacteriana

5. Gastroenteritis

9. Sistema
Nervioso

10. Etiología de meningitis

11. Punción lumbar y LCR

12. Análisis de LCR

13. Componente práctico
Identificación de Enterobacteriaceae: Pruebas bioquímicas

14. MÉTODOSBASADOS EN
PRU
EBAS
BIOQUÍMICAS
Las pruebas bioquímicas han sido
ampliamente utilizadas para
diferenciar bacterias. Estas pruebas
se fundamentan en demostrar si el
microorganismo es capaz de
fermentar azúcares, la presencia de
enzimas, la degradación de
compuestos, la producción de
compuestos coloreados, etc.

15. Existen flujogramas, para la identificación bacteriana,
mediante pruebas bioquímicas de microorganismos.
Por ejemplo, la presencia de un coco bacilo gram negativo,
facultativo, fermentador de glucosa, oxidasa negativo, nos
indica la presencia de una enterobacteria, para determinar su
género podemos seguir el siguiente esquema.

17. PRUEBAS
BIOQUÍMICAS
• Citrato
• Ureasa
• Voges-Proskauer
• Rojo de metilo
• Sulfuro Indol Movilidad (SIM)
• Movilida, Indol, Ornitina (MIO)
• T
riple azúcar Herro (TSI)
• Agar Lisina Hierro (LIA)

18. COLOR: VERDE
INDICADOR:AZULDEBROMOCRESOL
SUSTRATOPRINCIPAL: CITRATODESODIO

19. PRINCIPIO
Es una sal del acido cítrico.
Algunas bacterias pueden obtener energía de fuentes
distintas de la fermentación de los hidratos de carbono,
con el citrato como única fuente de carbono.
La medición de esta característica es importante para
identificar muchos miembros de la familia
Enterobacteriaceae. Cualquier medio usado para
detectar la utilización del citrato por las bacterias que se
van a probar debe carecer de proteínas e hidratos de
carbono como fuente de carbono.

20. La utilización del citrato por la
bacteria que se va a probar se
detecta en el medio de citrato por
la producción de subproductos
alcalinos.

21. El medio contiene citrato de sodio, que es un anión,
como única fuente de carbono, y fosfato de amonio
como única fuente de nitrógeno. Las bacterias que
pueden utilizar el citrato también pueden extraer
nitrógeno de la sal de amonio, con producción de
amoniaco (NH+), lo que produce la alcalinización del
medio por conversión del NH a hidróxido de amonio
(NH4OH).

22. El indicador es el azul de bromotimol, que es amarillo por debajo de pH 6 y
azul por encima de pH 7,6.

24. MEDIO DECULTIVO
El medio para citrato utilizado con mayor
frecuencia es la formula de Simmons.
El medio se coloca en tubos inclinados
(agar en pico de flauta).

25. La formula del medio de citrato de
Simmons es la siguiente:
• Fosfato de amonio dihidrogenado 1 g
• Fosfato dipotasico 1 g
• Cloruro de sodio 5 g
• Citrato de sodio 2 g
• Sulfato de magnesio 0 ,20 g
• Agar 15 g
• Azul de bromotimol 0 ,08 g
• Agua destilada 1 L
• pH final =6,9

26. PROCEDIMIENTO
Se toma una colonia bien aislada de la superficie de un medio de aislamiento
primario y se siembra en forma de estría única en el pico de flauta (agar
inclinado) del tubo de agar citrato.
El tubo se incuba a 35 °C
durante 24 a 48 horas.

27. RESULTADOS
La prueba positiva esta
representada por la producción
de color azul oscuro en el término
de 24 a 48 horas, que indica que el
microorganismo en prueba ha sido
capaz de utilizar el citrato
contenido en el medio, con
formación de productos alcalinos.

28. • La prueba también puede considerarse positiva sin
que haya color azul, sihay desarrollo visible en la
estría de siembra. Esto es valido porque para que el
desarrollo sea visible, el microorganismo debió
haber ingresado en la fase logarítmica de
crecimiento, lo que solo es posible siha asimilado
carbono y nitrógeno.

29. Microorganismos Positivos
• Salmonella
• Arizona
• Citrobacter
• Enterobacter
• Klebsiella
• Serratia licuefaciensis
• Pseudomonas cepacia
Microorganismos Negativos
• Edwarsiella
• Yersinia enterocolítica
• Escherichia coli
• Shigella
• Yersinia pseudotuberculosis
• Otras especies de Moraxella
• Proteus morganii

30. Ureasa
COLOR
:ROSADO
IN
DICADOR:ROJO FENOL
SUSTRATOPRIN
CIPAL:UREA

31. PRINCIPIO
Es una diamida del acido carbónico
Todas las amidas se hidrolizan fácilmente, con
liberación de amoniaco y dióxido de carbono.
El amoniaco reacciona en solución para formar
carbonato de amonio, lo que produce alcalinización y
aumento de pH del medio.

33. MEDIOS DE
CULTIVO
Los dos medios utilizados con mayor frecuencia son el caldo urea
de Stuart y el agar urea de Christensen
CALDO UREADES
T
UART
Extracto de levadura 0,1 g
Fosfato monopotasico 9,1 g
Fosfato disodico 9,5 g
Urea 20 g
Rojo fenol 0,01 g
Agua destilada 1 L
pH final =6,8
AGAR UREADECHR
I
S
T
E
NSEN
Peptona 1 9
Glucosa 1 g
Cloruro de sodio 5 g
Fosfato monopotasico 2 g
Urea 20 g
Rojo fenol 0 ,012 g
Agar 15 g
Agua destilada 1 L
pH final =6,8

34. PROCEDIMIENTO
El medio liquido se siembra con un ansa de cultivo puro del microorganismo
por probar.
La superficie inclinada del agar (pico de flauta) se siembra en estría con el
microorganismo por probar. Ambos medios se incuban a 35 °C durante 18 a
24 horas.

35. RESULTADOS
Los microorganismos que hidrolizan la urea rápidamente
pueden producir reacciones positivas en l o 2 horas; las
especies menos activas pueden requerir 3 días o mas. Las
reacciones son las siguientes:

36. 1. Caldo de Stuart:
Un color rojo en todo el
medio indica alcalinización
e hidrolisisde la urea.

37. 2. Agar de Christensen:
Degradadores rápidos de la urea (especies de Proteus): color rojo en todo el
medio.
Degradadores lentos de la urea (especies de Klebsiella): inicialmente color rojo
solo en el pico de flauta, que gradualmente se extiende a todo el tubo.

38. 3. Ausencia de hidrolisis de la urea: el medio
conserva su color amarillo original.

39. Microorganismos positivos
• Klebsiella
• Proteus (rápido)
Microorganismos negativos
• Escherichia coli
• Providencia

40. Voges
-
Proskauer

41. PRINCIPIO
Voges-Proskauer es un epónimo doble, en honor de
dos microbiólogos que trabajaron a principios del
siglo xx. Estos investigadores fueron los primeros en
observar la reacción de color rojo producida en
medios de cultivo adecuados después del
tratamiento con hidróxido de potasio. Luego se
descubrió que el producto activo del medio,
formado por el metabolismo bacteriano, es el acetil
metil carbinol, producto de la vía del butilenglicol.

42. • El acido pirúvico, se metaboliza da como resultado la producción de
acetoina (acetil metil carbinol).
• Los microorganismos del grupo Klebsiella- Enterobacter-Hafnia-Serratia
producen acetoina como producto metabólico final principal del
metabolismo de la glucosa y forman cantidades pequeñas de ácidos
mixtos.
• En presencia de oxigeno atmosférico e hidróxido de potasio al 40%, la
acetoina se convierte a diacetilo y el a-naftol sirve de catalizador para
producir un complejo de color rojo.

43. MEDIOS DE
CULTIVO
A. Caldo VP/RM
• Polipeptona 7g
• Glucosa 5 g
• Fosfato dipotasico 5 g
• Agua destilada 1 L
• pH final =6,9
B. Reactivos
• oc-naftol al 5%
. intensificadorde color
• a-naftol 5 g
• Alcohol etilico absoluto 100 mL
• Hidroxido de potasio al 40%
, agente
oxidante
• Hidroxido de potasio 40 g
• Agua destilada 100 mL
El medio utilizado con mayor frecuencia es el caldo de rojo de metilo-
Voges-Proskauer (MR/VP) segun la formula de Clark y Lubs.

44. PROCEDIMIENTO
Sembrar un tubo de caldo MR/VP con un cultivo puro del
microorganismo por
probar. Incubar 24 horas a 35 °C.
Finalizada la incubación, transferir 1 ml del caldo a un tubo
de ensayo limpio.
Agregar 0,6 ml de a-naftol al 5%,seguidos de 0,2 ml de KOH
al 40%.
Es esencial que los reactivos sean agregados en ese
orden. Agitar suavemente el tubo para exponer el medio
al oxigeno atmosférico y dejar el tubo en reposo durante
10 a 15 minutos.

45. RESULTADOS
Positivo: desarrollo de color rojo 15 minutos o mas después del
agregado de los reactivos, que indica la presencia de diacetilo, el
producto de oxidación de la acetoina.
La prueba no debe leerse mas allá de una hora después de dejar los tubos en
reposo, porque los cultivos Voges-Proskauer negativos pueden producir un
color cobrizo, que se puede interpretar como un positivo falso.

46. Microorganismos positivos
• Klebsiella pneuminiae
• Yersinia enterocolítica
Microorganismos negativos
• Escherichia coli
• K. ozaenae

47. Rojo
de
Metilo

48. PRINCIPIO
El rojo de metilo es un indicador de pH con un rango entre 6
(amarillo) y 4,4 (rojo). El pH al cual el rojo de metilo detecta
los ácidos es mucho mas bajo que el pH correspondiente a
otros indicadores utilizados en medios de cultivo
bacteriológicos. Por lo tanto, para provocar un cambio de
color, el microorganismo en estudio debe producir grandes
cantidades de acido del sustrato de hidratos de carbono
que se utilice.
La prueba del rojo de metilo es una prueba cuantitativa de
la producción de acido, que requiere que los
microorganismos positivos produzcan ácidos fuertes (lactico,
acetico, formico) de la glucosa.

50. MEDIOS DE
CULTIVO
A. Caldo VP/RM
• Polipeptona 7g
• Glucosa 5 g
• Fosfato dipotasico 5 g
• Agua destilada 1 L
• pH final =6,9
B. Reactivos
• Indicador de pH rojo de metilo.
• Rojo de metilo, 0,1 g en 300 ml de
alcohol etílico al 95%
.
• Agua destilada, 200 ml.
El medio utilizado con mayor frecuencia es el caldo de rojo de metilo-
Voges-Proskauer (MR/VP) según la formula de Clark y Lubs.

51. PROCEDIMIENTO
1. Sembrar el caldo MR/VP con un cultivo puro del
microorganismo en estudio. Incubar el caldo a 35 °C
durante 48 a 72 horas (no menos de 48 horas).
2. Finalizada la incubación, agregar 5 gotas del
reactivo de rojo de metilo directamente al caldo.

52. RESULTADOS
Positivo: El desarrollo de color rojo
estable en la superficie del medio indica
la suficiente producción de acido como
para disminuirel pH a 4,4.

53. • Negativo:Como otros microorganismos
pueden producir pequeñas cantidades
de acido del sustrato probado, puede
observarse un color naranja, intermedio
entre amarillo y rojo. Esto no indica una
prueba positiva.

55. Microorganismos negativos
• Enterobacter aerógenes
• Enterobacter cloacae
• Klebsiella
Microorganismos positivos
• Escherichia coli
• Especies de Yersinia

56. SIM:Sulfuro indol movilidad
MIO:Movilidad indol ornitina
Indol

57. PRINCIPIO
Es uno de los productos de degradación
metabólica del aminoácido
triptófano.
La prueba del indol se basa en la formación de un
complejo de color rojo cuando el indol reacciona con
el grupo aldehído del p- dimetilaminobenzaldehido.
En la practica se utilizan medios combinados, como el
medio de sulfuro indol para motilidad (SIM), el medio
para motilidad indol omitina (MIO) o el medio indol
nitrato.

58. SIM:SULFURO INDOL MOVILIDAD
• Determinar si un organismo es móvil o
inmóvil, si es capaz de liberar ácido
sulfhídrico por acción enzimática de
los aminoácidos que contienen
azufre produciendo una reacción
visible de color negro y por último la
capacidad de desdoblar el indol de
la molécula de triptófano.

59. • Producción de ácido
sulfhídrico
• Producción de Indol
• Movilidad

60. PRODUCCIÓN DE ÁCIDO
SULFHÍDRICO
La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reacción
de reducción que da un sulfito y un sulfato.
El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato férrico de amonio
para producir un precipitado negro insoluble, sulfato ferroso.

61. PRODUCCIÓN DE INDOL
El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias
para formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético.
La formación de indol se produce solamente en aquellos organismos
capaces de fermentar los hidratosde carbono.

62. MEDIOSY REACTIVOS
Caldo triptofano (triptofano al 1%)
• Peptona o digerido pancreatico de caseina (tripticasa) 2 g
• Cloruro de sodio 0,5 g
•Agua destila da 100 ml
Reactivo de Kovac
• Alcohol amilico o isoamilico puro 150 ml
• p-dimetilaminobenzaldehido 10 g
•HCI concentrado 50 ml
Reactivo de Ehrlich
• p-dimetilaminobenzaldehido 2 g
• Alcohol etílico 190 ml
• HCI concentrado 40 ml

63. PROCEDIMIENTO
 Sembrar el caldo triptófano con el microorganismo por probar e incubar a 35
 °C durante 18a 24horas.
 Una vez transcurrido este tiempo, agregar 15 gotas del reactivo haciendo
 que se deslicen por la pared deltubo.
 S
i se utiliza el reactivo de Ehrlich, este paso
debe ser precedido por el agregado de 1mLde xilol.Estono es
necesario con el reactivo de Kovac.

64. RESULTADOS
Ácido sulfhídrico:
Positivo:ennegrecimiento del medio
Negativo: Sin ennegrecimiento

65. Indol:
Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio
Negativo: No se produce color /Color naranja en la
superficie del medio indica desarrollo de escatol, un
compuesto metilado que puede ser precursor de la
formación de indol.
La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa.
Si el cultivo de 24 hrs es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse
la prueba.

66. Movilidad
Positiva: los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden
en el medio provocando turbiedad.
Negativa: Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.

67. Bacterias Producción H2S Producción
Indol
Movilidad
Salmonella typhi +/- - +
Salmonella +/- - +
E. coli - + +/-
Klebsiella - +/- -
Enterobacter - - +
Citrobacter + - +
Shigella - +/- +/-

68. MIO
: MOVILIDAD,INDOL, ORNITIN
A
Composición del medio:
• Extracto de levadura
• Peptona
• L-Ornitina
• Dextrosa
• Agar
• Agua
• Indicador de pH:púrpura de bromocresol
• Ácido:amarillo pH 5.2
• Alcalino:Púrpura pH 6.8
• Medio no inoculado: Púrpura intenso brillante pH 6.0

69. PRINCIPIO
El MIO se utiliza para la identificación de enterobacterias
sobre la base de movilidad, la producción de ornitina
descarboxilasa e indol.
1. Descarboxilación de ornitina
2. Producción de indol
3. Movilidad

70. • Descarboxilación de ornitina: mide la
capacidad enzimática de un
organismo para descarboxilar un
aminoácido para formar una amina,
con la consiguiente alcalinidad.

71. • Producción de indol:El triptófano es un
aminoácido que puede ser oxidado
por ciertas bacterias para formar tres
metabolitos principales: indol, escatol
e indolacético.

72. PROCEDIMIENTO
Inoculación:picadura en forma vertical
T
iempo:28-48 hrs
T
emperatura 35 -37°C

73. RESULTADOS
 Ornitina descarboxilasa
 Positivo:color púrpura del medio
 Negativo: color amarillo en el fondo del tubo que puede serpúrpura al final
 Indol:
 Positivo:anillo rojoen la superficie del medio
 Negativa: No se Produce color / Color naranja en la superficie del medio,
indica desarrollo de escatol

74. y se difunden
Movilidad:
Positiva: los organismos móviles migran de la línea de siembra
en el medio provocando turbiedad.
Negativa: crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.

75. Microorganismos ornitina
positivos
• Especies de Enterobacter
• Proteus mirabilis
• Proteus morganii
• Yersinia enterocolitica
 Microorganismos
ornitina negativos
• Especies de Klebsiella
• Enterobacter aglomerans
• Proteus vulgaris
• Proteus rettgeri
• Yersinia pestis
• Yersinia pseudotuberculosis

76. Bacterias Producción
Indol
Movilidad Producción H2S
Salmonella typhi - + +/-
Otras
Salmonellas
- + +/-
E. coli + +/- -
Klebsiella +/- - -
Enterobacter - + -
Citrobacter - + +
Shigella +/- +/- -

77. T
S
I
:Triple azúcar
Hierro

78. MEDIO DECULTIVO
Agar hierro de klinger (AHK)
Composición:
Estracto de carne
Peptona
Lactosa
Sulfato ferroso
Tiosulfato de Na
Agua destilada
Extracto de levadura
Proteasa
Dextrosa
Cloruro de Na
Agar
Indicador:Rojo fenol
Ácido:amarillo
Alcalino:Rojo
Medio no inoculado:naranja rojizo, pH 7.4

79. PRINCIPIO
Determina la capacidad de un
organismo de atacar un
hidrato de carbono específico
incorporado en un medio de
crecimiento básico, con
producción o no de gases,
junto con la determinación de
posible ácido sulfhídrico.

80. La fermentación es un proceso que se lleva a cabo en condiciones
aeróbicas (pico de flauta) y anaeróbicamente (capa inferior)
El medio T
SI contiene una cantidad limitante de glucosa y
concentración 10 veces mayor de lactosa. Las
enterobacterias y los fermentadores de glucosa comienzan
metabolizando este azúcar.
Una vez que se ha reducido toda la glucosa piruvato, este se
metaboliza por el ciclo de Krebs formando productos finales
ácidos.

81. El ácido en el medio hace virar el amarillo del indicador
de pH, rojo fenol.
A 6 horas de la incubación, la zona de la estría y el fondo
del tubo tendrán un color amarillo (fermentador de
glucosa)

82. Si el fondo permanece rojo, no hay variación de pH (no
fermentador de glucosa)
Si el color rojo es mas intenso que el original, hay
alcalinización (noes miembro de la familia enterobacteriaceae)

83. Al agotar la glucosa la bacteria utiliza la lactosa o sacarosa.
Después de 18-24 hrs, el medio permanece amarillo,
reacción ácido sobre ácido (A/A). Fermentador de lactosa.
La producción de gas romperá el agar o lo empujara hacia
arriba. Reacción A/A más gas.

84. Sino utiliza la lactosa, hará uso de proteínas o aminoácidos.
El metabolismo proteico se produce en la superficie de la zona
inclinada
donde el oxígeno es abundante.
18-24 hrs de incubación: zona inclinada roja fondo del agar
amarillo (metabolismo anaerobio de glucosa inicial). Reacción
alcalina sobre ácido K/A.

85. Las bacterias que fermentan glucosa también pueden
formar productos alcalinos a partir de la utilización de
la peptona, sobre la zona inclinada. Reacción K/K.

86. PROCEDIMIENTO
Inoculación: picadura y estría en pico de flauta.
T
iempo:18-24 hrs
Temperatura:35-37°C

87. RESULTADOS
K/A: fermentación de glucosa solamente (Pico de
flauta alcalino/profundidad ácida). Característico de
bacterias no fermentadores de lactosa como Shigella.
A/A: fermentación de glucosa y lactosa (Pico de
flauta ácido/ profundidad ácida). Característicos de
E. coli y grupo Klebsiella-Enterobacter.
K/K: No fermentación de glucosa y lactosa (pico de
flauta alcalino/profundidad alcalina). Característico
de bacterias no fermentadoras como Pseudomas
aeruginosa

90. Especie bacteriana Superficie Fondo Gas H2S
Enterobacter A K +
+ -
Klebsiella A A +
+ -
E. Coli A A + -
Shigella K A - -
Salmonella typhi K A - +
Salmonella paratyphi K A + -
Citrobacter K A + +
+
+
Proteus vulgaris K A + +
+
+
Providencia K A +/- -

91. LIA:Agar Lisina
Hierro
COLOR: LILA
INDICADOR: PÚRPURA DE BROMOCRESOL
SUSATRATPOS PRINCIPALES: LISINA Y HLUCOSA

92. MEDIO DECULTIVO
Base de descarboxilasa de Moller
Composición:
Peptona
Piridoxal
Citrato de amonio
Glucosa
Agar
Extracto de carne
L-lisina
Tiosulfato de sodio
Agua destilada
Indicador de pH:Purpura de bromocresol
Ácido:Amarillo pH 5.2
Alcalino:Púrpura pH 6.8
Medio no inoculado: Purpura intenso brillante pH 6.0

93. PRINCIPIO
Mide la capacidad enzimática de un organismo para
descarboxilar un aminoácido (lisina y arginina) para
formar una amina con la consiguiente alcalinidad.

94. PROCEDIMIENTO
Inoculación: por picadura y estría, inóculo liviano.
T
emperatura:35-37°C
T
iempo 18-24 hrs

95. RESULTADOS
A:ácido
K:alcalino
N: neutra
R:Rojo (desaminación oxidativa)

96. • K/K: Azul de Prusia/azul de Prusia. Desaminación
oxidativa/descarboxilación.
• K/A: azul de Prusia/lila. No desaminación.
• Producción de H2S: Enegrecimiento del medio
• Producción de gas: burbujas o levantamiento del
medio de cultivo de las
paraedes del tubo.

99. Especie Bacteriana Superficie Fondo Gas H2
S
E. Coli K K/N +/- -
Shigella K A - -
Salmonella typhi K K - +/-
S. paratyphi K K +/- -/+
Enterobacter clocae K A +/- -