Clase 8 medios de cultivo 2015

2. El diagnóstico definitivo de la mayoría de las micosis
requiere el aislamiento e identificación del hongo a partir
del cultivo.
El objetivo fundamental de la utilización de los medios de
cultivo es optimizar el crecimiento de los microorganismos.
Segun su composición, los medios de cultivo puede ser:
generales
enriquecidos
selectivos
diferenciales
especializados

3. Generales
El más característico y clásico es el Agar Dextrosa de
Sabouraud (SDA) utilizado para el aislamiento de
hongos a partir de muestra clínicas y para su
identificación.
Enriquecidos
Se utilizan especialmente en micosis sistémicas endémicas
(histoplasmosis, paracoccidioidomicosis, etc.), un
ejemplo es el agar infusión cerebro-corazón (BHIA).

4. Selectivos
Son medios que favorecen el aislamiento de los
microorganismos deseados impidiendo el de otros.
Se utilizan con antibacterianos (cloranfenicol, gentamicina,
penicilina, estreptomicina) y/o antimicóticos,
(cicloheximida). Utiles en micosis cutáneas y sistémicas.
Diferenciales
Ayudan a la identificación del hongo basada en la apariencia
de éste en dicho medio, gracias a la adición de determinados
componentes (sustancias cromógenas, o indicadores de pH).
DTM para Dermatofitos, CHROMagar Candida.

5. Especializados
Son aquellos medios que contienen algún
componente destinado a aislar e identificar un
agente concreto (semillas de girasol Guizotia
abyssinica para (Cryptococcus neoformans) o a
favorecer la identificación de ciertas especies
(medio de Czapeck para las especies de
Aspergillus).

6. Agar Dextrosa de Sabouraud, (SDA)
Agar Infusión cerebro-corazón (BHIA) con o sin sangre de
cordero al 5%, con o sin antibacterianos
Agar inhibidor para mohos (MIA)
Mycosel/Mycobiotic(antibacterianos/cicloheximida)
Agar Dextrosa de Papa (PDA).
Agar agua
Los hongos también pueden crecer en medios no selectivos,
incluidos la mayoría de los medios bacteriológicos, si se
incuban el tiempo suficiente.

7. Agar de Urea: se utiliza para diferenciar entre levaduras e
identificar diferentes especies de Trichophyton.
Agar de harina de maíz (“Corn Meal Agar”):
 Suplementado con Tween 80: para diferenciar
distintas especies de Cándida y para realizar
subcultivos ya que estimula la esporulación de
hongos miceliales.
 Suplementado con 10 gramos de Glucosa: para
diferenciar el Género Trichophyton

8. 1 - Detección de la presencia del hongo
Examen directo
Examen histológico
2 - Cultivo
3 - Identificación

9. - No existen métodos rápidos, miniaturizados ni
automatizados
- Ni tests nutricionales y fisiológicos que nos
permitan identificar la mayoría de especies
—— IDENTIFICACIÓN ——

10. - Se pleomorfiza con facilidad
- Esporulación escasa
MEDIOS DE CULTIVO USADOS EN CLÍNICA
(agar de Sabouraud, agar glucosado de patata, ....)
MEDIOS DE CULTIVO USADOS EN CLÍNICA
(agar de Sabouraud, agar glucosado de patata, ....)
Ricos en NutrientesRicos en Nutrientes
Dificulta el diagnóstico micológicoDificulta el diagnóstico micológico

11. CULTIVO PUROCULTIVO PUROCULTIVO PUROCULTIVO PURO
Medios de cultivo adecuados:Medios de cultivo adecuados:
- estimular la esporulación- estimular la esporulación
- desarrollar estructuras fértiles similares a las que presenta en la- desarrollar estructuras fértiles similares a las que presenta en la
naturalezanaturaleza
- producir pigmentos- producir pigmentos
- determinar tasas de crecimiento- determinar tasas de crecimiento ........
Medios de cultivo adecuados:Medios de cultivo adecuados:
- estimular la esporulación- estimular la esporulación
- desarrollar estructuras fértiles similares a las que presenta en la- desarrollar estructuras fértiles similares a las que presenta en la
naturalezanaturaleza
- producir pigmentos- producir pigmentos
- determinar tasas de crecimiento- determinar tasas de crecimiento ........

12.  MEDIOS DE CULTIVO PARA:
Estimular la esporulacion:
 Agar patata zanahoria
 Agar harina de avena
 Agar V8
 Agar harina de Maiz
Tasa de crecimiento y produccion de pigmento
 Agar patata dextrosa
 Agar Harina de avena
Identificacion de especies (Fusarium)
 Agar nutritivo sintetico
 Agar hojas de clavel
Identificacion de especies (Aspergillus y Penicillium)
 Agar extracto de malta al 2%
 Agar Czapek Dox

13. — INCUBACIÓN —— INCUBACIÓN —
Condiciones estandar para un patógenoCondiciones estandar para un patógeno oportunista:oportunista:
Temperatura: 24-28ºC
Luz: - oscuridad
- 12h UV / 12h oscuridad

14. CARACTERES MACROSCÓPICOS
(diámetro de la colonia, color, textura...)
CARACTERES MACROSCÓPICOS
(diámetro de la colonia, color, textura...)
CARACTERES MICROSCÓPICOS
(morfología de las hifas, de las estructuras fértiles....)
CARACTERES MICROSCÓPICOS
(morfología de las hifas, de las estructuras fértiles....)
IDENTIFICACIÓNIDENTIFICACIÓN
Genéro
Especie

15. ESTUDIO DE LOS CARACTERES
MICROSCÓPICOS
 PREPARACIONES DIRECTAS
 MICROCULTIVO
—— IDENTIFICACIÓN DE ESPECIESIDENTIFICACIÓN DE ESPECIES ——

16.  Preparaciones Directas Líquidos de Montaje
Preparaciones
semipermanentes:
Lactofenol
Lactofenol-Azul Algodón
Ácido Láctico al 85
Ácido Láctico- Azul Algodón
Preparaciones
permanentes:
Alcohol Polivinilo

17. Preparaciones con cinta adhesiva

18.  MICROCULTIVO: preservar las estructuras frágiles

19. El hallazgo de un hongo en sangre certifica el diagnóstico de una
micosis invasora;
Sin embargo, el hemocultivo presenta baja sensibilidad y en
general su positividad no supera el 50 % en pacientes con
candidiasis invasoras
Los hongos filamentosos, aun cuando invadan tejidos son difíciles
de encontrar en sangre
Se debe diferenciar los contaminaciones de los hongos
filamentosos y levaduriformes de las verdaderas micosis invasoras

20. Botellas de hemocultivo del sistema
automatizado BacT/Alert ® (Organon
Teknika Corp.).
Botellas de hemocultivo del sistema
automatizado BACTEC ® (Organon
Teknika Corp.).
Botellas de hemocultivo
del sistema automatizado
Vital® (bioMérieux-Vitek).
Tubos Isolator
1,5® (pediátrico) e Isolator
10® del sistema lisis-centrifugación
(Oxoid).

22. Crecimiento en CHROMAgar :
Candida de C. albicans (verde)
C. tropicalis (azul),
C. krusei (rosa y rugosa),
C. parapsilosis (rosácea-lisa)
Prototheca wickerhamii (crema,
flecha).
Cultivo mixto de Cryptococcus
neoformans y Candida albicans
en Medio Staib (Agar de Staib
(Guizotia abyssinica, Agar
semillas de alpiste) mostrando el
color marrón de las colodias de
C. neoformans.

23. Prueba de la fenol-oxidasa (Medio de TOC).
Producción de pigmento marrón oscuro por C.
neoformans.

24. C. glabrata C. parapsilosis C. albicans
Geotrichum sp C. tropicalis Trichosporon sp.
C. krusei C. norvegensisTODAS
CHROMAgar. Levaduras del géneroCHROMAgar. Levaduras del género CandidaCandida

26. a b
c
d
a,b,c. Levaduras género Candida.
d. Levaduras género Cryptococcus

47. • No todos los hongos tienen capacidad para producir una
micosis invasora del tracto respiratorio inferior, por lo que hay
que evaluar especialmente los aislamientos de aquellos hongos
que con mayor frecuencia se han visto implicados en procesos
clínicos.
• El aislamiento de :
A. fumigatus o A. flavus en una muestra respiratoria de un paciente leucémico
y/o neutropénico tiene un alto valor de infección fúngica invasora.
• La gravedad y agresividad de una mucormicosis pulmonar
justifica siempre informar de la presencia de un mucoral en una
muestra respiratoria correctamente procesada.
• La corticoterapia prolongada es por sí sola un importante factor
de riesgo para desarrollar una aspergilosis invasora.

48. El aislamiento de :
C. neoformans en una muestra respiratoria es indicativo de
criptococosis pulmonar o de infección sistémica
Scedosporium apiospermum y S. prolificans pueden dar lugar a
micosis pulmonares invasoras clínicamente indistinguibles de la
aspergilosis.
La fusariosis pulmonar suele deberse a diseminación
hematógena en un cuadro sistémico y, en más del 50% de los casos,
cursa con hemocultivos positivos.
La especies del género Candida rara vez dan lugar a micosis
pulmonares invasoras, si no es en pacientes terminales, estando
presentes en las secreciones respiratorias del 20% de la población sana
y en más del 50% de los pacientes que han recibido antibioticoterapia.