El documento describe experimentos para demostrar la capacidad de diferentes bacterias para degradar proteínas y compuestos nitrogenados. Se realizaron pruebas de licuefacción de gelatina, producción de indol y ácido sulfhídrico, y degradación de urea. Los resultados mostraron que Pseudomonas puede hidrolizar la gelatina, E. coli y Citrobacter producen indol, y Proteus degrada la urea y produce ácido sulfhídrico.

1. METABOLISMO DE LAS
PROTEINAS
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERIA
E.A.P AGROINDUSTRIAL
GRUPO:
“B”
DOCENTE:
Blgo.Mblgo. Eterio Alva Muñoz
CÓDIGO: 0201212051
Alumno:
VEGA VIERA JHONAS ABNER.
CICLO:“IV”
2013
–

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METABOLISMO DE LAS PROTEINAS
I.
INTRODUCCION
Las bacterias son muy versátiles en la degradación de polímeros. Sin embargo, existen
microbios que son más activos frente a ciertos compuestos. Los proteolíticos, se caracterizan
por ser degradadores de proteínas en forma más activa que otras, de igual manera los amilos
líticos, los lipoliticos, hemolíticos, etc. Existen microorganismos que se comportan como
proteolíticos, amilo lítico, lipoliticos, etc. Debido a que tienen un sistema enzimático muy
versátil.
La degradación se puede demostrar por la aparición de unidades monómeras derivados de los
compuestos poliméricos, así, de las proteínas, se obtendrán aminoácidos, y a partir de estos
derivados como el indol, escatol, ácido sulfhídrico, amoniaco, etc. La degradación de
compuestos nitrogenados se evidencia por la aparición de amoniaco u otros compuestos.
Siempre que existan las condiciones adecuadas, el microorganismo y el sustrato a degradarse,
aparecerán compuestos producto de la degradación.
II.
OBJETIVOS
Demostrar la acción de las bacterias frente a compuestos poliméricos
nitrogenados, como proteínas, urea, etc.
Demostrar que no todas las bacterias tienen la capacidad de degradar
ciertos compuestos.
Observar la presencia de algunos compuestos de la degradación de
proteínas por medio de reactivos de lectura.
III. MATERIALES Y METODOS
MATERIAL:
3.1. Material biológico
Cultivos puros de Escherichiacoli, Pseudomonas y
Proteusvulgaris
3.2. Medios de cultivo
Medio Urea
Medio Gelatina
Caldo Tríptonado

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3.3. Material de vidrio
Placas Petri
Tubos de ensayo 13x100mm
3.4. Otros
Asa bacteriológica
Mechero, otros
METODOS:
 DEGRADACION DE PROTEINAS
Licuefacción de la gelatina. La gelatina es una proteína capaz de dar consistencia
solida al medio de cultivo a temperaturas cercanas a los 10ºC. Los microorganismos
capaces de degradarla gelatina quitan la propiedad solida a la temperatura
mencionada.
En los tubos conteniendo medio de gelatina se ha sembrado Pseudomonas y E.coli, se
ha llevado a incubar a 37ºC/24h, hacer las lecturas de licuefacción de la gelatina.
 PRODUCCION DE INDOL Y H2S
Ciertos microbios son capaces de degradar al triptófano en indol, otros en degradar
los aminoácidos azufrados y producir la liberación del ácido sulfhídrico (H2S) y
finalmente otros producen las dos cosas.
Se ha sembrado a E.coli, Citrobacter y Proteusvulgaris y se ha llevado a incubar a
37ºC/24h.Hacer las lecturas

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 DEGRADACION DE COMPUESTOS AMINADOS
Hidrolisis de la Urea. De la hidrolisis de la urea se libera el amoniaco y como resultado
el medio se torna alcalino haciendo virar el indicador de pH al color grosella. Se ha
sembrado Proteus y E.coli. Se ha llevado a incubar a 37ºC/24h. Hacer las lecturas.
4. PROCEDIMIENTO.
Agar Urea
o Sembramos Pseudomona, Proteus y E.Coli por medio de picadura y
estría.
Esterilizamos el asa
bacteriológica
POR PICADURA
Esterilizamos el tubo antes de
realizar la siembra
POR ESTRÍA

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Agar Gelatina
o Sembramos Pseudomona yE.Coli por medio de picadura.
Esterilizamos los instrumentos a usar antes de cada siembra mediante picadura
Agar Triptongado
o Sembramos Proteus y E.Coli por medio de puntura, usando la asa
bacteriológica de punta redonda.
Esterilizamos los instrumentos a usar antes de cada siembra mediantepuntura
(agitamos el asa de punta redonda dentro del tubo que contiene el agar
Triptonado)

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5. RESULTADOS
CALDO TRIPTONADO
 (Producción del Indol)
Positivo: anillo de color rosado a rojo tras agregarle el reactivo (E.coli),
(CitrobacterFreundii).
Negativo: Sin cambio de color tras el agregado del reactivo adecuado.
(Proteus).
La prueba del indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con
producción de Indol y metabolitos indólicos.
 (Producción de H2S)
Negativo: (E.coli), (CitrobacterFreundii).
Positivo: (Proteus).
DEGRADACIÓN DE COMPUESTOS AMINADOS
En la prueba con el agar urea podemos notar que el único microorganismo que
reacciona es el Proteusvulgaris, ya que este produce ureasa que es la enzima que
permite hidrolizar la urea. Por lo tanto el cambio de pH hará que cambie de color a
grosella lo que indica la liberación de amoniaco.

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AGAR GELATINA
Dejamos reposar 24h, luego llevamos a refrigerar de 3 a 4 horas.
Solo el tubo de ensayo que contenía Pseudomonas cambio de consistencia, ya que este
microorganismo puede hidrolizar la gelatina debido a que produce enzimas del tipo
proteolíticas (Licuando la gelatina). Sin embargo el tubo de ensayo que contenía E.coli se
conservó igual (consistencia gelatinosa), debido a que esta bacteria no es capaz de
hidrolizar la gelatina.

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RESULTADOS MOSTRADOS EN FOTOGRAFÍAS.
6. CUESTIONARIO
 ¿Qué importancia tiene el estudio de la degradación de proteínas?
La degradación proteica es un mecanismo esencial en varios procesos celulares, incluyendo
el ciclo celular, la regulación de la expresión génicay las respuestas al estrés oxidativo. La
importancia de la degradación proteica dentro de las células y el rol de la ubiquitina en dicho
proceso fue reconocido con el Premio Nobel de Química en 2004.
Cabe decir también que la degradación ayuda a las proteínas que van estropeando y es
necesario “reciclarlas” para crear otras nuevas. Continuamente se generan nuevas proteínas a
partir de antiguas, pero antes ha habido que desmontarlas.

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De este modo en 1970 y principios de 1980A.Ciechanover, A. Hershko e I.descubrieron y
caracterizaron el sistema de degradación de proteínas mediado por ubiquitina, ya que en esos
años, la investigación estaba centrada en el estudio de síntesis proteica y no se planteaba el
estudio de su degradación.
Y es que las proteínas se van estropeando y es necesario “reciclarlas” para crear otras nuevas.
Continuamente se generan nuevas proteínas a partir de antiguas, pero antes ha habido que
desmontarlas.
 ¿fundamente la hidrolisis de las proteínas en la formación de indol y
ácido sulfhídrico?
PRODUCCIÓN DE INDOL
El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptófano
también podemos decir que Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de las
bacterias para producir indol a partir del triptófano; en la que las bacterias que poseen la
triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol,
ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la
identificación de muchas especies de microorganismos. La prueba de indol está basada en la
formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del pdimetilaminobenzaldehído.
Este es el principio activo de los reactivos de Kovacs y Ehrlich descriptos más adelante. El
medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.
El indol, ácido pirúvico y amoniaco son uno de los productos de degradación metabólica del
aminoácido triptofano.
Qué compuestos se obtienen mediante la degradación del triptófano ocasionada por la acción
bacterial?
El enrojecimiento de la capa superficial del cultivo en tubo de ensayo ¿Qué le indica?
El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo, segundos
después de añadir el reactivo indica la presencia de indol y una prueba positiva.

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PRODUCCIÓN DE ÁCIDO SULFHÍDRICO
Muchas bacterias producen sulfuro de hidrógeno (sulfhídrico) a partir de aminoácidos
azufrados (cisteína o metionina) o tiosulfato.
El sulfuro de hidrógeno, denominado ácido sulfhídrico en disolución acuosa (H2Saq), es un
hidrácido de fórmula H2S. Este gas, más pesado que el aire, es inflamable, incoloro, tóxico,
odorífero: su olor es el de materia orgánica en descomposición, como de huevos podridos. A
pesar de ello, en el organismo humano desempeña funciones esenciales.
El ácido sulfhídrico se encuentra naturalmente en petróleo «crudo» (no procesado), gas
natural, gases volcánicos y manantiales de aguas termales. También puede existir en aguas
pantanosas, lagunas o aguas estancadas, desagües, estanques de harina o de aceite de
pescado, barcos pesqueros y alcantarillados.
 ¿Explique el cambio de color en la hidrolisis de la urea?
Ésta será degradada por aquellos microorganismos capaces de producir el enzima ureasa.
Esta degradación produce amoniaco que hará variar el color del indicador de amarillo a rojo,
poniéndose así de manifiesto la actividad ureasa.
Para revelar el resultado de esta prueba es importante tener en cuenta el tiempo de
incubación ya que especies de Proteus vuelven alcalino el medio poco después de la
inoculación y sus resultados deben ser leídos en las primeras 2-6 horas, mientras que
Citrobacterfreundii y Klebsiellapneumoniae tienen actividad ureasa dentro de las 24-48 horas
de incubación.
7. DISCUSIÓN
En esta prueba se pretende determinar la capacidad de un microorganismo de
producir enzimas de tipo proteolíticas (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la
gelatina o muestran cambios característicos debido a los productos de
degradación. La gelatina como proteína derivada del colágeno animal es
hidrolizada por la gelatinasa en sus aminoácidos constituidos, con pérdida de
sus características gelificantes.
Se genera el indol por una desaminación reductiva del triptófano vía la
molécula intermediaria ácido indolpirúvico. Las triptofanasas catalizan la
reacción de desaminación, durante el cual se remueve el grupo amino (NH2) de
la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son el indol,
ácido pirúvico, amoníaco (NH3) y energía.

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Cuando una bacteria contiene la enzima ureasa puede descomponer la urea.
Los productos de esta reacción de hidrólisis son el amoniaco y el dióxido de
carbono. Por sí mismo, esto no sería perceptible. Cuando la reacción se
produce en presencia de indicadores de pH, sin embargo, produce un color
perceptible. El amoníaco provoca un pH básico (alcalino) a desarrollar y el
indicador de pH cambiará, por lo tanto, de color. El indicador más comúnmente
utilizado para esta prueba es de color rojo fenol, que se vuelve de color rosa
después de la exposición al amoniaco.
8. CONCLUSIONES
Hay muchos tipos de bacterias. Algunas son dañinas, algunas son beneficiosas y otras
no son ni lo uno ni lo otro. La capacidad de distinguir entre estas bacterias es crucial
para la prevención y el tratamiento de enfermedades. A menudo, las bacterias pueden
ser identificadas por su capacidad para reaccionar con compuestos químicos. La urea
es uno de tales compuestos y la prueba de hidrólisis de la urea se utiliza para
distinguir unos grupos de bacterias de los otros.
9. BIBLIOGRAFIA
 http://microcereus.blogspot.com/2012/05/gelatina-nutritiva-peptona-yel.html
 http://books.google.com.pe/books?id=FYWSzy7EjR0C&pg=PA214&dq=pro
duccion+de+indol&hl=es&sa=X&ei=PhCcUrKUIYK3sASb0wE&ved=0CC4Q6
AEwAA#v=onepage&q=produccion%20de%20indol&f=false
 http://www.monografias.com/trabajos28/metabolismobacteriano/metabolismo-bacteriano.shtml
 MacFaddin, Jean F. "Biochemical Tests for Indentification of Medical
Bacteria." Williams &Wilkins, 1980, pp 173 - 183.
 PELCZAR. M. J, Introducción a la microbiología.