Factores de Identificación Bioquímicos Naturales - Hematología y Serología

1. EC2 Fase II: Detección e Identificación de
Características Físicas y Factores de
Identificación
Dr. Francisco Eliezer Sánchez Galván
Factores de Identificación Bioquímicos Naturales: Hematología y Serología

2. Biología Forense
La biología forense es la ciencia que estudia a los seres vivos o fluidos que,
eventualmente, puedan servir como evidencias materiales legales, en especial los
casos que llegan a un tribunal de justicia.
La biología forense comprende el estudio
sistemático de las huellas/indicios biológicos
dejados por el autor, autores o la víctima, para
identificar los indicios objetivos del hecho
delictuoso, determinar su relación con éste, con el
fin de apoyar técnica y científicamente en la
investigación policial y en la administración de
justicia.

4. BIOQUÍMICA
La BIOQUÍMICA es una rama de la ciencia que estudia la composición química de los seres
vivos, especialmente las biomoleculas (proteínas, carbohidratos, lípidos y ácidos
nucleicos), además de otras pequeñas moléculas presentes en las células y las reacciones
químicas que sufren estos compuestos (metabolismo).

5. La BIOQUÍMICA FORENSE es la rama de la bioquímica que se encarga del análisis,
clasificación e interpretación de las evidencias biológicas localizadas en la escena del
crimen, permitiendo arribar a una conclusión basada en las pruebas periciales realizadas
sobre esa pieza de evidencia, y así de esa manera poder reconstruir una escena con sus
respectivos actores o causantes de la misma.
Uno de los puntos más importantes en el trabajo de campo para el bioquímico forense es la
preservación del lugar de los hechos y la correcta recolección de las muestras
biológicos u orgánicas e inorgánicas, paso fundamental en el procedimiento, previo a la
recolección de evidencias se comienza por congelar cada paso con la fotografía y el
estudio planimétrico correspondiente, ya que un mal desempeño podría llevar a que se
pierda evidencia biológica importante como por ejemplo un cabello, una gota de sangre u otro
tipo de material biológico, el cual es rico en ADN.
BIOQUÍMICA FORENSE

6. Muestras Biológicas
Todo fluido corporal, restos de tejidos celulares, cabello o pelo, y otros, en las
escenas de crimen; luego de su análisis son pieza fundamental para resolver
problemas judiciales y forenses.
La función del biólogo o analista forense es la de examinar toda evidencia de
naturaleza u origen biológico que se pueda encontrar en las escenas del crimen.
También se encarga de identificar lo mejor posible sustancia biológica
analizada y compararlo con otras sustancias biológicas semejantes y con
muestras relacionadas con la victima o el sospechoso; y finalmente formular
un informe en el que este contenido una hipótesis de las circunstancias que
originaron su procedencia, con fines reconstructivos.

7. Muestras Biológicas

8. SANGRE

9. La hematología es el estudio de la sangre (componentes de la sangre, y sus desórdenes).
HEMATOLOGÍA
Se compone de:
1. Parte líquida o plasma.
2. Células en suspensión:
a) Glóbulos rojos
(eritrocitos)
b) Glóbulos blancos
(leucocitos)
c) Plaquetas
(trombocitos)

10. HEMATOLOGIA FORENSE
Se refiere al examen y análisis de la sangre relacionada con hechos presuntamente
delictuosos. Es la aplicación criminalística de la Morfología, Serología y Bioquímica de la
sangre.
La hematología forense se ha considerado como aquella aplicación de lo conocimientos
hematológicos, biológicos médicos y criminalísticos al campo forense, basado en el
estudio de la MORFOLOGÍA, SEROLOGÍA Y BIOQUÍMICA DE LA SANGRE; así como sus
requisitos legales en la colecta, preservación y análisis de las evidencias.
La Hematología Forense abarca todos los aspectos, tanto reconstructor, como identificador,
en el terreno no solo policial, penal, sino que, además, el civil, por los
problemas relacionados con la filiación.

11. HEMATOLOGIA FORENSE
Dentro del contexto forense sus dos grandes líneas de investigación son:
1) El aspecto reconstructor según la morfología de la
manchas de naturaleza hemática.
2) El aspecto identificador en el terreno policial, penal
y civil; en este último campo con el apoyo de la
genética resuelve problemas principalmente en los
casos de identificación humana, filiación y
paternidad.

12. Hematología de Reconstrucción
Estudio de las manchas hemáticas, permiten
deducir la dinámica o violencia que haya
presidido a su formación o depósito.
Es decir, si las mancha se formaron por
mecanismos de proyección, escurrimiento,
contacto, impregnación o limpieza.
Se puede realizar en el sitio del suceso, en la
morgue sobre el cuerpo humano sin vida o en el
laboratorio criminalístico.

13. Hematología de Reconstrucción
Su resultado arroja como se han producido los hechos:
• Posible arma empleada
• Ubicación de la víctima y victimario
• Movimientos realizados
• Volumen, patrones y morfologías
• Número y vínculo de las manchas con un sitio del suceso
• Otros aspectos de interés criminalísticos.
Dentro de este campo es importante determinar el ángulo de impacto, el ángulo de
dirección, las gotas satélites y el punto de origen, con el objetivo de interpretar los
patrones de las manchas de sangre.

14. Hematología de Reconstrucción

15. Hematología de Identificación
Se realiza en el laboratorio biológico para el análisis mediante procedimientos
metodológicos efectivos de la inmunología, bioquímica y física.
Determinando la naturaleza de la mancha (humana o animal), así como el grupo
sanguíneo y factor Rh.
Los métodos se pueden clasificar en:
1. De orientación
2. De certeza

16. 1. Pruebas de Orientación
Solo presume y orienta la existencia probable de un elemento o una sustancia.
Este tipo de prueba no individualiza, es decir, no determina que sea sangre, pero
en caso de ser positivo se deberá colectar para su posterior estudio en el
laboratorio biológico.
Ejemplo: un resultado positivo tras la
aplicación del reactivo de Kastle-Meyer, a
una mancha presuntamente hemática
dando una coloración fucsia.

17. Estas pruebas pueden ser muy sensibles: ya que
muchas veces las muestras pueden estar muy
diluidas pero aún se pueden obtener resultados
positivos que permitirán su posterior análisis.
Estas pruebas son poco específicas: porque además
de la sangre hay otras sustancias que son capaces
de reaccionar con estos reactivos, dando como
resultado un falso positivo.
1. Pruebas de Orientación

19. 2. Pruebas de Certeza
Estos métodos tiene la facultad de identificar e individualizar fehacientemente,
sin admitir ningún otro tipo de resultado.
• Confirmar presencia de sangre.
• Confirmar sangre de origen humano.
• Determinación del grupo sanguíneo (A, B, AB, O).
• Determinación de Factor Rh (+ ó -).

21. • Método físico: Inspección con lámpara de Wood o luz negra (luz UV).
El método físico consiste en la exposición de la mancha a la radiación
ultravioleta, la cual NO inducirá una luminiscencia, como sí ocurren con las
manchas de presunto fluido seminal.
1. Prueba de Orientación: Inspección con
Lámpara de Wood
Los fluidos biológicos como semen, saliva, orina y
flujo vaginal, son naturalmente fluorescentes
cuando se exponen a la luz bajo longitudes de onda
reportadas entre 320 nm (uv) y 700 nm (luz visible),
usando diferentes filtros de longitud.

22. Método físico: Inspección tras aplicación de luminol.
Cuando las manchas de sangre están ocultas (la superficie ha sido limpiada o por efectos
ambientales se ha diluido la muestra) se utiliza el ensayo de luminol.
El luminol reacciona con el hierro presente en la hemoglobina, una proteína de los glóbulos
rojos, dando lugar a la quimioluminiscencia azul intenso característica que oscila en un
tiempo de 30 segundos a unos 3 minutos. Desventaja: Requiere total oscuridad.
1. Prueba de Orientación: Reacción con
Luminol o Bluestar forensics®

23. Se ha utilizado el reactivo Bluestar forensics® que emite una quimioluminiscencia de
mayor intensidad y de larga duración donde se definen mejor los bordes de las manchas y
los patrones de formación (huellas de calzados por ejemplo); sin embargo, su principal ventaja
es que no requiere total oscuridad.
La aplicación del luminol o del Bluestar forensics® sobre la muestra de sangre no
interfiere en las pruebas de ADN posteriores.
1. Prueba de Orientación: Reacción con
Luminol o Bluestar forensics®

24. 1. Prueba de Orientación: Reacción con Luminol

25. 1. Prueba de Orientación: Reacción con Luminol
Reacción positiva con apariencia de sangre, sin serlo. Es el resultado de luminiscencia
producida por una sustancia diferente a la sangre.
1. PEROXIDASA VEGETAL O DE PLANTAS: Es necesaria la presencia de plantas o
material vegetal en una concentración muy alta.
2. OXIDANTES QUÍMICOS: Ésta categoría incluye productos químicos oxidantes,
primordialmente soluciones para la limpieza, como blanqueadores y soluciones
antisépticas como el cloro, yodo. Si una superficie sobre la que se ha derramado
sangre, fuera posteriormente limpiado con blanqueador, daría luminiscencia, y, a menos,
que se practicaran otras pruebas presuntivas como fenolftaleína o
tetrametilbencidina, para reforzar el luminol, sería difícil determinar si la reacción fue
producida por la sangre o el blanqueador.
3. CATALIZADORES QUÍMICOS: Ésta categoría incluye cobre y sus aleaciones y sales
de níquel, ésta brilla en la oscuridad. Sin embargo ésta reacción aparece como
chispeante en oposición a la reacción duradera que se observa con la sangre.

26. 1. Prueba de Orientación: Reacción con Luminol
Las manchas de sangre sobre los soportes no absorbentes como vidrio, mosaico, pintura de
autos pierden más rápidamente su poder de reacción del Luminol a medida que transcurre
el tiempo, a partir de las cuatro semanas y hasta el cuarto mes.
Soportes sometidos a lavados con agua el Luminol posee bastante sensibilidad. La acción
del agua con la prueba del luminol persiste inclusive hasta 5 lavados.
Soportes sometidas a varios lavados con detergentes químicos no tienen la misma
sensibilidad. La acción de detergentes en polvo o jabón con la prueba del luminol todavía
persiste hasta el segundo lavado.

27. 1. Prueba de Orientación: Prueba con Lucerol
Método físico: Inspección con Luz UV tras aplicación de
lucerol.
A diferencia de lo que ocurre con el luminol, la reacción es de
color entre amarillo y oliva.
La reacicón no requiere total oscuridad para su
visualización.
El tiempo de duración de la fluorescencia perdura mientras
se estimulen las manchas con el uso de la lámpara de luz
UV y lentes de color ámbar.

28. 1. Prueba de Orientación: Reacción de Schönbein
En 1863, Schönbein describió un método que está basado en comprobar si la muestra contenía o no
catalasas añadiendo peróxido de hidrógeno (agua oxigrenada).
Las catalasas son enzimas que se encuentran en la sangre, la médula ósea, la mucosa, el riñón y
el hígado.
Al añadir agua oxigenada a una muestra que contenga
catalasas, se produce un aumento de la temperatura de la
solución y la formación de burbujas.
Esta reacción se produce más débilmente cuando se realiza
con sangre putrefacta, y también si la muestra ha sido
sometida a altas temperaturas o tratada con ácidos
minerales, ya que éstos destruyen las catalasas.
Por otra parte es una prueba poco específica puesto que
existen numerosos productos que poseen catalasas y que
por lo tanto darían positiva la reacción.

29. 1. Prueba de Orientación: Métodos Colorimétricos
MÉTODOS COLORIMÉTRICOS: Determinación de la presencia de un elemento o sustrato en una
solución, basados en la aparición de determinados colores.
Este método se basa en la presencia en la sangre de peroxidasas que son capaces de descomponer
el peróxido de hidrógeno desprendiendo oxígeno que oxida a una leucobase originando una
coloración característica dependiendo del reactivo.
a) Reactivo de Kohn-O´Kelly (ortotoluidina): Vira a azul
turquesa (20 % de falsos positivos)
a) Reactivo de Kastle-Meyer (fenolftaleína): Vira a fucsia
(40 % de falsos positivos).

30. 2. Prueba de Certeza: Método Microscópico
Un frotis de la presunta sangre líquida o proveniente de un macerado con solución salina
permite ver los componentes celulares característicos de la sangre (glóbulos rojos, glóbulos
blancos y plaquetas), esto dependerá del estado de conservación de la evidencia. Son pocos los
casos donde se logra realizar este método.
La presencia de glóbulos rojos anucleados pueden indicar que la sangre provenga de un
mamífero, ya que éstos al llegar a la madurez no poseen núcleo (Ver fig. F).
Sin embargo, la presencia del núcleo en los glóbulos
rojos puede indicar que la sangre provenga de anfibio,
reptil o ave (Ver fig. G).
La presencia del núcleo en los glóbulos blancos
permiten obtener ADN, para la individualización de la
sangre mediante la experticia genética.

31. Consisten en la aplicación del reactivo sobre el extracto de la mancha de presunto origen
hemático, que inducen la formación de microcristales, que pueden luego ser observados bajo
el microscopio óptico.
a) ENSAYO DE TEICHMAN: En presencia de cloruro de sodio, el ácido acético transforma la
hemoglobina en hemina o clorhidrato de hematina, que se presenta al microscopio
óptico bajo el aspecto de cristales alargados de color pardo oscuro (Ver fig. H). Este
ensayo es el más utilizado por la facilidad en el método y en la disponibilidad de los reactivos.
2. Prueba de Certeza: Método Cristalográfico

32. b) ENSAYO DE TAKAYAMA: La hemoglobina de la sangre al ponerse en contacto con el
reactivo de Takayama se transforma en cristales de hemocromógenos de color naranja y
formas arborescentes.
2. Prueba de Certeza: Método Cristalográfico

33. SEROLOGIA FORENSE
SEROLOGÍA: Estudio de las reacciones sucedidas en antígenos y anticuerpos in vitro.
Un examen serológico se realiza para determinar el tipo de sangre de un paciente y para
detectar e identificar una infección, dándole a la serología aplicaciones en los campos de
salud y desde luego en la criminalística.
SEROLOGÍA FORENSE: Consiste en la identificación y caracterización de la sangre y
otros fluidos del cuerpo (sangre, semen, saliva, sudor, humor vítreo), en los laboratorios
criminalísticas específicos.
También puede abarcar elementos para suministrar información importante respecto al número
de protagonistas intervinientes, de sus desplazamientos, de las circunstancias causantes del
hecho, de la relación entre diversos objetos y el hecho criminal.

34. SEROLOGIA FORENSE
En esta ciencia las personas se pueden determinar por secretores y no secretores los cuales
son:
a) SECRETORES: (El 80% de la población) son personas que en sus fluidos corporales
como saliva, semen o líquidos vaginales se pueden determinar también las mismas
características de grupo (ABO) que en su sangre.
b) NO SECRETORES: Son las personas que no exhiben estas características, son un
porcentaje mínimo en la población.

35. El grupo sanguíneo es una clasificación de la sangre de acuerdo a las características
(proteínas) presentes o ausentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la
sangre, determinándose el grupo sanguíneo (A, B, AB y O), y el factor Rh (+ o -), mediante
el ensayo antígeno-anticuerpo.
2. Prueba de Certeza: Ensayo Antígeno-Anticuerpo

36. 2. Prueba de Certeza: Ensayo Antígeno-Anticuerpo

37. El grupo sanguíneo (A, B, AB y O), y el factor Rh (+ o -), pueden conocerse mediante el
ensayo antígeno-anticuerpo un método directo en muestras de sangre fresca.
2. Prueba de Certeza: Ensayo Antígeno-Anticuerpo

38. En sangre seca en forma de costra se utiliza el método de absorción-elución (método indirecto).
Este metodo se usa debido a que las machas secas, los glóbulos rojos han presentado
aglutinación en la mayoría de los casos, por lo tanto las pruebas de aglutinación directa no son
viables.
2. Prueba de Certeza: Ensayo Antígeno-Anticuerpo
Sin embargo, los antígenos del sistema ABO no se
desnaturalizan rápidamente debido a la deshidratación de las
células, conservando la capacidad de aglutinación antes
mencionadas.
Los antígenos se pueden extraer hidratando la muestra
mediante un proceso de absorción, y luego sacandolos
aplicando calor para que se desprendan sus componentes en un
procedimientos que se conoce como elución.
La técnica de absorción-elución es actualmente la más
satisfactoria para la determinación del sistema ABO en manchas
de sangre seca y se reporta, que puede usarse también para el
sistema Rh.

39. Test inmunocromatográfico para la detección de sangre humana.
Usa los antígenos de la hemoglobina humana (Hbh) , los cuales son útiles para el estudio forense
de una mancha de sangre.
Si hay presencia de hemoglobina humana (hHb) en la muestra , reaccionará con el anticuerpo
monoclonal anti hemoglobina humana móvil y se formará un complejo antigeno-anticuerpo
móvil.
2. Prueba de Certeza: Pruebas Inmunocromatográficas
Alta sensibilidad y especificidad; resultados
rápidos, óptimos y confiables, ya que en algunos
casos las muestras se encuentran, bien sea, en
mínima cantidad, contaminadas o muy diluidas, por
lo cual su detección por otro método podría ser mas
difícil.

40. Semen

41. Semen
El semen es un líquido viscoso y blanco que el hombre empieza a producir durante su pubertad.
El semen como estudio de la serología forense en una escena del crimen es limitado a
comparación de otros fluidos pues las posibilidades de encontrarlo en la misma son
mínimas, La mayoría de las veces el semen solo se puede asociar a un tipo de delitos.
Para localizar sus restos será factible utilizar la luz ultravioleta. El levantamiento y embalaje se
harán de la misma forma que la propuesta para los restos de sangre.
Si el sujeto es una persona denominada secretora se podrá también determinar el grupo
sanguíneo y la mayoría de las veces en él se puede encontrar material genético por los
espermatozoides.
Su identificación es por medio de metodos químicos y microscópicos en muestras obtenidas
de la vagina o ropa de la víctima, puede ser de valor para corroborar los dichos de ella.

42. Semen
La recolección del líquido seminal que se encuentra en el cuerpo de la víctima solo lo debe
hacer un médico forense y en una clínica especializada.
Una vez realizada la identificación analítica podremos obtener, al igual que con los restos de
sangre, un diagnóstico genérico –saber si es esperma–, específico –saber si es humano–, e
individual –de quién es–.
Al semen se lo identifica microscópicamente donde hay células de esperma, o bien
cuando están presentes (hablando en ambos casos de manchas secas sometidas a estudio)
proteínas específicas del semen asociadas con el semen humano, conocido como p30 o
antígeno prostático.
El esperma permite la obtención de ADN suficiente para lograr una correcta
identificación.

43. Semen
• Prueba de Fosfatasa Ácida
• Determinación de proteína P-30 (antígeno prostático específico) en líquido
seminal humano.
• Observación microscopia de espermatozoides mediante el protocolo de
tinción “árbol de navidad”
Cambio de Coloración
Prueba Inmunológica
Observación Microscópica

44. Semen
Confirmación de Semen
Fosfatasa ácida
Proteína P-30
Observación
microscópica de
espermatozoides
Confirmación de Semen
Fosfatasa ácida
Proteína P-30
Observación
microscópica de
espermatozoides
Negación de Semen
Fosfatasa ácida
*Debe ser realizada en un lapso
menor a 10 horas.
Prueba Consideraciones
Fosfatasa ácida
Falsos positivos debido a contaminaciones de origen bacteriano como pueden ser E. Coli, Proteus y
levaduras.
Proteína P-30
Proteína P-30 no es exclusiva del semen, también se encuentra en presente en orina femenina,
leche materna, líquido amniótico, pero en menores cantidades.
Observación
microscópica de
espermatozoides
sí las muestras no provienen del cuerpo de la víctima sino de indicios no se pueden visualizar
completos, solo se observará la cabeza y es necesario centrifugar la muestra para concentrarla.
La ausencia del espermatozoide no descarta que el fluido sea semen porque éstos se destruyen con
facilidad y el posible responsable puede ser oligospérmico (poca cantidad de espermatozoides), o
azoospermico (ausencia de espermatozoides).

45. Otros Fluidos
• DETERMINACIÓN FORENSE DE SALIVA: Dada la naturaleza del fluido no es común
encontrarlo en una escena del crimen pues, para ser detectado tendría que estar concentrado
en una cantidad abundante o buscar objetos específicos en la escena del crimen. La utilidad
actual de la saliva es la de sustituir a la sangre al momento de tomar muestras de algún
individuo.
• DETERMINACION FORENSE DE ORINA: Su aplicación es más importante en materias como
la toxicología y test de control de dopaje. la orina no es materia de estudio de la Serología
sino más bien del área de Toxicología.
• DETERMINACIÓN FORENSE DE GONADOTROPINA CORIÓNICA HUMANA (HCG): Es una
hormona que aparece cuando haya ocurrido la fertilización. Se puede detectar en muestras de
orina y de sangre. La HCG en orina proporciona una indicación temprana del embarazo.
• FLUIDOS VAGINALES: Es casi imposible que se puedan hallar en una escena del crimen, las
veces que se utiliza por peritos es en prendas de víctimas para poder identificarlas.