Este documento describe siete técnicas de análisis confirmatorias para detectar manchas de sangre, incluyendo el ensayo del luminol, pruebas microscópicas, identificación espectroscópica, identificación espectrofotométrica, identificación cromatográfica, transformación de porfirinas y ensayos microcristalográficos. Cada técnica se describe brevemente en términos de su fundamento, metodología y aplicación para la detección e identificación de manchas de sangre.

1. Unidad III:
Pericias Químicas de Manchas de Sangre
Parte 3

2. Ensayos confirmatorios
1. Ensayo del Luminol
2. Pruebas microscópicas
3. Identificación espectroscópica
4. Identificación espectrofotométrica
5. Identificación cromatográfica
6. Transformación de porfirinas
7. Ensayos microcristalográficos

3. 1. Ensayo del Luminol

4. 1. Ensayo del Luminol

5. 1. Ensayo del Luminol
Esta técnica es altamente sensible
a la presencia de manchas que han
sido limpiadas.
También se emplea para visualizar
huellas sanguinolentas de zapatos
dejadas en la escena del delito.

6. 1. Ensayo del Luminol
• derivado del ácido ftálico (3-aminonaftilhidracina)
• sólido verdoso poco soluble
• reacción de quimioluminiscencia con
peróxidos en presencia de complejos de
Fe como catalizadores.
• usada para la visualización de manchas
tan diluidas que son invisibles al examen
ocular directo

7. 1. Ensayo del Luminol
Este producto puede ser preparado en
el laboratorio ó bien adquirido en su
preparación comercial.
Laboratorio: presenta la dificultad de
ser difícil de preparar y estabilizar.

8. 1. Ensayo del Luminol
Método
Altamente sensible
Específico
Permite tratar rápidamente grandes
superficies y localizar manchas
invisibles al examen ocular directo.
No interfiere en la ejecución de
ensayos similares.

9. 1. Ensayo del Luminol
Se aplica por aspersión sobre la zona
donde se cree puede existir un rastro
de sangre, de donde viene su principal
ventaja: se puede aplicar en extensas
superficies, detectando sangre hasta a
nivel de trazas.

13. Hexagon OBTI®
es una prueba inmunocromatográfica de confirmación de
la presencia de trazas de sangre humana.
Se comercializa como complemento de BLUESTAR®.
Es una prueba muy simple de usar.
DOS ó TRES minutos son suficientes para comprobar,
si la traza revelada por BLUESTAR® es o no sangre
humana.
La hemoglobina humana (hHb), reacciona con un
conjugado compuesto de partículas azuladas y
anticuerpos monoclonales de hemoglobina
humana.

14. 2. Pruebas microscópicas
• Puede usarse aún en manchas secas
• Método:
a.Tinción con colorantes hemáticos
apropiados ( MG-G)
b.Observación al MO.
Dificultad: mamíferos: carnero, vacuno,
equino.

15. 2. Pruebas microscópicas
vaso
humana
MO sangre menstrual
animal
mamífero
 Pruebas de aglutinación ( grupo y factor:
GR intactos).

16. 3.Identificación espectroscópica
• Método: comparación visual con un
patrón
• Coloración de la hemoglobina en medio
ácido
HCl
Hb hematina +

17. • Método de Sahli:
Reactivo: HCl = 11,2 ml
H2Od csp 1000 ml
reactivo
muestra

18. 4.Identificación espectrofotométrica
• Fundamento:
Hb MetaHb CianmetaHb
NaHCO3= 1g
KCN = 0,05 g
reactivo de Drabkin FeCNK= 0,2 g
H2Od csp= 1000ml
reactivo
muestra
Filtro verde
540 nm

19. 5. Identificación cromatográfica
• Cromatografía sobre papel.
• Técnica resolutiva, específica,práctica
y sensible.
• No interfieren: citocromos,herrumbre,
oxidantes directos, sales metálicas
• Peroxidasa vegetales: se destruyen
por tratamiento térmico a 100º - 10 ‘

20. 5. Identificación cromatográfica
Cromatografía en capa delgada
Materiales: Placas de vidrio
Placas de Silicagel G
Líquido resolutivo: MetOH- AcAc= 99:1
Revelador: mezclar al momento de usar,
volúmenes iguales de sol. de bencidina
(acética o alcohólica) +H2O2 10 Vol
Técnica: se recomienda usar placas
compradas.

21. 7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1g
Reactivo Glicerol= 5ml
AcAc g= 20 ml
H2O d= 1ml
flamear

22. 7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1g
Reactivo Glicerol= 5ml
AcAc g= 20 ml
H2O d= 1ml
flamear

23. 5. Identificación cromatografica
Mancha: tratarla con 0,5 ml de H2Od,
macerar hasta obtención del pigmento
hemático
Machas antiguas: HCl 0,02N: hematina
ácida.
Cromatografía ascendente

24. 6. Transformación de porfirinas
mancha Luz de Wood: filtro azul
H2SO4 c
fluorescencia
fluorescencia
semen sangre

25. 7.Ensayos microcristalográficos
Fundamento: obtener derivados de
descomposición de la Hb de forma y
color definidos realizando tratamientos
adecuados con reactivos H+ o HO-

26. 7.Ensayos microcristalográficos
•Método de Teichmann: al tratar la
muestra de sangre con AcAc aparecerán
cristales castaños característicos
60 º

27. 7.Ensayos microcristalográficos
a. Modificación de Bertrand
MgCl2= 1g
Reactivo Glicerol= 5ml
AcAc g= 20 ml
H2O d= 1ml
flamear

28. 7.Ensayos microcristalográficos
b. Modificación de Nippe
KCl= 0,1g
Reactivo KBr= 0,1g
KI=0,1g
AcAc=100ml
flamear

29. 7.Ensayos microcristalográficos
c. Modificación de Bruno y Ross
FNa = 0,056g
Reactivo AcAcg = 100ml
H2O d= 1ml
flamear