Prueba de Luminol

1. Aplicación de luminol en huellas de escena del crimen William Ivan Alejandro LLANOS TORRICO Julio de 2.010

4. Tipos de indicios

5. Sangre: Sustancia viscosa, roja y espesa, presente en el sistema circulatorio (arterias, arteriolas, capilares y venas), constituidas por una parte líquida o plasma y una parte de elementos celulares (hematíes, leucocitos y plaquetas).

9. Composición Fracción Líquida Fracción Sólida (Elementos Celulares) Agua – 90% Sólidos – 10% Proteínas. Lípidos. Glúcidos. Sales Minerales. Enzimas. Glóbulos Rojos. Glóbulos Blancos. Plaquetas. Sangre:

12. Hemoglobina: Estructura: Cromoproteína PM 64.500 – 96% Globina – 4% Hemo Globina: Fracción proteica constituida por cuatro cadenas polipeptídicas. Hemo: Núcleo porfirínico formado por cuatro grupos pirroles unidos por puentes de meteno (=C) que constituyen anillos tetrapirrólicos. 16 Isómeros – Nº 9 presente en elementos biológicos. Un átomo de hierro está ligado a los cuatro nitrógenos en el centro del anillo. 1 Molécula de Hemo = 4 Grupos Hemo.

18. Naturaleza Sanguínea: Métodos de Orientación: ¿Es Sangre? TÉCNICA INDICADOR SEÑAL SENSIBILIDAD Adler Bencidina Azul Intenso 1 / 200.000 O - Tolidina Orto – Tolidina Azul Verdoso 1 / 200.000 Medinger Verde de Malaquita (leuco derivado) Verde 1 / 1.000.000 K – Meyer Fenolftaleína Rojo 1 / 1.000.000 Luminol Hidracida del Ácido Alfa Amino ftálico Quimioluminiscencia blanco azulada 1 / 5.000.000

20. Microquímicos Teichmann -> Cristales de Clorhidrato de Hematina. Métodos de Certeza: Takayama -> Cristales de Hemocromógeno. Guarino -> Cristales de Hematoporfirina (Ácida – Alcalina).

21. Métodos Determinación de Especie: Uhlenhutt : Proteínas Séricas (Halo Isogenético). Hexagon Obti – Test (Banda Azul) : Hemoglobina Humana Sub Tipos HbAo, HbA 2 , Hb F y Hb S. Histológicos Bioquímicos ADN

23. Sistema ABO: Antecedentes Antígenos A Aglutinógenos B α -> Alfa – Anti A β -> Beta – Anti B Anticuerpos Test de Landsteiner Incompatibilidad Sanguínea

24. LA PRUEBA DE LUMINOL Fe

25. LUMINOL El Luminol químicamente denominado como: 3 aminophtalahidrazida (5-amino-2, 3-dihidro-phthalazino-1,4-diona) fue sintetizada por Smicthz en el año de 1902, comprobando a la vez, que esta sustancia produce una brillante quimioluminiscencia (producción de luz por reacción química: Una fuerte luz fluorescente azul en soluciones ácidas con pH menor de 7).

26. Posteriormente, en el año de 1927 otro investigador de apellido Lommel , observó dicha quimioluminiscencia después de la oxidación del compuesto en medio alcalino (Soluciones con pH mayores de 7). En 1934 el investigador Albrecht denominó a este compuesto LUMINOL , por las propiedades quimioluminiscentes que presentaba. Además descubre que la reacción quimioluminiscente se da en presencia del peróxido de hidrógeno. En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol presentaba luminiscencia en presencia de sangre . Esto es debido a la capacidad peroxidásica de la hemoglobina .

27. Posteriormente, en el año de 1927 otro investigador de apellido Lommel , observó dicha quimioluminiscencia después de la oxidación del compuesto en medio alcalino (Soluciones con pH mayores de 7). En 1934 el investigador Albrecht denominó a este compuesto LUMINOL , por las propiedades quimioluminiscentes que presentaba. Además descubre que la reacción quimioluminiscente se da en presencia del peróxido de hidrógeno. En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol presentaba luminiscencia en presencia de sangre . Esto es debido a la capacidad peroxidásica de la hemoglobina .

28. En el año de 1937 se reportó la primera aplicación forense del Luminol, como prueba presuntiva de detección de sangre, dicho ensayo fue realizado por Walter Specht. Este investigador roció sangre en varios substratos como paredes, gradas, piedras, y tierra dejándola expuesta por 14 días a las condiciones ambientales. Seguidamente aplicó el Luminol y fotografió los resultados. Todas las áreas que contenían manchas de sangre presentaron luminiscencia que perduró por 15 minutos. En esta ocasión el Luminol funcionó bien con manchas de sangre frescas y viejas; se observó mayor respuesta quimioluminiscente en las manchas de sangre viejas, que en las manchas frescas o nuevas.

29. En el año de 1939, los investigadores Moody y Proescher , basándose en la investigación de Specht , aplicaron el Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenían manchas de sangre de tres años de antigüedad, obteniendo resultados satisfactorios. En 1942, McGrath , recomendó el uso de la prueba de Luminol , para la detección de sangre, él notó que las manchas de sangre viejas, daban respuestas más fuertes y prolongas, debido a que en estas, hay una mayor concentración de metahemoglobina y hemática.

30. Los investigadores Lytle y Hedgecock , en el año de 1978 estudiaron los efectos del Luminol en solución alcalina, en la sangre detectada por la prueba, concluyendo que no afectaba la actividad enzimática de los eritrocitos, pero no reportan los efectos del reactivo en la determinación de grupo ABO en las manchas, ni análisis de marcadores genéticos ( ADN) . La prueba de Luminol es extremadamente sensible en la detección de sangre. En 1986 Thornton y colaboradores detectaron luminiscencia, a simple vista, proveniente de sangre que fue diluida 1:10000 partes .

31. En el año de 1939, los investigadores Moody y Proescher , basándose en la investigación de Specht , aplicaron el Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenían manchas de sangre de tres años de antigüedad, obteniendo resultados satisfactorios. En 1942, McGrath , recomendó el uso de la prueba de Luminol , para la detección de sangre, él notó que las manchas de sangre viejas, daban respuestas más fuertes y prolongas, debido a que en estas, hay una mayor concentración de metahemoglobina y hemática.

33. 1. Carbonato de Sodio 2. Perborato de Sodio Trihidratado 3. Luminol (5-amino-2,3-dihydrophthalazine 1,4-dione) Reactivos utilizados para la prueba de luminol

34. 1. Pesar 3,5 gramos de Perborato de Sodio en una balanza analítica. Depositar la medida en un beaker de 1.000 ml de volumen. 2. Pesar 25 gramos de Carbonato de Sodio y 0,5 gramos de Luminol en una balanza analítica y colocarlos juntos en un recipiente limpio. 3. Medir un volumen de agua destilada de 500 ml con una probeta de 1.000 ml de capacidad. Preparación del reactivo

35. 4. Agregar los 500 ml de agua destilada al beaker con los 3,5 gramos de Perborato de Sodio . 5. Agitar hasta disolver por completo. 6. Agregar a esta solución la medida de Carbonato de Sodio y Luminol . 7. Agitar hasta disolver por completo. 8. Verter la solución disuelta en el atomizador. Preparación del reactivo

43. La fotografía en la Prueba del Luminol es de suma importancia para la investigación criminalística, ya que ella muestra toda la labor realizada por el equipo de aplicación, como a la vez permitirá al juzgador en el proceso del debate, como se manifestaron las manchas de sangre, su dinámica, arrastre, etc. Fotografía de la prueba luminol

45. Comparación con reactivos para pruebas de campo de sangre - Fluoresceina - Bluestar - Luminol

46. Pruebas comparativas

47. Sangre lavada y repintada FLUORESCEINA BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s

48. Sangre lavada y limpiada del piso FLUORESCEINA BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s

49. Sangre lavada en alfombra FLUORESCEIN BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s

50. Sangre lavada con detergente para ropa FLUORESCEINA BLUESTAR Tiempo de exposición: 20 s LUMINOL Tiempo de exposición: 1 m 15 s

51. Gracias