Separación cromatográfica de pigmentos fotosintéticos
1. LABORATORIO N°5
Extracion y separación de pigmentos fotosintéticos
-Ana Carolina Pulido
-Juan Camilo Cadavid
-Alexander Cardenas
-Raul Castañeda
OBJETIVOS
Por medio del papel de cromatografía separar los pigmentos fotosintéticos.
Mostrar la separación de los pigmentos de las plantas mediante
cromatografía mono o bidimensional.
Comparar los pigmentos obtenidos.
Calcular el frente de migración de los pigmentos estudiados.
DESARROLLO
1. Extracción de pigmentos con éter, metanol y acetona
colocar las hojas en el mortero
añadir 20cm3 de eter, metanol y acetona respectivamente
trituras las muestras hasta extraer color
filtrar el liquido y vertir en una proveta
introducir el papel comatografico
esperar 30 minutos y retirar
2. MARCO TEORICO
Pasto común (rygrass perenne)- lolium perenne l.
Características morfologicas: especie perenne, tanto mas cuanto mas
favorables sean las condiciones (nutrición mineral y humedad ) con
sistema radical fibroso poco profundo, formando matas tiernas cespitosas
muy masculadoras y foliosas.
Ciclo: con un marcado poco
primaveral. En veranos frescos y
húmedos puede producir una
interesante cantidad de forraje,
aunque esto no es frecuente.
Adaptación: clima templado, templado
frio, poca tolerancia a sequias.
Precipitaciones: mas de 750mm y bien
distribuidos a lo largo del año.
Suelos: exigente en fertilidad,
adaptándose a suelos tanto francos
como franco orallosos y de pH
cercano a la neutralidad.
Croto (codiaeumvariegatum)
Luz: la iluminación debe ser intensa
para mantener vivos los colores.
Temperatura: es importante que no
produzcan cambios bruscos de
temperatura.
Humedad: necesita mucha humedad.
Riego: dos o tres veces por semana
en verano y primavera, cuatro o cinco
días en invierno con agua tibia.
Abono: cada 15 dias de crecimiento,
abono en agua.
3. Éter de petróleo
es una mezcla líquida de diversos compuestos volátiles, muy inflamables, de
la serie homóloga de los hidrocarburos saturados o alcanos, y no a la serie de los
éteres como erróneamente indica su nombre. Se emplea principalmente
como disolvente no polar.
Uso de la sustancia o preparado:Para usos de laboratorio, análisis,
investigación y química fina.
Identificación de Riesgos: Fácilmente inflamable. Irrita la piel. Nocivo: riesgo
de efectos graves para la salud en caso de exposición prolongada por
inhalación. Tóxico para los organismos acuáticos, puede provocar a largo
plazo efectos negativos en el medio ambiente acuático. Posible riesgo de
perjudicar la fertilidad. Nocivo: si se ingiere puede causar daño pulmonar.
La inhalación de vapores puede provocar somnolencia y vértigo.
Propiedades Físicas y Químicas Aspecto:
Líquido transparente e incoloro.
Olor: Característico.
Punto de ebullición :60-80°C
Punto de inflamación : -20°C
Temperatura de auto ignición : 250°C
Límites de explosión (inferior/superior): 0,6 / 8 Vol. %
Presión de vapor: (20°C) 350 hPa
Densidad (20/4): 0,67
Solubilidad: Inmiscible con agua.
Metanol
El metanol es el principal componente del destilado en seco de la madera. Es uno
de los disolventes más universales y encuentra aplicación, tanto en el campo
industrial como en diversos productos de uso doméstico.Dentro de los productos
que lo pueden contener se encuentra el denominado “alcohol de quemar”
constituido por alcoholes metílico y etílico, solvente en barnices, tintura de
zapatos, limpiavidrios, líquido anticongelante, solvente para lacas etc. Además, los
combustibles sólidos envasados también contienen metanol.
4. Este alcohol se utiliza también para degradar soluciones de alcohol etílico, lo que
ha dado lugar a numerosas intoxicaciones de carácter masivo dado el uso
fraudulento de estas mezclas en bebidas alcohólicas.
La fermentación de jugos azucarados implementada para la obtención de bebidas
alcohólicas, además de etanol, produce también cantidades variables de metanol
y otros compuestos volátiles. El contenido de metanol en vino tinto es de 43 122
mg metanol/l, en vino blanco 38 118 mg/ml, en brandy 1500 mg/l, en wisky 1000
mg/l y en ron 800 mg/l.
Metabolismo
El alcohol metílico se absorbe por todas las vías (oral, dérmica y respiratoria),
aunque la absorción por piel difícilmente pueda dar lugar a intoxicaciones agudas.
Con frecuencia se plantea el problema bajo la forma de intoxicación crónica. Su
carácter irritante genera frecuentes lesiones de entrada, muy típicas en la
contaminación crónica por vía respiratoria, como bronquitis crónicas,
frecuentemente con componentes asmatiformes, y alteraciones en la mucosa de
las vías respiratorias altas. Esta vía de absorción es propia de los lugares de
trabajo.
El metanol se distribuye rápidamente en los tejidos de acuerdo al contenido
acuoso de los mismos. El volumen de distribución es de 0.6 l/Kg de peso. La
mayor parte del metanol circula en el agua plasmática.
Una vez absorbido se dirige al hígado donde sufre procesos de oxidación a una
velocidad 7 veces menor comparada con las del alcohol etílico o etanol. La enzima
responsable de su transformación es la alcohol deshidrogenasa que lo oxida a
formaldehído y éste a su vez es oxidado a ácido fórmico por la aldehído
deshidrogenasa.
La eliminación se realiza lentamente por vía respiratoria a través de los pulmones,
pudiendo permanecer en el organismo hasta 4 días después de una dosis única.
Alrededor de 3 a 5% se elimina sin metabolizar.
Acetona
La acetona o propanona es un compuesto químico de fórmula
química CH3(CO)CH3 del grupo de las cetonas que se encuentra naturalmente en
el medio ambiente. A temperatura ambiente se presenta como un líquido incoloro
de olor característico. Se evapora fácilmente, es inflamable y es soluble en agua.
La acetona sintetizada se usa en la fabricación
5. de plásticos, fibras, medicamentos y otros productos químicos, así como
disolvente de otras sustancias químicas.
DESARROLLO
MUESTRA SOLVENTE NOMBRE DEL COEFICIENTE DE
PIGMENTO REPARTO DE
MIGRACION Rf
Rygrass Perenne Éter
Metanol
Acetona
CodiaeumVariegatum Éter
Metanol
Acetona
6. Cuestionario
E. es conocido que la clorofila a, disuelta en acetona exhibe un máximo de
absorción de 663nm, sin embargo en células enteras presenta varios máximos de
absorción 660, 670, 680, 685, 690 y 700-720 ¿Qué significado tiene este hecho?
Señale por lo menos tres razones que expliquen lo anterior
Solución:
Absorbencia de las clorofilas a y b a distintas longitudes de onda. Puede verse
que absorben los colores de los extremos del arco iris (hacia el azul y el rojo), pero
no el verde, de lo que procede su color.Las clorofilas tienen típicamente dos picos
de absorción en el espectro visible, uno en el entorno de la luz azul (400-500 nm
de longitud de onda), y otro en la zona roja del espectro (600-700 nm); sin
embargo reflejan la parte media del espectro, la más nutrida y correspondiente al
color verde (500-600 nm). Esta es la razón por la que las clorofilas tienen color
verde y se lo confieren a los organismos, o a aquellos tejidos, que tienen
cloroplastos activos en sus células, así como a los paisajes que forman.
Fuera de las plantas verdes, que son de este color, las clorofilas van
acompañadas de grandes cantidades de pigmentos auxiliares, principalmente
carotenoides y ficobilinas, que son de distinto color y dominan el conjunto, tiñendo
al organismo de colores como el amarillo dorado típico de los cromófitos, o el rojo
púrpura de las algas rojas.
F. los carotenoides o tretapenoides son una clase de terpenoides compuestos por
cuarenta atomos de carbono derivados biosinteticamente de dos unidades de
geranio geraniltirosfosfato. ¿Estos pigmentos son solubles en solventes no polares
o apolares? ¿Cuáles pigmentos pertenecen a este grupo?
solucion
Generalmente son solubles en solventes apolares y de coloración que oscilan
entre amarillo(por ejemplo el beta-caroteno) y el rojo (por ejemplo el licopeno)
existen gran cantidad de carotenos alrededor de unos 600 dentro de los
carotenoides están dos variedades los carotenos y las xantofilas.
7. G.se sabe que muchas de las proteínas presentes en la membrana se mueven
hacia los lados de la bicapa lipídica, y otras permanecen fijas formando complejos,
mencione un grupo característico de este grupo
solucion
Integrales o Intrínsecas : Presentan regiones hidrófobas, por las que se pueden
asociar al interior de la membrana y regiones hidrófilas que se sitúan hacia el
exterior, por consiguiente, son anfipáticas. Solo se pueden separar de la bicapa si
esta es destruida (por ejemplo con un detergente neutro). Algunas de éstas,
presentan carbohidratos unidos a ellas covalentemente (glucoproteínas ).
Tipos de proteínas integrales
Proteínas integrales transmembrana
Se distingue de otros tipos de proteínas integrales de membrana en que atraviesa
la bicapa de parte a parte, y por tanto además del dominio transmembrana a partir
del cual se une mediante fuerzas hidrófobas al interior de la bicapa lipídica, posee
un dominio en el citosol y otro en el exterior. Un ejemplo es
la glucoforina del eritrocito.
Proteínas integrales no transmembrana
integrales unidas a GPI
Las proteínas integrales no transversales del dominio extracitosólico presentan
una unión covalente al fosfolípido Glucosilfosfatidilinositol (GPI). Como no hay
glucolípidos en la cara citosólica, obligadamente estas proteínas están presentes
hacia el exterior. Mediante fosfolipasa C se puede establecer un corte hidrolítico
entre el grupo fosfato e inositol, de manera que en la bicapa se mantiene el
fosfatidil restante, mientras que la proteína se desliga de la membrana y se
solubiliza. Sirve como ejemplo la fosfatasa alcalina.
Integrales no transmembranapreniladas
Son proteínas integrales no transmembrana de la cara citosólica unidas
covalentemente a un grupo prenílico derivado
de isopreno como farnesil (con cadena carbonada de 15 carbonos)
o geranil (con cadena carbonada de 20 carbonos). Se unen a través de un
enlace tioéter entre el grupo –SH de una cisteína de la proteína integral y el –OH
del grupo prenílico. Se pueden ver ejemplos en las proteínas Ras y proteínas G
triméricas implicadas en la transducción de señales químicas
8. Integrales no transmembranaaxiladas
Son semejantes a las anteriores, con la diferencia de que estas se unen
covalentemente a un ácido graso que forma parte como tal de la bicapa lipídica
(no formando parte estructural de fosfolípidos y glucolípidos). En unos casos se
trata de miristato (con cadena carbonada de 14 carbonos), dando lugar a
proteínas miristoiladas; y en otros de palmitato (con cadena carbonada de 16
carbonos) dando lugar a proteínas palmitoiladas. Hay distintos tipos de unión, en
unos casos se trata de una unión amida entre el grupo carboxilo del ácido graso y
el grupo amino terminal de la proteína y en otros de una unión tioéster entre el
grupo carboxilo del ácido graso y un sulfidrilo, -SH, de una cisteína de la proteína.
Ni en este tipo de proteínas ni en el anterior, las proteínas son solubilizables por
Fosfolipasa C. Un ejemplo de esta clase de proteína es la
proteintirosínkinasaSrc.porwatson
Integral unida mediante una α-hélice embebida en monocapa
Se dan casos especiales, en los que una proteína se inserta en la capa citosólica
de la bicapa lipídica mediante una α-hélice anfipática. Esta α-hélice es paralela a
la bicapa, y no perpendicular como en el caso de las α-hélice de las proteínas
transmembrana. La parte hidrofóbica interacciona con el núcleo de la bicapa, y
una parte hidrofílica contacta con el citosol. El resto de la proteína se halla
expuesta hacia el citosol.
H. ¿Qué funciones cumplen las proteínas de las membranas?
Solución
Proteínas
Las proteínas de la membrana plasmática se pueden clasificar según cómo se
dispongan en la bicapa lipídica:
Proteínas integrales . Embebidas en la bicapa lipídica, atraviesan la membrana
una o varias veces, asomando por una o las dos caras (proteínas
transmembrana); o bien mediante enlaces covalentes con un lípido o un glúcido de
la membrana. Su aislamiento requiere la ruptura de la bicapa.
Proteínas periféricas . A un lado u otro de la bicapa lipídica, pueden estar unidas
débilmente por enlaces no covalentes. Fácilmente separables de la bicapa, sin
provocar su ruptura.
9. En el componente proteico reside la mayor parte de la funcionalidad de la
membrana; las diferentes proteínas realizan funciones específicas:
Proteínas estructurales: estas proteínas hacen de "eslabón clave" uniéndose
al citoesqueleto y la matriz extracelular .
Receptores de membrana: que se encargan de la recepción ytransducción de
señales químicas.
Transportadoras a través de membrana: mantienen ungradiente
electroquímico mediante el transporte de membrana de diversos iones .
Estas a su vez pueden ser:
· Proteínas transportadoras: Son enzimas con centros de reacción que sufren
cambios conformacionales.
· Proteínas de canal:Dejan un canal hidrofílico por donde pasan los iones.