diagnostico bacteriológico de tuberculosis y micobacterias

1. ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO
BACTERIOLOGÍA MÉDICA
7QV2
Diagnóstico Bacteriológico de Tuberculosis y
Micobacteriosis

2. CARACTERÍSTICAS DE LA MUESTRA
La muestra más adecuada para el diagnóstico de la tuberculosis pulmonar
es el esputo
Expectoración
espontánea, tras golpe
de tos profunda
Inhalación de suero
salino hipertónico que
induce esputo
Muestras de saliva, secreciones nasales o faríngeas NO son muestras adecuadas para el diagnóstico de tuberculosis aunque pueden examinarse.
Son generalmente de consistencia
espesa y mucoide, de color
variable e incluso sanguinolentas.

3. EXPECTORACIÓN INDUCIDA: OBTENCIÓN
POSTURAL
Una vez cumplido el punto 1 y 2
indicar al paciente que inspire
profundamente, retenga el aire
y después lo expulse
violentamente hasta conseguir
la expectoración. Esto se
realiza en el consultorio.

4. ESPUTO POR INDUCCIÓN PARA NIÑOS
Se envían rápido a laboratorio.
Recipiente estéril con 2mL de FTS al 10% /10mL de aspirado gástrico.
Sonda nasogástrica la noche anterior al examen
Aspiración del contenido gástrico y lavados con 50ml de solución estéril.
Muestras seriadas durante 3 días.
ASPIRADO GÁSTRICO

5. PRECAUCIONES EN
LA TOMA DE MUESTRA
Elevada contagiosidad.
Habitación bien ventilada, libre
de otras personas incluso al
aire libre
Empleo de mascarillas
por personal sanitario.
El área de trabajo debe
estar recubierta de
material que pueda
desinfectarse de forma
fácil con soluciones
microbicidas
El área de trabajo debe estar alejada
de puerta y de lugares donde existan
corrientes de aire.

6. ¿CUÁNDO DEBE DE OBTENERSE LA MUESTRA?
Tres muestras de esputo de entre 3-5 mL cada uno, las cuales se obtienen de la siguiente manera:
1ª MUESTRA:
Se tomará
cuando el
paciente acuda al
puesto de Salud
con sospecha de
enfermedad
tuberculosa.
2ª MUESTRA:
La tomará el
paciente al día
siguiente en su
domicilio, al
despertar y en
ayunas.
3ª MUESTRA:
Se tomará al
entregar la
segunda en el
Puesto de Salud.

7. ¿CÓMO DEBE RECOGERSE LA MUESTRA?
El esputo debe depositarse en un envase con las siguientes
características:
Boca ancha para adecuada recolección y procesamiento.
Capacidad de 30-50 ml.
Cierre hermético, tapa de rosca.
Material plástico, desechable, resistente a roturas y transparente o
semitransparente.
El envase debe rotularse con datos del paciente
Indicar al paciente que se
enjuague la boca con agua
para eliminar residuos de
comida.

8. TOMA DE LA MUESTRA
Al ser muestra del tracto respiratorio
inferior, no es válida la saliva.
Indicar al paciente que:
1. Inspire profundamente
2. Retenga el aire por un instante breve
3. Elimine las secreciones con un golpe
intenso de tos
SEGUNDO FRASCO
(se recolecta la mañana
siguiente y lo mas pronto
posible se lleva al puesto
de salud)Procesamiento inmediato (2 horas máximo)
Bolsa de polietileno y caja de plástico que se
colocará en lugar fresco, seco y protegido de
la luz.

9. OTRAS MUESTRAS: LCR
En el LCR se requiere vol. de 1-5mL para lograr aislar al bacilo
Se toma de punción lumbar por el médico
No mas de 1 hora para llegar al laboratorio
Sospecha de meningitis
Tubo estéril con tapón de rosca y con capacidad de 10 a 15 mL sin anticoagulante

10. ORINA
 Usada para el
diagnóstico de
tuberculosis renal
 Se den recolectar en
total 6 muestras
 Cada día se recogen de
50 a 100 mL de orina
 Se usa frasco estéril de
300 a 500 mL, y de boca
ancha para facilitar la
recolección.
OTRAS MUESTRAS
HECES
 Utilizadas para el
diagnostico del
complejo: Mycobacteri
um avium-intracellulare
en personas con SIDA.
 Las muestras de
materia fecal deben
recogerse en un envase
parecido a las muestras
de esputo.

11. HEMOCULTIVOS
En general en los hemocultivos es mas común el aislamiento de Mycobacterium avium-intracelullare
Método de obtención:
La muestra debe obtenerse por
punción periférica
Preparación de la piel:
Lavado con providona yodada, lavador
quirúrgico, con gluconato de clorhexidina al
4 % o agua y jabón.
Inoculación de las Botellas:
En sistemas manuales destapar frasco para
inocular la muestra.
Para los sistemas automatizados, se debe
primero descontaminar al tapón de goma
Volumen de la muestra:
1:4 a 1:10 entre la muestra y el
volumen de la botella.

12. OTROS MÉTODOS
Nebulización
Lavado bronquial y broncoalveolares
Cepillado bronquial
Biopsias transbronquiales o a pulmón abierto.
Fibrobroncoscopia
Aspirado transtraqueal
Toracocentesis

13. Transporte de la
muestra.
LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA POR LABORATORIO DE LA TUBERCULOS IS VERSIÓN
NO. 01. INDRE, 2016.

14. Para tener una muestra útil es necesario cumplir con los requisitos de envío con base en el Sistema
Básico de Triple Embalaje.
Recipiente primario Recipiente secundario Recipiente terciario
Debe ser hermético para evitar
que el material se derrame
(p. ej. criotubos, tubos o frascos
con tapa de rosca)y tiene que
estar etiquetado con el nombre o
número de muestra del paciente;
deberá rodearse de material
absorbente como gasa o papel
absorbente.
Hermético a prueba de derrames
y golpes. Si se colocan varios
recipientes primarios se deberá
usar una gradilla y material
absorbente para evitar algún
derrame; dentro (hielera) tiene
que haber refrigerantes para
mantener una temperatura de 4 a
8 °C.
(caja de cartón) que proteja el
contenido de elementos externos
del ambiente y debe estar
etiquetado con los datos del
remitente, destinatario y señal de
orientación.

17. Se debe mantener en refrigeración de 4 a 8 °C,
o bien mantenerla en un lugar fresco,
protegida de la luz y no por más de 5 días.
No se debe de congelar.

18. Los criterios de aceptación de muestras biológicas son:
•Estar colocada en el envase adecuado.
•Bien identificada en el cuerpo del envase.
•Acompañada con el formato de solicitud correspondiente (historia clínica, oficio de solicitud e informe del
resultado del examen bacteriológico o el formato único de envío de muestras con letra legible)
Traer una historia clínica con los siguientes datos:
o Nombre del paciente
o Edad
o Sexo
o Procedencia o Institución que solicita el examen
o Médico que envía
o Situación del paciente: control de tratamiento, referencia o diagnóstico

19. Cepa en medio sólido. Cepa en medio líquido Paneles
 Cepa pura con baciloscopía
positiva.
 de preferencia con 28-30
días de siembra. Primo
aislamiento.
 De preferencia con más de
20 colonias (mayores de 1
mm) para prueba de
sensibilidad y con más de 50
colonias para prueba de
tipificación.
 Rotulada: nombre del
paciente, tipo de muestra y
fecha de siembra.
 Cepa pura con baciloscopía
positiva.
 No usar tubo de vidrio.
 Asegurar la tapa con
parafilm.
 Bien identificado.
 Cada envío debe llegar con
un oficio que describa el
contenido del paquete.
 Cada panel debe venir
acompañado con los
resultados de la evaluación.

21. Procesamiento de la
muestra

22. FROTIS
Rotular (lápiz de punta de diamante o
de tungsteno). Tomar muestra y la lámina correspondiente y
colocarlas detrás del mechero.
Destapar frasco con
cuidado.
Partir un aplicador en dos,
tratando de que las puntas
queden ásperas.
Con el extremo irregular seleccionar la partícula
más densa o purulenta de la muestra.
Hacer un frotis de 2 cm de largo x 1 cm de
ancho, haciendo movimientos circulares para
obtener una película uniforme

24. Desechar el aplicador en
frasco que con fenol al 5%.
Secar el extendido a temperatura
ambiente.
No calentar la laminilla mientras
está húmedo el frotis.
Fijar el frotis pasando la laminilla sobre
la flama del mechero con suavidad 2 o 3
veces, evitando el sobrecalentamiento.
Tinción del extendido con
Ziehl-Neelsen.

25. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DEL FROTIS
Depositar una gota de
aceite de inmersión
en un extremo del
frotis.
Enfocar el extendido
donde ha colocado la
gota de aceite, con la
lente 100x de inmersión
Examinar sistemáticamente 100
campos útiles. Para ello, realizar una
serie de barridas a lo largo del frotis.
Registrar en la cuadricula el numero de el
numero de bacilos encontrados en cada campo
Reporte de la
baciloscopía.

26. REPORTE
NEGATIVO (-) No se encontraron bacilos acido alchol resistentes
(BAAR) en 100 campos microscópicos observados.
POSITIVO (+) 1-9 BAAR por campo en promedio en 100 campos
observados.
POSITIVO (++) 1-9 BAAR por campo en promedio, en 10 campos
observados.
POSITIVO (+++) 1-9 BAAR por campo.
POSITIVO (++++) Más de 10 BAAR por campo, en promedio.

27. MÉTODO DE PETROFF
Destapar frasco
con cuidado.
Trasvasar todo su
contenido en el
tubo de centrifuga
No abrir un envase ni
un tubo de centrifuga
sin haber cerrado
antes los anteriores Abrir el tubo,
agregar NaOH 4%
hasta duplicar el
volumen del
esputo .
Agitar tubo con
vortex
vigorosamente.
Dejar actuar el
descontaminan
te 5 minutos
Centrifugar
15 minutos a
3000 g a 25 -
35°C
Descontaminante no
exceda los 30 minutos
Decantar
sobrenadan
te
Adicionar buffer
fosfato hasta
completar los 15
ml con una pipeta
Resuspende
r

28. INOCULACIÓN DE MEDIOS
Con una pipeta
distribuir el
sedimento,
sembrando entre 0.2
y 0.5 ml (6 - 8 gotas)
en cada tuboTapado
Distribuir la siembra en
la superficie del medio,
aflojar ligeramente la
tapa para permitir
intercambio de gases.
Incubar tubo horizontal
(48h) a 37°C.
Revisar si hay
crecimiento o no, y
poner el tubo en
posición vertical, hasta
por 8 semanas.

29. MORFOLOGÍA COLONIAL
M. tuberculosis
Colonias rugosas (Forma de
verruga), sin pigmentación,
y secas
M. kansassi
Colonias rugosas, parecido a
M. tuberculosis pero evidencian
pigmentación amarilla, son
fotocromógenas.
M. avium
Colonias pequeñas, lisas y
no pigmentadas son
características del complejo
M. avium.
M. bovis
Colonias de tipo lisas o
rugosas pero de
crecimiento disgónico.

31. Pruebas bioquímicas

32. Niveles para la identificación
Primer nivel
Características morfológicas, coloniales y microscópicas
Características de las cepas según el medio.
Prueba de acumulación de niacina. +
◦ Producción y acumulación de niacina o ácido nicotínico

33. Prueba de niacina

34. Segundo nivel (bioquímicas básicas)
Fotocromogenicidad -
Reducción de nitratos a nitritos +
Catalasa resistente a 68°C -
Hidrólisis del Tween 80 Parcial
◦ Polisorbato 80
◦ Usado como fuente de carbono

35. Prueba de nitratos a nitritos
 Positivo
 M. tuberculosis
 Negativo
 M. intracellulare

36. Prueba de catalasa
 >45 mm
 M. kansasii
 M. gordonae
 <45 mm
 M. tuberculosis
 Negativo
 M. avium

37. Prueba hidrólisis de Tween 80
 Positivo
 M. kansasii
 M. gordonae
 Negativo
 M. scrofulaceum

38. Tercer Nivel (para especies en particular)
Crecimiento en PNB 0.5% -
Crecimiento en HATC R
Reducción del telurito de potasio -
Crecimiento en NaCl 5% -
Prueba de Arilsulfatasa -
Crecimiento en MacConkey -

39. Prueba de la tuberculina. Técnica de Mantoux
Es una reacción de hipersensibilidad tipo IV. Consiste en la inyección intradérmica
de 2UT del derivado protéico purificado PPD-RT23 regulado con tween 80.

40. Interpretación
≥ 5mm
≥ 10mm
≥ 15mm
• VIH positivo
• Contacto frecuente y reciente con un paciente con TB activa
• Trasplantes de órganos
• Personas con imágenes fibróticas en su radiografía de tórax
compatibles con TB antigua
• Individuos con riesgo de infección reciente y de desarrollar la
enfermad
• Niños y adolescentes independientemente de que estén o no
vacunados con BCG
• Personas sin contacto ni factores de riesgo y no vacunados con
BCG
• Personas sin contacto con TB ni factores de riesgo y vacunados
con BCG

41. Prueba rápida de un paso TB IgG/IgM

42. Antibiograma
• Método de las proporciones múltiples

43. Algoritmo de trabajo
Preparar la
preparación AAR
Ziehl-Neelsen Kinyoun Auramina O
+ -
Cordón + Cordón -
Especies de
micobacterias
Presuntivo
M. tuberculosis
No se detectan
BAAR

44. Inoculación de
medios de cultivo
Middlebrook 7H10 Löwenstein-Jensen
Crecimiento
-
Crecimiento
+
Observar
microcolonias
En nido de ave
con cordones
Colonias delgadas y
planas
En nido de ave sin
cordones
Colonias lisas,
amarillas
Presuntivo
M. tuberculosis.
Confirmar con
sonda TBC, pruebas
bioquímicas
Presuntivo complejo
M. avium
Confirmar con sonda
TBC, pruebas
bioquímicas
Presuntivo complejo
M. kansasii
Confirmar con sonda
TBC, pruebas
bioquímicas
Presuntivo complejo
M. gordonae
Confirmar con sonda
TBC, pruebas
bioquímicas
Realizar sondas de ácido
nucleico, pruebas
bioquímicas o ambas.
Negativo para
BARR
Patrones varios
Realizar pruebas
bioquímicas

45. BIBLIOGRAFIA
Reyes, Aristizábal, Leal; Neumología pediátrica; 5ª edición, editorial panamericana. Impreso en
Argentina. p.p. 309-310
Pediatría Martínez; “salud y enfermedad del niño y adolescente”; 8ª edición 2017, editorial
panamericana. p.p. 254
Biol. Balandrano, S., QFB. Anzaldo, G., Téc. Contreras, P. Manual de Técnicas de Laboratorio para
el Exámen Baciloscópico. Primera Edición. México. Instituto de Diagnóstico y Referencia
Epidemiológicos. 2003. Disponible en:
http://www.cdi.salud.gob.mx:8080/BasesCDI/Archivos/Sidatuberculosis/manual_laboratorio_TB
.pdf
Barrera, Luisa. Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis: Normas y Guía
Técnica. Parte II Cultivo. Agentina. 2008. Disponible en:
http://www.sld.cu/galerias/pdf/sitios/tuberculosis/tb-labs-cultivo[2].pdf
Koneman. Diagnostico Clínico. Primera Edición. México. 1999. P.p. 874, 875.