informe de validacion

1. Informe Química Analítica Instrumental
Trabajo Práctico
“Análisis cuantitativo de fluoresceína en una solución inyectable por
espectroscopia de fluorescencia y espectroscopia uv- visible”
(Apellido y
nombre)
Miler, Claudio Javier
Fecha de
realización
08/09/2016
Comisión 04 Subcomisión
b
Ayudantes a
cargo del TP
Los informes deben incluir las secciones de objetivos, resultados, conclusiones y anexo de
cálculos, siguiendo las pautas requeridas en cada Trabajo Práctico en particular.
Calificación Condición
Fecha de
corrección
Docente a cargo de
la corrección
● Objetivos

2. ● Comparar dos métodos espectroscópicos para el análisis cuantitativo de una
solución inyectable. Criterios a tener en cuenta: precisión, exactitud, sensibilidad,
linealidad, selectividad y robustez.
● Reconocer diferencias instrumentales y operaciones entre espectroscopia de
fluorescencia y espectroscopia UV-Visible.
● Observar el fenómeno de quenching en una solución concentrada de
fluoresceína sódica.
● Materiales y métodos
Según la guía de trabajos prácticos de Química Analítica Instrumental, 2015, páginas 24-32.
● Resultados
A. Espectroscopía de fluorescencia
Rango lineal:
Tabla 1:
Concentración de la solución patrón (μg F/ ml) Intensidad de emisión (λ=510 nm)
0 011
0,01 132
0,02 239
0,03 364
0,05 584
0,06 754
0,08 921

3. Gráfico 1:
Ecuación de la recta de regresión lineal: y= 11595 x + 15.866
Coeficiente de regresión lineal ( r ): 0.9947
Longitud de onda de excitación: 480
Longitud de onda de emisión de fluorescencia:510
Límite de detección (LoD): 0.079
Límite de cuantificación (LoQ):0.265
Recuperación (%):54.33
Especificidad: si
Robustez frente al cambio de pH: si

4. B. Expectrocopía UV- Visible
Rango lineal:
Tabla 2:
Concentración de la solución patrón
(μg F/ ml)
Absorbancia
(λ=480 nm)
0 0.102
1,25 0,185
2,5 0,465
5 0,9103
Gráfico 2:

5. Ecuación de la recta de regresión lineal: y = 0,1852x + 0,0869
Coeficiente de regresión lineal ( r ): 0,9968
Longitud de onda óptima:510
Límite de detección (LoD):0.067
Límite de cuantificación (LoQ):0.221
Recuperación (%):105.439
Especificidad: no
Robustez frente al cambio de pH: si
● Conclusiones

6. En cuanto a los criterios de validación, comparando los límites de detección y los
de cuantificación, los resultados por espectroscopia de fluorescencia son
menores a los de espectroscopia UV- visible. Por lo tanto se pudo corroborar la
mayor sensibilidad con el primer método.
Ambos son robustos al dar valores que no son significativamente distintos con el
estándar.
La especificidad no resulto en uv, al realizar la comparación de la solución de
lectura y el obtenido en el ensayo cuantitativo. El método no es específico.
En el ensayo de exactitud, el porcentaje que se esperaba era mayor a 99% para
ambos sistemas pero solo en uv lo observamos, por lo que podríamos decir que
este último método es exacto.
Debido a estos errores o falta en la calibración de los instrumentos y posterior
calificación en los equipos, no se pudieron evaluar los correctos parámetros.
Los métodos no garantizan calidad en los resultados, por ende, no están
validados por lo que no se puede decir que los resultados difieran de los
proporcionados por el rótulo de los compuestos.
Finalmente pudimos observar el fenómeno QUENCHING. El mismo permitió ver
que mientras más concentrada esta la solución, ésta no presenta fluorescencia
Al diluirla, sí se observa. Es to ocurre debido a que en una muestra diluida las
moléculas están más separadas y no hay un apantallamiento de las moléculas
vecinas que interrumpan la absorción y la emisión
● Anexo de cálculos

7. En cuanto a los criterios de validación, comparando los límites de detección y los
de cuantificación, los resultados por espectroscopia de fluorescencia son
menores a los de espectroscopia UV- visible. Por lo tanto se pudo corroborar la
mayor sensibilidad con el primer método.
Ambos son robustos al dar valores que no son significativamente distintos con el
estándar.
La especificidad no resulto en uv, al realizar la comparación de la solución de
lectura y el obtenido en el ensayo cuantitativo. El método no es específico.
En el ensayo de exactitud, el porcentaje que se esperaba era mayor a 99% para
ambos sistemas pero solo en uv lo observamos, por lo que podríamos decir que
este último método es exacto.
Debido a estos errores o falta en la calibración de los instrumentos y posterior
calificación en los equipos, no se pudieron evaluar los correctos parámetros.
Los métodos no garantizan calidad en los resultados, por ende, no están
validados por lo que no se puede decir que los resultados difieran de los
proporcionados por el rótulo de los compuestos.
Finalmente pudimos observar el fenómeno QUENCHING. El mismo permitió ver
que mientras más concentrada esta la solución, ésta no presenta fluorescencia
Al diluirla, sí se observa. Es to ocurre debido a que en una muestra diluida las
moléculas están más separadas y no hay un apantallamiento de las moléculas
vecinas que interrumpan la absorción y la emisión
● Anexo de cálculos