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INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA
PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN
Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010
Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105
NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984
Página web: www.iecolegioloyola.edu.co
Núcleo 920, Castilla, Medellín
HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA
Proceso: GESTIÓN CURRICULAR
Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01
 
Título del proyecto
Potencial ficorremediador de la microalga ​chlorella spp ​en aguas
contaminadas por mercurio
Nombres y apellidos completos de los integrantes
Luis Miguel Cardona Saldarriaga.
Sebastian Oquendo Serna.
Kevin Salazar Lopez.
Nombre del equipo
Bioalgae
Asesor(es)
Robinson Salazar (Colegio Loyola)
Dallany Milena Urrego G. (Sena TecnoAcademia )
Luis Alvaro Gómez T. (Colegio Loyola)
Institución Educativa Colegio Loyola para la Ciencia y la Innovación
Comité de Investigación Escolar
Medellín 2020
 
 
 
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AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a la institución educativa Colegio Loyola por
brindarnos los recursos para la elaboración de este proyecto, al
profesor Robinson Salazar por su acompañamiento como
asesor de este proyecto y demás profesores los cuales durante
el paso de los años nos han acompañado en el ámbito de la
investigación y nos han aportado a nuestra educacion y
formacion, también agradecemos al Sena Tecnoacademia por
prestarnos sus instalaciones, y darnos asesores con gran
experiencia en el ámbito de la investigación y formación
académica como Dallany Urrego.
 
 
 
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CONTENIDO
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Resumen
1. Introducción
2. Descripción del problema y pregunta de investigación
3. Objetivo general y objetivos específicos
4. Justificación e impacto social/ambiental
5. Antecedentes y marco teórico
6. Ruta metodológica
7. Resultados y discusión
8. Conclusiones
Referencias bibliográficas
Anexos
 
 
 
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LISTA DE TABLAS
Pág.
Tabla 1. Título de la tabla
Tabla 2. Título de la tabla
Tabla 3. Título de la tabla
LISTA DE FIGURAS
Pág.
Figura 1. Título de la figura
Figura 2. Título de la figura
Figura 3. Título de la figura
LISTA DE ANEXOS
Pág.
Anexo 1. Título del anexo
Anexo 2. Título del anexo
Anexo 3. Título del anexo
 
 
 
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Resumen
Palabras clave
Abstract
Keywords
1. Introducción
Las microalgas en la actualidad tienen muchos usos, ya que tienen un rápido
crecimiento y gran facilidad de adaptarse al medio ambiente, además poseen
compuestos por los cuales hacen que sean utilices muchas áreas de la ciencia y por lo
que decidimos utilizar la microalga ​Chlorella (spp) para reducir los niveles de mercurio
en el río cauca que pasa por santafe de Antioquia, lugar donde se encuentran mucho
sedimentos de mercurio y otros metales pesados por la minería ilegal que allí se
practica, esta microalga tiene una gran absorción de los metales pesados como lo es el
mercurio y por lo que decidimos enfocar nuestro proyecto en este tema, el cual a
afectado a la población colombiana desde hace mucho tiempo, este proyecto consta de
4 fases la cuales para poder saber ¿Cuál es el potencial ficorremediador de la microalga
chlorella spp ​sobre las aguas contaminadas por mercurio? e intentar darle una solución
que ayude a muchos.
 
 
 
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2. Descripción del problema y pregunta de investigación
A nivel mundial el Mercurio siempre ha estado presente en el medio ambiente, este
entra en el ambiente como resultado de la ruptura de minerales de rocas y suelos a
través de la exposición al viento y agua. La liberación de Mercurio desde fuentes
naturales en los años pasados habían permanecido en el mismo nivel, pero en la
actualidad las concentraciones de mercurio en el medio ambiente han estado subiendo
exponencialmente, esto es debido a la actividad humana en la naturaleza, como por
ejemplo; la extracción de minerales que hay en la tierra de manera ilegal, al procesar las
rocas o arenas donde están los minerales se cuelan sedimentos a los ríos y ciénagas, por
ejemplo los cuerpos de agua son contaminados cuando el mercurio presente en el aire
en forma de partículas, se precipita por efecto de la condensación viajando unido a
partículas de polvo cayendo en los cuerpos de agua.
En el lodo de los ecosistemas acuáticos, el mercurio es transformado por bacterias o
otros microorganismos a metilmercurio, esta es una substancia que puede ser absorbida
rápidamente por la mayoría de los organismos y es conocido que daña al sistema
nervioso y capaz de incorporarse a la cadena alimenticia como los peces hasta llegar a
nosotros.
El mercurio es un metal líquido, color plata brillante, buen conductor de la electricidad y
relativamente inerte ante el oxígeno y los ácidos; en forma líquida es volátil entre los 20
y 25 grados centígrados; es soluble en líquidos polares y no polares. El mercurio es poco
abundante en la corteza terrestre, su concentración natural es de 0,08 ppm. En
Colombia, la minería de oro es la fuente de supervivencia para muchas familias en
 
 
 
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especial, en zonas con poca presencia estatal. Sin importar su estatus (legal o ilegal) el
mercurio es un verdadero problema de salud pública. En áreas como el sur de Bolívar,
Antioquia, el Pacífico, Santander y la Cuenca Amazónica, por ejemplo, la contaminación
de los cuerpos de agua ha sido documentada, así como la exposición en humanos, la
cual varía de acuerdo con la región. Varias universidades de la nación se han puesto a
ver alternativas que pueden solucionar este problema ya que hay varias técnicas pero
salen bastante costos y
no se pueden implementar de una manera rápida y eficientes, tales como separación
del oro por medio gravitacional.
pregunta de investigación
¿Cuál es el potencial ficorremediador de la microalga ​chlorella spp ​sobre las aguas
contaminadas por mercurio?
3. Objetivo general y objetivos específicos
Objetivo general:
Determinar el nivel de extracción de mercurio (Hg) de la microalga ​chlorella spp.
usando espectrofotometría de absorción atómica, para su uso potencial en la
ficorremediación de aguas contaminadas por Hg.
 
 
 
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Objetivos específicos
Determinar el crecimiento de la microalga ​chlorella (spp) en un medio de cultivo
suplementado con cloruro de mercurio a través del conteo en cámara de Neubauer.
Analizar la concentración de cloruro de mercurio en el medio de cultivo y en la
biomasa de la microalga mediante espectrofotometría de absorción atómica.
4. Justificación e impacto social/ambiental
El equipo de Investigación Bioalgae y tiene un proyecto con el cual quieren realizar una
biorremediación por medio de una microalga llamada chlorella spp para tratar aguas
contaminadas por mercurio, con este proyecto estarán aportando al mejoramiento de
los alrededores del río que está contaminado, mejorando la calidad del agua que está
siendo afectada por el mercurio, además es una idea innovadora, ya que las microalgas
por lo general son utilizadas para hacer comida para animales, realizar
descontaminación de aguas residuales, descontaminar el aire, etc y ellos están
implementando esta microalga en algo nuevo.
5. Antecedentes y marco teórico
Mercurio: El mercurio y sus compuestos son extremadamente tóxicos para los seres
humanos y el medio ambiente. En grandes cantidades puede ser mortal, la inhalación
 
 
 
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de vapor de mercurio es la ruta más importante de penetración del mercurio
elemental en el cuerpo humano. Aproximadamente el 80% del vapor de mercurio
inhalado es retenido por el organismo. Una vez absorbido, el mercurio elemental es
distribuido con facilidad por todo el cuerpo; es capaz de atravesar las barreras sangre
placenta y sangre-cerebro. El mercurio elemental es oxidado a mercurio inorgánico
divalente vía hidrógeno peroxidasa-catalasa, presente en la mayoría de tejidos. La
distribución del mercurio elemental absorbido se encuentra limitada principalmente
por la oxidación a mercurio divalente, puesto que este último tiene una movilidad
mucho más reducida La inhalación prolongada de vapores de mercurio puede dar
lugar a dolores de pecho, disnea, hemoptisis y en algunas ocasiones neumonitis
intersticial que puede ocasionar la muerte. La ingestión de compuestos mercuriales,
en particular el cloruro de mercurio, puede causar gastroenteritis ulcerosa y necrosis
tubular aguda causando la muerte por anuria en caso de no realizarse diálisis [13].
Incluso en dosis relativamente bajas pueden afectar gravemente el desarrollo de
sistemas nerviosos, el sistema central nervioso es el órgano crítico en la exposición de
vapores de mercurio, la exposición aguda puede dar lugar a reacciones psicóticas
caracterizadas por delirios y tendencias suicidas La toxicidad para los humanos y otros
organismos depende de la forma química, la cantidad, la vía de exposición y la
vulnerabilidad de la persona expuesta. Algunas personas son especialmente sensibles
y vulnerables a la exposición al mercurio, en particular el feto, el recién nacido y los
niños pequeños debido a la sensibilidad del sistema nervioso en desarrollo. Así, los
padres, las mujeres embarazadas y mujeres que desean quedar embarazadas sobre
todo, deben ser conscientes del daño potencial del metil mercurio. Los límites críticos
permisibles para evitar efectos ecológicos por el mercurio en suelos orgánicos se han
fijado en 0,07 - 0,3 mg/kg de mercurio total en los suelos. El riñón es el órgano diana
 
 
 
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en el caso de ingestión de sales de mercurio inorgánico divalente, pudiéndose
desarrollar síndromes nefríticos como resultado de una respuesta inmunotoxica. Las
glándulas tiroidales pueden acumular mercurio en caso de exposición continua a
mercurio elemental. Se ha mostrado que una exposición ocupacional moderada
afecta un sistema particular de enzimas de la tiroides a niveles de mercurio en la orina
de 15-30 mg/g de creatinina, los mismos niveles son mencionados en los informes
sobre los efectos menores en el sistema nervioso central y los riñones.(Universidad de
Cordoba. 2014)
Un factor muy importante de los efectos del mercurio en el medio ambiente es su
capacidad para acumularse en organismos y ascender por la cadena alimentaria,
como se puede apreciar a continuación
Este metal está presente en mayor cantidad en los pescados azules, siendo
relevante comentar que los beneficios que aporta el consumo de pescado son
mayores que los riesgos que genera el mercurio. Desde la Autoridad Europea de
Seguridad Alimentaria (EFSA) recomienda seguir las recomendaciones de la
pirámide alimentaria en el consumo de pescado. Los pescados que presentan mayor
acumulación de este metal son el atún rojo grande, lucio, pez espada o emperador,
el tiburón, la panga y la perca
En el mundo se han duplicado e incluso cuadruplicado los niveles de mercurio durante
los últimos 25 años en focas anilladas y belugas de algunas áreas del Ártico canadiense y
Groenlandia. En aguas más cálidas los mamíferos marinos depredadores también
pueden estar en riesgo. Las aves piscívoras se exponen al mercurio por el pescado que
consumen, en las regiones donde los peces tienen altas concentraciones de mercurio,
 
 
 
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estas aves pueden correr el riesgo de sufrir efectos en la reproducción y el
comportamiento El mercurio inorgánico también puede ser absorbido pero por lo
general en menores cantidades y con menor eficiencia que el metil mercurio [14]. La
biomagnificación del mercurio es el componente que más incide a la salud de animales y
seres humanos; los peces adhieren con fuerza el metilmercurio debido a su afinidad por
los compuestos proteínicos; casi el 100% del mercurio se bioacumula en peces
depredadores como consecuencia de su dieta Aunque en el contenido intestinal y en la
mucosa de algunos peces el mercurio ha sido encontrado en su forma metilada debido a
la
Las microalgas poseen una capacidad ficorremediadora que consiste en la eliminación
de contaminantes de un medio líquido o gaseoso. Estos compuestos contaminantes son
captados por la biomasa algal y pueden ser recuperados mediante su cosecha. Esta
capacidad resulta en un sistema de cultivo con 2 propósitos: eliminación de
contaminantes y producción de biomasa con fines comerciales. Ambos objetivos
dependen del sistema de cultivo, la o las especies cultivadas y los factores ambientales.
La utilización de medios contaminados en el cultivo impacta directamente en los costos
de producción. La elección del tipo de sistema de cultivo es importante, y debe
realizarse en base a factores biológicos, técnicos, ambientales y económicos, definidos
previamente. La cosecha de la biomasa algal es el procedimiento más complejo y
costoso en el cultivo de microalgas, existiendo varias técnicas diferentes tanto en
eficiencia como en complejidad. La producción de biomasa de microalgas ha
proporcionado una amplia gama de productos biotecnológicos con usos en la industria
alimenticia, salud y
medicina humana, alimentación animal, compuestos orgánicos y biocombustibles. Todo
 
 
 
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esto adquiere una gran importancia debido a los problemas ambientales globales
existentes en la actualidad. El presente trabajo, recopila de forma general la información
actualizada (1972 a 2014) sobre diferentes aspectos y parámetros de importancia en el
cultivo de microalgas, sus múltiples usos y beneficios.
6. Ruta metodológica
1. Crecimiento de la microalga (subcultivos).
2. Cultivo de la microalga en solución de cloruro de mercurio en erlenmeyers
3. Seguimiento mediante Conteo con cámara de Neubauer.
4. Análisis de la concentración de mercurio en medio de cultivo y biomasa de la
microalga.
5. Potencial fitorremediador de la microalga.
Objetivo 1: Determinar el crecimiento de la microalga ​chlorella (spp) en un medio de
cultivo suplementado con cloruro de mercurio a través del conteo en cámara de
Neubauer.
Actividad 1. Preparar el medio de cultivo para el crecimiento de la microalga
Medio de cultivo debe tener una condiciones con ​6 Bombillos led luz blanca de 100w           
constante (periodos de 12 horas luz y noche), 6 Bombillos led luz blanca de 100w
agitación permitiendo que todas la células reciban la luz, y mantener una temperatura
constante la cual debe ser menos de 25°C. ​El cultivo se tendrá un tiempo de 8 días
mientras elaboramos la curva de crecimiento en una gráfica para así tener un mejor
 
 
 
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análisis, en el 9 dia de preparación se le introducirá el cloruro de mercurio a la muestra
con una cantidad de cloruro de mercurio 7.5, 8.0 y 8-5 g por cada 100 o 150 ml de agua.
mediante una parrilla se hará una agitación de 8h el cual combinaremos con el
fotoperiodo 12 horas en temperatura ambiente, se prepararon algunas soluciones
madres con un total de 1 litro por cada solución, las cuales son:
Dr. Carlos Aponte. (2013). Fragmentos Microbiológicos: Revista del Instituto Nacional de Higiene
Rafael Rangel. SCIELO. Recuperado de
http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0798-04772013000100009&fbclid=IwAR2r
QRG3UZ_BjV9CNGXpDV_CNb8MUfxUVFndIgkpBM553jWPm9Atwv1ZyzU
CHU-13 modificado
Solución Madre 1​:
FeSO​4​.7H​2​O y Na​2​ EDTA [1mL/1L]
Solución Madre 2​:
H​3​BO​3​ , Na​2​MoO​4​.2H​2​O , ZnSO​4​ , CoCl​2​.6H​2​O , MnCl​2​ , CaCl​2​.2H​2​O [1mL/1L]
Solución Madre 3​:
K​2​HPO​4​ [1mL/1L]
Solución Madre 4​:
MgSO​4​.7H​2​O​​[2mL/1L]
Solución Madre 5​:
CaCl​2​.2H​2​O [2mL/1L]
Solución Madre 6​:
KNO​3​ [2mL/1L]
Solución Madre 7​:
NaHCO​3​ [4g/1L]
 
 
 
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Actividad 2. Seguimiento a los subcultivos
Para este paso el seguimiento que se le hará a los subcultivos se realizará
mediante espectrofotometría,determinaremos el crecimiento que está teniendo el
cultivo en la cual vamos analizar el tiempo en el que se presentarán cada una de
las fases del proceso, las cuales se determinan mediante la cantidad de células
vivas y muertas como lo podemos ver en la siguiente imagen.
Patrón estándar de crecimiento indicado por las siguientes fases:
Actividad 3. Preparación de muestra de solución de cloruro de mercurio.
Seleccionaremos tres concentraciones de cloruro mercurio para llevar a cabo el
estudio, utilizaremos 7.5, 8.0 y 8,5 g de cloruro de mercurio diluido en 100 ml de
agua.
.
Actividad 4. Preparar el medio de cultivo suplementado con la solución de
cloruro de mercurio.
 
 
 
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Se prepararan los siguientes nutrientes con el metal para así empezar con
la inoculación en un volumen de 250ml
Componentes mg/L
KNO 400
KHPO 80
CaCl dihidrato 107
MgSO heptahidrato 200
Citrato Ferrico 20
Ácido Cítrico 100
CoCl 0.02
HBO 5.72
MnCl tetrahidrato 3.62
ZnSO heptahidrato 0.44
 
 
 
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CuSO pentahidrato 0.16
NaMoO 0.084
0.072 N HSO 1 gota
HgCl2 ¿?
Para agregar estas cantidades se utiliza una pipeta automática Eppendorff con
puntas previamente esterilizadas Para la esterilización de las puntas se colocan
en un frasco de vidrio para autoclave con tapadera y un algodón en el fondo o en
cajas de plÆstico resistentes al calor el primero para puntas de 100 I Y el
segundo para el caso de las puntas de 1 mL se meten en el autoclave junto con
los matraces a esterilizar son 120ºC, 15Psi por 15 min flujo laminar.
Actividad 5. Inocular la microalga en la mezcla anterior
Se agitará para mezclar el metal añadido a la solución de la microalga.​Cuando
esta en la etapa de reproducción de algas. La cepa (250 ml o menos) siguen
aisladas bajo luz, agitación y clima controlados y se emplea cuando es necesario
inocular. Ni se airean ni se añade dióxido de carbono. Los inóculos (250 ml a 4 l
en volumen) crecen rápidamente durante un período de 7 a 14 días a
temperaturas e intensidad de luz más elevadas con un aporte de aire. Cuando
están listos, una pequeña proporción del volumen se emplea para iniciar nuevos
inóculos y la porción principal para comenzar un cultivo a escala intermedia. Los
cultivos intermedios (normalmente de entre 4 l y 20 l en volumen) pueden
emplearse como alimento para las larvas o para iniciar un cultivo a gran escala.
 
 
 
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¿cómo se hace?
Actividad 6. Seguimiento al crecimiento de la microalga
Para determinar la capacidad de adaptación y crecimiento se realizarán placas
con observación al microscopio óptico verificando que las microalgas están
vivas, además de realizar un conteo celular durante el tiempo de retención del
cloruro de mercurio.
Cámara de Neubauer
Al colocar el cubreobjetos encima de la superficie donde se encuentra grabada
la cuadrícula existe entre ellos cuadrícula y cubreobjetos una distancia fija
profundidad de 0,1 mm misma que viene indicada en el portaobjetos Por lo tanto
el volumen de la muestra problema en uno de los cuadros grandes de 1 mm2 de
superficie serÆ igual a 10 mm2 X 0 1 mm 0 1 mm3 Las tØcnicas de conteo
consideran el nœmero de individuos presentes en la muestra de volumen
determinado y comœnmente se expresan como nœmero de individuos por cada
mililitro Ya que 1 mL cm3 1000 mm3 y como 1000 mm3 10 000 X 0 1 mm3
entonces 1 mL 10 000 veces el volumen de la muestra que como ya se vio es
siempre de 0 1 mm3.
 
 
 
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Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01
 
Objetivo 2: Analizar la concentración de cloruro de mercurio en el medio de
cultivo y en la biomasa de la microalga mediante espectrofotometría de
absorción atómica.
Actividad 1.
Medición de mercurio en el medio de cultivo.
Mediante el proceso se realizarán mediciones diarias de muestras que
extraemos de las muestras, las cuales serán filtradas con mallas de fibra de
vidrio. Esto nos ayudará a identificar la disminución del mercurio en ​función de
los días en los que se desarrollará el proceso de biosorción (​es un proceso
fisicoquímico que ocurre naturalmente en cierta biomasa que le permite concentrar pasivamente y unir
contaminantes en su estructura celular. La biosorción se puede definir como la capacidad de los
materiales biológicos de acumular​) con las microalgas.
Actividad 2.
Medición de mercurio en la biomasa de la microalga.
Para este proceso se elaborará un espectrofotometría de absorción ​atómica(AA)
para medir las concentraciones especificas y poder tener una muestra más
exacta y acertada a la hora de medirla para pasar de ahí al análisis de
resultados
Actividad 3.
 
 
 
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PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN
Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010
Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105
NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984
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Núcleo 920, Castilla, Medellín
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Análisis de los resultados.
A la hora de realizar el análisis debemos tener en cuenta los siguientes
aspectos:
-Cinética de crecimiento.
Tendremos que realizar un conteo celular durante la etapa de tratamiento del
agua residual en los fotobiorreactores con las cepas de microalgas.
Gracias a este conteo podremos obtener la densidad celular obtenida durante la
etapa en la que se hará el tratamiento del mercurio.
Según los datos que obtengamos dia a dia realizaremos una gráfica en la que se
verá reflejado un crecimiento exponencial o decreciente según el estado de las
células de la microalga.
-Absorbancia de mercurio.
Al igual que en el conteo celular realizaremos un seguimiento dia a dia de la
disminución del mercurio, a partir de estos datos realizaremos una gráfica en la
que podremos hacer un análisis de los datos suministrados.
Adicionalmente se ha determinado que la relación entre la concentración y
absorbancia de mercurio con los valores de la densidad celular es inversamente
proporcional, es decir a mayor crecimiento, mayor remoción del contaminante,
durante la fase de crecimiento exponencial.
 
 
 
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Todos estos datos
Actividad 5.
Determinación del potencial.
7. Resultados y discusión
Se espera que la microalga pueda reducir la cantidad de mercurio presente en el
agua, a escala de laboratorio
Al obtener la muestra de mercurio se medirá la cantidad que obtuvimos por
medio de la ​espectroscopia de absorción atómica​, procederemos a medir
cuántas células de la microalga tenemos por medio de la cámara de Neubauer,.
se hará un análisis de las muestras después del seguimiento continuo de 8 días
para lograr ver cómo actuó la microalga en su proceso de crecimiento, para
determinar en qué tiempo se haría la primera experimentación con la muestra de
mercurio,teniendo en cuenta la cantidad de microalgas presentes en la reacción
química con el mercurio y evaluando el potencial que tuvieron a la hora de
realizar la biorremediación podremos evaluar la la cantidad necesaria para que
el proceso sea mucho más efectivo.
Al hacer el análisis de las muestras elaboramos una tabla la cual nos mostrará
un índice de eliminación de mercurio en un tiempo esperado de 30 días la cual
nos mostrará que tal actúa la microalga con el mercurio, después de haber
determinado un medio de cultivo(CHU-13) el cual no consuma muchos recursos
y elaborar el mejor proceso para la desinfección del agua
8. Conclusiones
 
 
 
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Referencias bibliográficas
● Vera, J. A. (2016). ​Remoción de mercurio en aguas contaminadas
mediante microorganismos tolerantes, una aproximación a la
biorremediación microbiana. Bogota D. C. Universidad Santo Tomás.  
● Sepúlveda L. E., Agudelo L. M., Arengas A. I. (2006). ​El mercurio, sus
implicaciones en la salud y en el ambiente. ​lunazul.ucaldas.edu.co 
● Tafur J. E., Estrada Palencia L. (2015). ​Tratamiento de aguas residuales
in vitro por medio de la microalga Chlorella sp en el municipio de
Barrancabermeja, Colombia. ​Revista CITECSA - Instituto Universitario de
la paz – Volumen VI; Número 10. 
● Arcila A. F. Determinación de Mercurio por Espectrofotometría
deAbsorción Atómica-Vapor Frío para Aguas (Tratada y Cruda)
(Tratamiento de las muestras mediante digestión con ácido nítrico,
sulfúrico y permanganato de potasio. ​Universidad tecnológica de Pereira 
● Alipio León Y., Fundación Universitaria Horizonte. ​Intoxicación Por
Mercurio.  
Anexos
Cultivo de la microalga:
La reproducción es generalmente por división binaria con tiempos de duplicación de una
hora o menos para los procariotas cianobacterias y de 8 a 24 horas o más para las
eucariotas (Carpenter 1979 Dawes 1991).
Para conseguir un cultivo de microalgas en crecimiento activo, es necesario: un inóculo
viable de tamaño mínimo, suministro de nutrientes y microelementos, adecuadas
 
 
 
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condiciones químicas y físicas( luz, aireación, temperatura, salinidad y energía (Cañizares
1994).
Como parámetros físicos se consideran: La ​luz​ las microalgas son fotoautótrofas
encargadas de convertir la energía luminosa en metabólica por medio de la fotosíntesis
y sus periodos de exposición a ésta pueden ser continuos (mediante luz artificial),
discontinuos (periodos de iluminación alternados con periodos de oscuridad también
con luz artificial) o el ciclo natural día y noche (Richmond 1986)
La ​aireación​, asegura la distribución homogénea de las células y los nutrientes dentro
del cultivo, dejándolos disponibles para su mejor aprovechamiento, mejora la
distribución de la luz a las células asegurando que permanezcan fotosintéticamente
activas, evitando que se sedimenten, y previene una estratificación térmica (Richmond
1986).
En el caso de la ​temperatura​, las microalgas en las que se está interesado generalmente
para su cultivo, son las consideradas como especies tropicales, debido a que su
crecimiento no sufre alteraciones en un intervalo de 16 a 27°C presentando un óptimo
de 24°C. Bajas temperaturas en referencia con el intervalo anterior no matan a la
microalga, sin embargo, puede provocar una disminución de crecimiento, temperaturas
arriba de 35°C provocarían que la mayoría de las microalgas colapsaran (Hoof y Snell
2001).
 
 
 
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El intervalo de ​salinidad​ óptimo para una microalga dependerá de la especie.
Generalmente en el cultivo a interiores este parámetro no es controlado y se maneja la
salinídad presente en el agua de mar. En un cultivo a exterior la salinidad se convierte en
el parámetro control en el crecimiento de la microalga (Abalde et al 1995).
Ley fundamnetal de volumetria
 
 
 

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  • 1. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   Título del proyecto Potencial ficorremediador de la microalga ​chlorella spp ​en aguas contaminadas por mercurio Nombres y apellidos completos de los integrantes Luis Miguel Cardona Saldarriaga. Sebastian Oquendo Serna. Kevin Salazar Lopez. Nombre del equipo Bioalgae Asesor(es) Robinson Salazar (Colegio Loyola) Dallany Milena Urrego G. (Sena TecnoAcademia ) Luis Alvaro Gómez T. (Colegio Loyola) Institución Educativa Colegio Loyola para la Ciencia y la Innovación Comité de Investigación Escolar Medellín 2020      
  • 2. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   AGRADECIMIENTOS Agradecemos a la institución educativa Colegio Loyola por brindarnos los recursos para la elaboración de este proyecto, al profesor Robinson Salazar por su acompañamiento como asesor de este proyecto y demás profesores los cuales durante el paso de los años nos han acompañado en el ámbito de la investigación y nos han aportado a nuestra educacion y formacion, también agradecemos al Sena Tecnoacademia por prestarnos sus instalaciones, y darnos asesores con gran experiencia en el ámbito de la investigación y formación académica como Dallany Urrego.      
  • 3. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   CONTENIDO Pág. Resumen 1. Introducción 2. Descripción del problema y pregunta de investigación 3. Objetivo general y objetivos específicos 4. Justificación e impacto social/ambiental 5. Antecedentes y marco teórico 6. Ruta metodológica 7. Resultados y discusión 8. Conclusiones Referencias bibliográficas Anexos      
  • 4. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   LISTA DE TABLAS Pág. Tabla 1. Título de la tabla Tabla 2. Título de la tabla Tabla 3. Título de la tabla LISTA DE FIGURAS Pág. Figura 1. Título de la figura Figura 2. Título de la figura Figura 3. Título de la figura LISTA DE ANEXOS Pág. Anexo 1. Título del anexo Anexo 2. Título del anexo Anexo 3. Título del anexo      
  • 5. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   Resumen Palabras clave Abstract Keywords 1. Introducción Las microalgas en la actualidad tienen muchos usos, ya que tienen un rápido crecimiento y gran facilidad de adaptarse al medio ambiente, además poseen compuestos por los cuales hacen que sean utilices muchas áreas de la ciencia y por lo que decidimos utilizar la microalga ​Chlorella (spp) para reducir los niveles de mercurio en el río cauca que pasa por santafe de Antioquia, lugar donde se encuentran mucho sedimentos de mercurio y otros metales pesados por la minería ilegal que allí se practica, esta microalga tiene una gran absorción de los metales pesados como lo es el mercurio y por lo que decidimos enfocar nuestro proyecto en este tema, el cual a afectado a la población colombiana desde hace mucho tiempo, este proyecto consta de 4 fases la cuales para poder saber ¿Cuál es el potencial ficorremediador de la microalga chlorella spp ​sobre las aguas contaminadas por mercurio? e intentar darle una solución que ayude a muchos.      
  • 6. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   2. Descripción del problema y pregunta de investigación A nivel mundial el Mercurio siempre ha estado presente en el medio ambiente, este entra en el ambiente como resultado de la ruptura de minerales de rocas y suelos a través de la exposición al viento y agua. La liberación de Mercurio desde fuentes naturales en los años pasados habían permanecido en el mismo nivel, pero en la actualidad las concentraciones de mercurio en el medio ambiente han estado subiendo exponencialmente, esto es debido a la actividad humana en la naturaleza, como por ejemplo; la extracción de minerales que hay en la tierra de manera ilegal, al procesar las rocas o arenas donde están los minerales se cuelan sedimentos a los ríos y ciénagas, por ejemplo los cuerpos de agua son contaminados cuando el mercurio presente en el aire en forma de partículas, se precipita por efecto de la condensación viajando unido a partículas de polvo cayendo en los cuerpos de agua. En el lodo de los ecosistemas acuáticos, el mercurio es transformado por bacterias o otros microorganismos a metilmercurio, esta es una substancia que puede ser absorbida rápidamente por la mayoría de los organismos y es conocido que daña al sistema nervioso y capaz de incorporarse a la cadena alimenticia como los peces hasta llegar a nosotros. El mercurio es un metal líquido, color plata brillante, buen conductor de la electricidad y relativamente inerte ante el oxígeno y los ácidos; en forma líquida es volátil entre los 20 y 25 grados centígrados; es soluble en líquidos polares y no polares. El mercurio es poco abundante en la corteza terrestre, su concentración natural es de 0,08 ppm. En Colombia, la minería de oro es la fuente de supervivencia para muchas familias en      
  • 7. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   especial, en zonas con poca presencia estatal. Sin importar su estatus (legal o ilegal) el mercurio es un verdadero problema de salud pública. En áreas como el sur de Bolívar, Antioquia, el Pacífico, Santander y la Cuenca Amazónica, por ejemplo, la contaminación de los cuerpos de agua ha sido documentada, así como la exposición en humanos, la cual varía de acuerdo con la región. Varias universidades de la nación se han puesto a ver alternativas que pueden solucionar este problema ya que hay varias técnicas pero salen bastante costos y no se pueden implementar de una manera rápida y eficientes, tales como separación del oro por medio gravitacional. pregunta de investigación ¿Cuál es el potencial ficorremediador de la microalga ​chlorella spp ​sobre las aguas contaminadas por mercurio? 3. Objetivo general y objetivos específicos Objetivo general: Determinar el nivel de extracción de mercurio (Hg) de la microalga ​chlorella spp. usando espectrofotometría de absorción atómica, para su uso potencial en la ficorremediación de aguas contaminadas por Hg.      
  • 8. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   Objetivos específicos Determinar el crecimiento de la microalga ​chlorella (spp) en un medio de cultivo suplementado con cloruro de mercurio a través del conteo en cámara de Neubauer. Analizar la concentración de cloruro de mercurio en el medio de cultivo y en la biomasa de la microalga mediante espectrofotometría de absorción atómica. 4. Justificación e impacto social/ambiental El equipo de Investigación Bioalgae y tiene un proyecto con el cual quieren realizar una biorremediación por medio de una microalga llamada chlorella spp para tratar aguas contaminadas por mercurio, con este proyecto estarán aportando al mejoramiento de los alrededores del río que está contaminado, mejorando la calidad del agua que está siendo afectada por el mercurio, además es una idea innovadora, ya que las microalgas por lo general son utilizadas para hacer comida para animales, realizar descontaminación de aguas residuales, descontaminar el aire, etc y ellos están implementando esta microalga en algo nuevo. 5. Antecedentes y marco teórico Mercurio: El mercurio y sus compuestos son extremadamente tóxicos para los seres humanos y el medio ambiente. En grandes cantidades puede ser mortal, la inhalación      
  • 9. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   de vapor de mercurio es la ruta más importante de penetración del mercurio elemental en el cuerpo humano. Aproximadamente el 80% del vapor de mercurio inhalado es retenido por el organismo. Una vez absorbido, el mercurio elemental es distribuido con facilidad por todo el cuerpo; es capaz de atravesar las barreras sangre placenta y sangre-cerebro. El mercurio elemental es oxidado a mercurio inorgánico divalente vía hidrógeno peroxidasa-catalasa, presente en la mayoría de tejidos. La distribución del mercurio elemental absorbido se encuentra limitada principalmente por la oxidación a mercurio divalente, puesto que este último tiene una movilidad mucho más reducida La inhalación prolongada de vapores de mercurio puede dar lugar a dolores de pecho, disnea, hemoptisis y en algunas ocasiones neumonitis intersticial que puede ocasionar la muerte. La ingestión de compuestos mercuriales, en particular el cloruro de mercurio, puede causar gastroenteritis ulcerosa y necrosis tubular aguda causando la muerte por anuria en caso de no realizarse diálisis [13]. Incluso en dosis relativamente bajas pueden afectar gravemente el desarrollo de sistemas nerviosos, el sistema central nervioso es el órgano crítico en la exposición de vapores de mercurio, la exposición aguda puede dar lugar a reacciones psicóticas caracterizadas por delirios y tendencias suicidas La toxicidad para los humanos y otros organismos depende de la forma química, la cantidad, la vía de exposición y la vulnerabilidad de la persona expuesta. Algunas personas son especialmente sensibles y vulnerables a la exposición al mercurio, en particular el feto, el recién nacido y los niños pequeños debido a la sensibilidad del sistema nervioso en desarrollo. Así, los padres, las mujeres embarazadas y mujeres que desean quedar embarazadas sobre todo, deben ser conscientes del daño potencial del metil mercurio. Los límites críticos permisibles para evitar efectos ecológicos por el mercurio en suelos orgánicos se han fijado en 0,07 - 0,3 mg/kg de mercurio total en los suelos. El riñón es el órgano diana      
  • 10. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   en el caso de ingestión de sales de mercurio inorgánico divalente, pudiéndose desarrollar síndromes nefríticos como resultado de una respuesta inmunotoxica. Las glándulas tiroidales pueden acumular mercurio en caso de exposición continua a mercurio elemental. Se ha mostrado que una exposición ocupacional moderada afecta un sistema particular de enzimas de la tiroides a niveles de mercurio en la orina de 15-30 mg/g de creatinina, los mismos niveles son mencionados en los informes sobre los efectos menores en el sistema nervioso central y los riñones.(Universidad de Cordoba. 2014) Un factor muy importante de los efectos del mercurio en el medio ambiente es su capacidad para acumularse en organismos y ascender por la cadena alimentaria, como se puede apreciar a continuación Este metal está presente en mayor cantidad en los pescados azules, siendo relevante comentar que los beneficios que aporta el consumo de pescado son mayores que los riesgos que genera el mercurio. Desde la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA) recomienda seguir las recomendaciones de la pirámide alimentaria en el consumo de pescado. Los pescados que presentan mayor acumulación de este metal son el atún rojo grande, lucio, pez espada o emperador, el tiburón, la panga y la perca En el mundo se han duplicado e incluso cuadruplicado los niveles de mercurio durante los últimos 25 años en focas anilladas y belugas de algunas áreas del Ártico canadiense y Groenlandia. En aguas más cálidas los mamíferos marinos depredadores también pueden estar en riesgo. Las aves piscívoras se exponen al mercurio por el pescado que consumen, en las regiones donde los peces tienen altas concentraciones de mercurio,      
  • 11. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   estas aves pueden correr el riesgo de sufrir efectos en la reproducción y el comportamiento El mercurio inorgánico también puede ser absorbido pero por lo general en menores cantidades y con menor eficiencia que el metil mercurio [14]. La biomagnificación del mercurio es el componente que más incide a la salud de animales y seres humanos; los peces adhieren con fuerza el metilmercurio debido a su afinidad por los compuestos proteínicos; casi el 100% del mercurio se bioacumula en peces depredadores como consecuencia de su dieta Aunque en el contenido intestinal y en la mucosa de algunos peces el mercurio ha sido encontrado en su forma metilada debido a la Las microalgas poseen una capacidad ficorremediadora que consiste en la eliminación de contaminantes de un medio líquido o gaseoso. Estos compuestos contaminantes son captados por la biomasa algal y pueden ser recuperados mediante su cosecha. Esta capacidad resulta en un sistema de cultivo con 2 propósitos: eliminación de contaminantes y producción de biomasa con fines comerciales. Ambos objetivos dependen del sistema de cultivo, la o las especies cultivadas y los factores ambientales. La utilización de medios contaminados en el cultivo impacta directamente en los costos de producción. La elección del tipo de sistema de cultivo es importante, y debe realizarse en base a factores biológicos, técnicos, ambientales y económicos, definidos previamente. La cosecha de la biomasa algal es el procedimiento más complejo y costoso en el cultivo de microalgas, existiendo varias técnicas diferentes tanto en eficiencia como en complejidad. La producción de biomasa de microalgas ha proporcionado una amplia gama de productos biotecnológicos con usos en la industria alimenticia, salud y medicina humana, alimentación animal, compuestos orgánicos y biocombustibles. Todo      
  • 12. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   esto adquiere una gran importancia debido a los problemas ambientales globales existentes en la actualidad. El presente trabajo, recopila de forma general la información actualizada (1972 a 2014) sobre diferentes aspectos y parámetros de importancia en el cultivo de microalgas, sus múltiples usos y beneficios. 6. Ruta metodológica 1. Crecimiento de la microalga (subcultivos). 2. Cultivo de la microalga en solución de cloruro de mercurio en erlenmeyers 3. Seguimiento mediante Conteo con cámara de Neubauer. 4. Análisis de la concentración de mercurio en medio de cultivo y biomasa de la microalga. 5. Potencial fitorremediador de la microalga. Objetivo 1: Determinar el crecimiento de la microalga ​chlorella (spp) en un medio de cultivo suplementado con cloruro de mercurio a través del conteo en cámara de Neubauer. Actividad 1. Preparar el medio de cultivo para el crecimiento de la microalga Medio de cultivo debe tener una condiciones con ​6 Bombillos led luz blanca de 100w            constante (periodos de 12 horas luz y noche), 6 Bombillos led luz blanca de 100w agitación permitiendo que todas la células reciban la luz, y mantener una temperatura constante la cual debe ser menos de 25°C. ​El cultivo se tendrá un tiempo de 8 días mientras elaboramos la curva de crecimiento en una gráfica para así tener un mejor      
  • 13. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   análisis, en el 9 dia de preparación se le introducirá el cloruro de mercurio a la muestra con una cantidad de cloruro de mercurio 7.5, 8.0 y 8-5 g por cada 100 o 150 ml de agua. mediante una parrilla se hará una agitación de 8h el cual combinaremos con el fotoperiodo 12 horas en temperatura ambiente, se prepararon algunas soluciones madres con un total de 1 litro por cada solución, las cuales son: Dr. Carlos Aponte. (2013). Fragmentos Microbiológicos: Revista del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel. SCIELO. Recuperado de http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0798-04772013000100009&fbclid=IwAR2r QRG3UZ_BjV9CNGXpDV_CNb8MUfxUVFndIgkpBM553jWPm9Atwv1ZyzU CHU-13 modificado Solución Madre 1​: FeSO​4​.7H​2​O y Na​2​ EDTA [1mL/1L] Solución Madre 2​: H​3​BO​3​ , Na​2​MoO​4​.2H​2​O , ZnSO​4​ , CoCl​2​.6H​2​O , MnCl​2​ , CaCl​2​.2H​2​O [1mL/1L] Solución Madre 3​: K​2​HPO​4​ [1mL/1L] Solución Madre 4​: MgSO​4​.7H​2​O​​[2mL/1L] Solución Madre 5​: CaCl​2​.2H​2​O [2mL/1L] Solución Madre 6​: KNO​3​ [2mL/1L] Solución Madre 7​: NaHCO​3​ [4g/1L]      
  • 14. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   Actividad 2. Seguimiento a los subcultivos Para este paso el seguimiento que se le hará a los subcultivos se realizará mediante espectrofotometría,determinaremos el crecimiento que está teniendo el cultivo en la cual vamos analizar el tiempo en el que se presentarán cada una de las fases del proceso, las cuales se determinan mediante la cantidad de células vivas y muertas como lo podemos ver en la siguiente imagen. Patrón estándar de crecimiento indicado por las siguientes fases: Actividad 3. Preparación de muestra de solución de cloruro de mercurio. Seleccionaremos tres concentraciones de cloruro mercurio para llevar a cabo el estudio, utilizaremos 7.5, 8.0 y 8,5 g de cloruro de mercurio diluido en 100 ml de agua. . Actividad 4. Preparar el medio de cultivo suplementado con la solución de cloruro de mercurio.      
  • 15. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   Se prepararan los siguientes nutrientes con el metal para así empezar con la inoculación en un volumen de 250ml Componentes mg/L KNO 400 KHPO 80 CaCl dihidrato 107 MgSO heptahidrato 200 Citrato Ferrico 20 Ácido Cítrico 100 CoCl 0.02 HBO 5.72 MnCl tetrahidrato 3.62 ZnSO heptahidrato 0.44      
  • 16. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   CuSO pentahidrato 0.16 NaMoO 0.084 0.072 N HSO 1 gota HgCl2 ¿? Para agregar estas cantidades se utiliza una pipeta automática Eppendorff con puntas previamente esterilizadas Para la esterilización de las puntas se colocan en un frasco de vidrio para autoclave con tapadera y un algodón en el fondo o en cajas de plÆstico resistentes al calor el primero para puntas de 100 I Y el segundo para el caso de las puntas de 1 mL se meten en el autoclave junto con los matraces a esterilizar son 120ºC, 15Psi por 15 min flujo laminar. Actividad 5. Inocular la microalga en la mezcla anterior Se agitará para mezclar el metal añadido a la solución de la microalga.​Cuando esta en la etapa de reproducción de algas. La cepa (250 ml o menos) siguen aisladas bajo luz, agitación y clima controlados y se emplea cuando es necesario inocular. Ni se airean ni se añade dióxido de carbono. Los inóculos (250 ml a 4 l en volumen) crecen rápidamente durante un período de 7 a 14 días a temperaturas e intensidad de luz más elevadas con un aporte de aire. Cuando están listos, una pequeña proporción del volumen se emplea para iniciar nuevos inóculos y la porción principal para comenzar un cultivo a escala intermedia. Los cultivos intermedios (normalmente de entre 4 l y 20 l en volumen) pueden emplearse como alimento para las larvas o para iniciar un cultivo a gran escala.      
  • 17. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   ¿cómo se hace? Actividad 6. Seguimiento al crecimiento de la microalga Para determinar la capacidad de adaptación y crecimiento se realizarán placas con observación al microscopio óptico verificando que las microalgas están vivas, además de realizar un conteo celular durante el tiempo de retención del cloruro de mercurio. Cámara de Neubauer Al colocar el cubreobjetos encima de la superficie donde se encuentra grabada la cuadrícula existe entre ellos cuadrícula y cubreobjetos una distancia fija profundidad de 0,1 mm misma que viene indicada en el portaobjetos Por lo tanto el volumen de la muestra problema en uno de los cuadros grandes de 1 mm2 de superficie serÆ igual a 10 mm2 X 0 1 mm 0 1 mm3 Las tØcnicas de conteo consideran el nœmero de individuos presentes en la muestra de volumen determinado y comœnmente se expresan como nœmero de individuos por cada mililitro Ya que 1 mL cm3 1000 mm3 y como 1000 mm3 10 000 X 0 1 mm3 entonces 1 mL 10 000 veces el volumen de la muestra que como ya se vio es siempre de 0 1 mm3.      
  • 18. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   Objetivo 2: Analizar la concentración de cloruro de mercurio en el medio de cultivo y en la biomasa de la microalga mediante espectrofotometría de absorción atómica. Actividad 1. Medición de mercurio en el medio de cultivo. Mediante el proceso se realizarán mediciones diarias de muestras que extraemos de las muestras, las cuales serán filtradas con mallas de fibra de vidrio. Esto nos ayudará a identificar la disminución del mercurio en ​función de los días en los que se desarrollará el proceso de biosorción (​es un proceso fisicoquímico que ocurre naturalmente en cierta biomasa que le permite concentrar pasivamente y unir contaminantes en su estructura celular. La biosorción se puede definir como la capacidad de los materiales biológicos de acumular​) con las microalgas. Actividad 2. Medición de mercurio en la biomasa de la microalga. Para este proceso se elaborará un espectrofotometría de absorción ​atómica(AA) para medir las concentraciones especificas y poder tener una muestra más exacta y acertada a la hora de medirla para pasar de ahí al análisis de resultados Actividad 3.      
  • 19. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   Análisis de los resultados. A la hora de realizar el análisis debemos tener en cuenta los siguientes aspectos: -Cinética de crecimiento. Tendremos que realizar un conteo celular durante la etapa de tratamiento del agua residual en los fotobiorreactores con las cepas de microalgas. Gracias a este conteo podremos obtener la densidad celular obtenida durante la etapa en la que se hará el tratamiento del mercurio. Según los datos que obtengamos dia a dia realizaremos una gráfica en la que se verá reflejado un crecimiento exponencial o decreciente según el estado de las células de la microalga. -Absorbancia de mercurio. Al igual que en el conteo celular realizaremos un seguimiento dia a dia de la disminución del mercurio, a partir de estos datos realizaremos una gráfica en la que podremos hacer un análisis de los datos suministrados. Adicionalmente se ha determinado que la relación entre la concentración y absorbancia de mercurio con los valores de la densidad celular es inversamente proporcional, es decir a mayor crecimiento, mayor remoción del contaminante, durante la fase de crecimiento exponencial.      
  • 20. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   Todos estos datos Actividad 5. Determinación del potencial. 7. Resultados y discusión Se espera que la microalga pueda reducir la cantidad de mercurio presente en el agua, a escala de laboratorio Al obtener la muestra de mercurio se medirá la cantidad que obtuvimos por medio de la ​espectroscopia de absorción atómica​, procederemos a medir cuántas células de la microalga tenemos por medio de la cámara de Neubauer,. se hará un análisis de las muestras después del seguimiento continuo de 8 días para lograr ver cómo actuó la microalga en su proceso de crecimiento, para determinar en qué tiempo se haría la primera experimentación con la muestra de mercurio,teniendo en cuenta la cantidad de microalgas presentes en la reacción química con el mercurio y evaluando el potencial que tuvieron a la hora de realizar la biorremediación podremos evaluar la la cantidad necesaria para que el proceso sea mucho más efectivo. Al hacer el análisis de las muestras elaboramos una tabla la cual nos mostrará un índice de eliminación de mercurio en un tiempo esperado de 30 días la cual nos mostrará que tal actúa la microalga con el mercurio, después de haber determinado un medio de cultivo(CHU-13) el cual no consuma muchos recursos y elaborar el mejor proceso para la desinfección del agua 8. Conclusiones      
  • 21. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   Referencias bibliográficas ● Vera, J. A. (2016). ​Remoción de mercurio en aguas contaminadas mediante microorganismos tolerantes, una aproximación a la biorremediación microbiana. Bogota D. C. Universidad Santo Tomás.   ● Sepúlveda L. E., Agudelo L. M., Arengas A. I. (2006). ​El mercurio, sus implicaciones en la salud y en el ambiente. ​lunazul.ucaldas.edu.co  ● Tafur J. E., Estrada Palencia L. (2015). ​Tratamiento de aguas residuales in vitro por medio de la microalga Chlorella sp en el municipio de Barrancabermeja, Colombia. ​Revista CITECSA - Instituto Universitario de la paz – Volumen VI; Número 10.  ● Arcila A. F. Determinación de Mercurio por Espectrofotometría deAbsorción Atómica-Vapor Frío para Aguas (Tratada y Cruda) (Tratamiento de las muestras mediante digestión con ácido nítrico, sulfúrico y permanganato de potasio. ​Universidad tecnológica de Pereira  ● Alipio León Y., Fundación Universitaria Horizonte. ​Intoxicación Por Mercurio.   Anexos Cultivo de la microalga: La reproducción es generalmente por división binaria con tiempos de duplicación de una hora o menos para los procariotas cianobacterias y de 8 a 24 horas o más para las eucariotas (Carpenter 1979 Dawes 1991). Para conseguir un cultivo de microalgas en crecimiento activo, es necesario: un inóculo viable de tamaño mínimo, suministro de nutrientes y microelementos, adecuadas      
  • 22. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   condiciones químicas y físicas( luz, aireación, temperatura, salinidad y energía (Cañizares 1994). Como parámetros físicos se consideran: La ​luz​ las microalgas son fotoautótrofas encargadas de convertir la energía luminosa en metabólica por medio de la fotosíntesis y sus periodos de exposición a ésta pueden ser continuos (mediante luz artificial), discontinuos (periodos de iluminación alternados con periodos de oscuridad también con luz artificial) o el ciclo natural día y noche (Richmond 1986) La ​aireación​, asegura la distribución homogénea de las células y los nutrientes dentro del cultivo, dejándolos disponibles para su mejor aprovechamiento, mejora la distribución de la luz a las células asegurando que permanezcan fotosintéticamente activas, evitando que se sedimenten, y previene una estratificación térmica (Richmond 1986). En el caso de la ​temperatura​, las microalgas en las que se está interesado generalmente para su cultivo, son las consideradas como especies tropicales, debido a que su crecimiento no sufre alteraciones en un intervalo de 16 a 27°C presentando un óptimo de 24°C. Bajas temperaturas en referencia con el intervalo anterior no matan a la microalga, sin embargo, puede provocar una disminución de crecimiento, temperaturas arriba de 35°C provocarían que la mayoría de las microalgas colapsaran (Hoof y Snell 2001).      
  • 23. INSTITUCIÓN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCIA Y LA INNOVACIÓN Resolución de Creación: 00003 de Enero 05 de 2010 Cra. 65 No. 98A-75, Teléfono: 4405105 NIT: 900339251-3, DANE: 105001025984 Página web: www.iecolegioloyola.edu.co Núcleo 920, Castilla, Medellín HUMANISMO E INVESTIGACIÓN PARA LA VIDA Proceso: GESTIÓN CURRICULAR Nombre documento: PROYECTO Código: GCU-FR20 Versión: 01   El intervalo de ​salinidad​ óptimo para una microalga dependerá de la especie. Generalmente en el cultivo a interiores este parámetro no es controlado y se maneja la salinídad presente en el agua de mar. En un cultivo a exterior la salinidad se convierte en el parámetro control en el crecimiento de la microalga (Abalde et al 1995). Ley fundamnetal de volumetria