TP Informatica de la UNQ alumna Priscila Pubul

1. REPLICATION OF
MITOCHONDRIAL DNA
OCCURS BY STRAND
DISPLACEMENT WITH
ALTERNATIVE LIGHT-STRAND
ORIGINS, NOT VIA STRAND-
COUPLED MECHANISM
Thimothy A. Brown, Ciro Cecconi, Ariana N.
Tkachuk, Carlos Bustamante y David A. Clayton
Cornaglia Schaffer, Mayra

2. Estudios nuevos propusieron un modelo
de replicación bidireccional en tejidos
Puso en duda el modelo de
replicación por desplazamiento
Objetivo: demostrar lo contrario

3. COMPARACIÓN ENTRE AMBOS
MODELOS PROPUESTOS

4. PAPERS ANTERIORES
 Re-examinan el modelo de replicación
mitocondrial en mamíferos, contradiciendo toda
evidencia previa.

5. ¿QUÉ DETECTARON?
 Usando electroforesis bidimensional de agarosa,
se encontraron con y-arcs entre las dos
secuencias de origen, concluyendo que era
inconsistente con el modelo asimétrico.

6. ¿CÓMO JUSTIFICAN?
 Atribuyen resultados anteriores a errores
experimentales, que llevan a la
degradación preferencial de la cadena
retrasada por un contaminante en las
muestras con actividad RNasa.

7. Estudios Electroforesis 2D
Anteriores
-Microscopía de
Fuerza Atómica
Estrategia (AFM)
-Electroforesis 2D
-Sólo se evidencia la
replicación por
Resultado desplazamiento
s -Se reveló la presencia de
orígenes alternativos de la
cadena liviana (L)

8. AFM (ATOMIC FORCE MICROSCOPE)
 Instrumento mecánico
óptico que permite el
mapeo topográfico de una
muestra, con altísima
resolución (del orden de los
nanometros)

9. PROTOCOLO DE PREPARACIÓN DE
MUESTRAS PARA SU REVELADO
POR AFM
 Con el objetivo de mejorar la visibilidad
de los segmentos de DNA de simple
cadena al microscopio, se propuso incubar
las muestras con SSBp.
 El protocolo demostró ser funcional en
muestras de M13 (B).
 Se aplicó entonces el mismo protocolo a
las muestras de mtDNA (C).
 Se demostró además que el protocolo no
afecta a la correcta interpretación de los
resultados.

10. VISUALIZACIÓN DIRECTA DEL
MTDNA POR AFM

11. INTERMEDIARIOS REPLICATIVOS
DEL MTDNA
Azul: hebra parental
Rojo: ssDNA + SSB
Celeste: cadena H
naciente
Verde: cadena L
naciente

12. LONGITUDES PERCEPTIBLES DE
LAS REGIONES DESPLAZADAS DE
EXP-D Y GPC

13. POSIBLES ORÍGENES DE LA
CADENA LIVIANA
Azul: hebra parental
Rojo: ssDNA + SSB
Celeste: cadena H
naciente
Verde: cadena L
naciente

14. ANÁLISIS POR ELECTROFORESIS 2D:
Y-ARCS

15. ¡¡Muchas gracias
por su atención!!
 ¿Alguna pregunta?