histologia

1. Histologia

2. HISTOLOGÍA
Histología [ histos = tejidos; logía = ciencia], también llamada
anatomía microscópica, es el estudio científico de las estructuras
microscópicas de los tejidos y órganos del cuerpo.

3. MICROSCOPÍA - MICROSCOPIA OPTICA
Un microscopio, ya sea simple (una sola lente) o compuesto
(lentes múltiples), es un instrumento que amplifica una imagen y
permite ver más detalles de lo que es posible a simple vista. El
microscopio más simple es una lupa o un par de gafas o anteojos
para leer.
El poder de resolución del ojo humano, es decir, la distancia a la
que deben estar dos objetos para que se vean por separado (0,2
mm), está determinado por el espacio que hay entre las células
fotorreceptoras contiguas de la retina.
El poder de resolución es la capacidad de una lente de
microscopio
o sistema óptico para obtener imágenes separadas
de objetos que están muy cerca unos de otros.

5.  UN MICROSCOPIO ES UN DISPOSITIVO ENCARGADO
DE HACER VISIBLES OBJETOS MUY PEQUEÑOS.
 ES EL INSTRUMENTO MAS IMPORTANTE EN LA HISTOLOGÍA ,
DEBIDO AL TAMAÑO DE LAS ESTRUCTURAS ANALIZADAS.
 SE CLASIFICA SEGÚN EL TIPO DE FUENTE LUMINOSA QUE
UTILICE.
Microscopio.

6. M
I
C
R
O
S
C
O
P
I
O

7.  La lente ocular aumenta la imagen producida por la
lente objetivo, pero no puede aumentar la resolución.
El microscopio utilizado por la mayor parte de los estudiantes e investigadores es
el microscopio de campo claro.
Los componentes del microscopio de campo claro son los siguientes:
• fuente luminosa para la iluminación de la muestra (p. ej.,una lámpara en la
base del microscopio),
• lente condensador para enfocar el haz de luz a la altura
de la muestra,
• platina sobre la que se coloca el portaobjetos,
• lente objetivo para recoger la luz que ha atravesado la
muestra y
lente ocular (o un par de lentes oculares en los microscopios binoculares, de uso
más común) a través de la cual se puede examinar directamente la imagen
formada por la lente de objetivo.

9.  En todas las etapas de la preparación del tejido pueden generarse
artefactos(error en el proceso de preparación) en preparados histológicos.
Otros sistemas ópticos:
El microscopio de contraste de fases permite el examen de
células y tejidos no teñidos y es especialmente útil para estudiar células vivas.
Dos modificaciones del microscopio de contraste de fase son el microscopio de
interferencia, que también permite la cuantificación de la masa tisular y el
microscopio de interferencia diferencial (usando óptica de Nomarski), que
presenta una utilidad especial para valorar las propiedades de la superficie
de las células y otras muestras biológicas

10.  Otros sistemas ópticos.
 Microscopio de campo oscuro: la lente del objetivo no capta la luz directa
proveniente de la fuente luminosa. En la clínica se aplica para la detección de
cristales en la orina, como los de oxalato o de ácido úrico y para la identificación
de bacterias específicas, como las espiroquetas, en particular, Treponema
Pallidum(microorganismo causante de la sífilis, enfermedad de transmisión
sexual).
 Microscopio de fluorescencia: se utiliza para la detección de moléculas con
fluorescencia natural, como la Vitamina A y algunos neurotransmisores.
 Microscopio confocal de barrido: permite la visualización de una muestra
biológica en tres dimensiones.(combina componentes de un microscopio óptico de
campo clarocon un sistema de barrido para disecar ópticamente una muestra).

11. Otros sistemas ópticos.
 Microscopio de luz ultravioleta: depende de la absorción de luz UV por las
moléculas en la muestra. Sirve para la detección de ácidos nucleicos,
específicamente las bases de purina y pirimidina de los nucleótidos, para la
detección de proteínas que contienen ciertos aminoácidos.
 Microscopio de luz polarizada: es una simple modificación del microscopio
óptico de campo claro en la cual un filtro de polarización, llamado
polarizador, se coloca entre la fuente de luz y la muestra, y un segundo
filtro, llamado analizador, se instala entre la lente objetivo y el
observador.(músculo estriado y las inclusiones cristaloides en las células
intersticiales (células de Leydig) testiculares, entre otras estructuras
comunes, exhiben birrefringencia.)

12. ÓPTICO
•ÓPTICO SIMPLE.
•ÓPTICO COMPUESTO.
ELECTRÓNICO
•ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN.
•ELECTRÓNICO DE
BARRIDO.
Tipos de Microscopios.

13.  SISTEMA ÓPTICO.
 SISTEMA DE ILUMINACIÓN.
 SISTEMA MECÁNICO.
Componentes del microscopio óptico.

14. OCULAR
OBJETIVOS
FUENTE DE LUZ
CONDENSADOR
Sistema óptico y de iluminación.

15. ES CILINDRO HUECO METÁLICO, PROVISTO DE UNA
LENTE O UN SISTEMA DE LENTES CONVERGENTES, CUYA
FINALIDAD ES AUMENTAR LA IMAGEN REAL E
INVERTIDA ENVIADA POR EL OBJETIVO.
Ocular.

16. LENTE SITUADA CERCA
DE LA PREPARACIÓN.
AMPLÍA LA IMAGEN DE
4X, 10X,40X,100X.
Objetivo.

17. SE ENCARGA DE
CONCENTRAR EL
HAZ DE LUZ
SOBRE LA
PREPARACIÓN.
Condensador y Diafragma.

18. BASE
COLUMNA
PLATINA
CABEZAL
BRAZO
Sistema Mecánico.

19. REVOLVER
PLATINA
TORNILLO
MACROMÉTRICO
TORNILLO
MICROMÉTRICO

20. TORNILLO
MACROMÉTRICO
TORNILLO
MICROMÉTRICO

23. M.O M.E.T M.E.B

26. PREPARACIÓN DE TEJIDOS:
Tinción con hematoxilina y eosina de muestras fijadas en formolina:
El corte de rutina teñido con hematoxilina y eosina es la muestra que
mas frecuentemente se estudia.
Pasos para la preparación de una muestra de tejido u órgano:

27. PRIMER PASO
 La fijación: mediante el empleo de sustancias químicas individuales o
mezclas de estas sustancias, conserva el tejido de forma permanente la
fijación se utiliza para:
Abolir el metabolismo celular impedir la degradación enzimática de las
células, y de los tejidos por autolisis, destruir microorganismos
patógenos(bacteria, hongos o virus),endurecer el tejido.
El fijador de uso más común es la formolina( solución acuosa de
formolaldehido al 37% ).

28. SEGUNDO PASO
 Inclusión en parafina(para permitir su corte)luego de la fijación la muestra
se lava y se deshidrata en una seria de soluciones alcohólicas de
concentración creciente hasta alcanzar alcohol al 100%. Paso siguiente :
aclarado( xileno o tolueno que son miscible en alcohol como en parafina,
para extraer el alcohol al 100%). Cuando la parafina fundida se ha enfriado y
endurecido se empareja para formar un bloque de tamaño adecuado (llamado
taco.)entonces se coloca en una maquina cortadora especial, el micrótomo
que corta en rebanadas finas con una cuchilla de acero y los cortes obtenidos
se montan sobre portaobjetos de vidrio a los que se le ha añadido una
pequeña cantidad de medio de montaje(albumina, resinas acrílicas).

33. TERCER PASO
 Tinción de la muestra: dado que los cortes con parafina son incoloros,
la muestra todavía no esta lista para su examen al microscopio óptico,
el tejido sobre el porta objetos se tiñe con hematoxilina en agua y con
eosina es mas soluble en alcohol que en agua.
OTROS FIJADORES
 Formolina: no preserva todos los componentes de las células y los
tejidos, para conservar lípidos neutros, como los de las células
adiposas, deben utilizarse cortes por congelación de tejido fijado en
Formolina y colorantes que se disuelvan en grasas.
 La hematoxilina y la eosina: principalmente evidencia características
estructurales pero no permite ver adecuadamente ciertos componentes
de los cortes histológicos como la elastina, fibras reticulares,
membranas basales y lípidos.

36. HISTOQUÍMICA Y CITOQUÍMICA
 Los procedimientos químicos específicos pueden proveer información detallada acerca de las células
y de los componentes extracelulares de los tejidos.
 Composición química de las muestras histológicas.
La composición química de un tejido listo para una coloración de rutina es muy diferente de la del
tejido vivo.
Ejemplos de complejos macromoleculares grandes( moléculas grandes que no se disuelven con facilidad
en especial después de aplicar el fijador):
 Nucleoproteínas
 Proteínas intracelulares del citoesqueleto
 Proteínas extracelulares
 Complejos de fosfolípidos y proteínas(o hidratos de carbono)en las membranas.
Los siguientes son ejemplos de macromoléculas que se pierden durante la fijación de rutina en
fijadores acuosos.
 Glucógeno
 Proteoglicanos y glucosaminoglicanos

37. Fundamentos químicos de la tinción
 Colorantes ácidos y básicos
 La hematoxilina y la eosina (H&E) son los colorantes de uso más frecuente en la histología.
 Un colorante ácido, como la eosina, tiene una carga neta negativa en su parte coloreada y se
la describe con la fórmula general [Na+ anilina–].
 Un colorante básico tiene una carga neta positiva en su parte coloreada y se lo describe con
la fórmula general [anilina+Cl–].
 La hematoxilina no es exactamente un colorante básico pero tiene propiedades muy
semejantes a las de los colorantes básicos. El color de una anilina no está relacionado con el
hecho de que sea ácida o básica, como lo demuestran los ejemplos de colorantes ácidos o
básico que se presentan en la tabla 1-2.
 Los colorantes básicos reaccionan con los componentes aniónicos de las células y de los
tejidos (componentes que tienen una carga neta negativa).

41.  La capacidad de estos grupos aniónicos de reaccionar con una anilina
o colorante básico se denomina basofilia [gr., afinidad por lo básico].
 La reacción de los grupos catiónicos con un colorante ácido recibe el
nombre de acidofilia [gr., afinidad por lo ácido].

42.  Una cantidad limitada de sustancias dentro de las células y en la matriz extracelular
presenta basofilia. Entre estas sustancias se incluyen:
 heterocromatina y nucléolos del núcleo
 componentes citoplasmáticos
 materiales extracelulares como los hidratos de carbono
 complejos de la matriz del cartílago
 La tinción con colorantes ácidos es menos específica, pero más sustancias dentro de las
células y en la matriz extracelular presentan acidofilia. Entre estas sustancias se
incluyen:
 la mayor parte de los filamentos citoplasmáticos,( especial los de las células musculares)
 la mayoría de los componentes membranosos intracelulares y la mayor parte del
citoplasma no especializado, y
 la mayor parte de las fibras extracelulares.

43. Metacromasia
 Ciertos colorantes básicos reaccionan con los componentes del tejido que cambian su
color normal de azul a rojo o púrpura; este cambio de la absorbancia se llama
metacromasia.
 los gránulos de heparina de los mastocitos y el retículo endoplasmático rugoso de los
plasmocitos, exhiben metacromasia
Grupos aldehído y el reactivo de Schiff
 La capacidad de la fucsina básica decolorada (reactivo de Schiff) para reaccionar con los
grupos aldehído trae como resultado la aparición de un color rojo distintivo y es la base
de las reacciones de ácido peryódico-reactivo de Schiff y deFeulgen.
 La reacción de ácido peryódico-reactivo de Schiff (PAS) tiñe hidratos de carbono y
macromoléculas con abundancia de ellos. Se utiliza para demostrar glucógeno en las
células, moco en diversas células y tejidos, la membrana basal subyacente epitelios y
fibras reticulares en el tejido conjuntivo. El reactivo de Schiff también se utiliza en la
reacción de Feulgen, que sebasa en una hidrólisis débil con ácido clorhídrico para teñir el
ADN.

45. Fotomicrografía de tejido renal teñido con
la técnica de PAS. Esta técnica histoquímica sirve para demostrar y localizar
hidratos de carbono y macromoléculas ricas en hidratos de carbono.
Las membranas basales son PAS positivas como lo demuestra la
tinción púrpura de estos sitios. Los túbulos renales (T) se encuentran bien
delineados por la membrana basal teñida que los rodea. Los capilares glomerulares
(C) y el epitelio de la cápsula de Bowman (BC) también poseen
membranas basales de PAS positivas. La muestra se contratiñó con hematoxilina
para visualizar los núcleos celulares. 320 X
T T

47. Inmunocitoquímica
 La especificidad de la reacción entre el antígeno y el anticuerpo es el
fundamento de la inmunocitoquímica. Los anticuerpos, también llamados
inmunoglobulinas, son glucoproteínas que se producen por las células
específicas del sistema inmunitario en respuesta a una proteína extraña o
antígeno.

52. Compartimentos.
Citoplasma.
Núcleo.

53. CITOPLASMA CELULAR.
 Orgánulos (órganos pequeños):
-Membranosos
-No Membranosos
 Matriz Citoplasmática:
-Inclusiones: cristales, gránulos de pigmentos, etc.
-Solutos: iones inorgánicos Na+,K+, Ca++.

54. Membranosos.
o Membrana Plasmática.
o RER.
o REL.
o Aparato de Golgi.
o Endosomas.
o Lisosomas.
o Vesículas deTransporte.
o Mitocondrias.
o Peroxisomas.

55. No Membranosos.
 Microtúbulos.
 Filamentos:
Intermedios y
Microfilamentos.
 Centríolos.
 Ribosomas.

62. Membrana Plasmática
Transporte de iones y
sustancias nutritivas.
Reconocimiento de señales.
Adhesiones célula-célula y
célula-matriz.
-Lipidos
-Proteinas
-Glúcidos

63. Retículo Endoplasmático Rugoso (RER)
 Cisternas y sacos aplanados limitado por membranas y con
Ribosomas adosados
 Traducción del ARN y síntesis de Proteínas.

64. Reticulo Endoplasmático Liso (REL)
 Túbulos y cisternas SIN Ribosomas adosados.
 Metabolismo de Lípidos y Esteroides.
 Almacenamiento de Calcio.
 Desintoxicación.

65. Aparato de Golgi
 Pilas de sacos
membranosos contiguos
al núcleo.
 Modificación química de
proteínas.
 Clasifica y envasa
moléculas para la
secreción o transporte.

66. Mitocondrias
 Producción de
energía en
forma de ATP
.

67. Lisosomas
 Vesículas limitadas por
membrana simple.
 Digestión de
Macromoléculas.
 Enzimas específicas:
Hidrolasas Acidas.
Peroxisomas
 Vesículas limitadas por
membrana simple.
 Digestión Oxidativa.
 Enzimas específicas:
oxidativas (H2O2)

68. No Membranosos
 Elementos del Citoesqueleto:
Microtúbulos.
Filamentos Intermedios.
Microfilamentos.
 Ribosomas.
 Inclusiones.

69. Citoesqueleto

71. Microfilamentos
 Están compuestos predominantemente de un tipo de
proteína contráctil llamada actina
 son finas fibras de proteínas como un hilo de 3-6 nm de
diámetro(F–Actina)
 La proteina fibrilar se compone de monómeros de forma
globular (G-actina)

72. Funciones : movimientos celulares,
incluyendo desplazamiento, contracción y
citocinesis.

73. Microtúbulos
 Los microtùbulos son tubos
cilíndricos de 20-25 nm en
diámetro.
 Están compuestos de
subunidades de la proteína
tubulina, estas subunidades se
llaman alfa y beta.
 Formados por tubulina, en sus
dos formas y , que al unirse,
forman un heterodímero, unidad
básica de los microtúbulos.
 Cada microtubulo se compone de
de 13 protofilamentos, que es
una larga fila hecha de
heterodímeros

75. Funciones de los microtubulos
 actúan como un andamio para determinar la
forma celular.
 proveen pistas para que se muevan los organelos
citoplásmicos.
 forman las fibras del huso mitótico. Forman el
esqueleto de cilios y flagelos.

76. Filamentos intermedios
 Los filamentos intermedios tienen cerca de 10 nm en
diámetro
 proveen fuerza de tensión a la célula.
 formados por un conjunto de proteínas específicas para
cada tipo celular.

77. Filamentos Intermedios.
 En las células epiteliales
existen filamentos
intermedios formados por
vimentina y por queratinas
 en células musculares
predominan los filamentos de
desmina
 A nivel del tejido nervioso, las
proteínas que forman los
filamentos intermedios
(neurofilamentos)

78. Ribosomas
 Pequeños y complejos
 Traducción del ARNm
para síntesis de
proteínas.
 Adosados o libres.

79. Técnicas de estudio de la materia viva
El estudio de la materia viva se puede realizar de dos formas:
MACROSCÓPICAMENTE
A simple vista
MICROSCÓPICAMENTE
Análisis estructural.
Análisis ultraestructural.
Mediante lupa o
microscopio óptico.
Mediante microscopio electrónico.

80. El microscopio óptico
compuesto
Micrométrico
Macrométrico
Platina
Muestra
Pie o estativo
Ocular
Revolver
Objetivo
Condensador
Ajuste de platina
Diafragma de
campo
Fuente de luz

81. MICROSCOPIO DE
INTERFERENCIA
DIFERENCIAL
MICROSCOPIO DE CAMPO BRILLANTE O
DE CAMPO CLARO
Microscopios ópticos y sus imágenes
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
MICROSCOPIO DE CONTRASTE
DE FASE
MICROSCOPIO DE
FLUORESCENCIA O LUZ
ULTRAVIOLETA
MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN

82. Microscopio electrónico de transmisión
(MET)
Cátodo Ánodo
Lente
condensadora
Lente objetivo
Lupa de aumento de la
pantalla visual
Brazo de soporte de la
muestra
Lente de proyección
Pantalla visual
Linfocito a MET

83. Unidades de medida en
Microscopía
Nombre Símbolo Equivalencia
metro m 100 m
milímetro mm 10-3 m
micrómetro µm 10-6 m
nanómetro nm 10-9 m
Angström Å 10-10 m
picómetro pm 10-12 m
femtómetro fm 10-15 m
attómetro am 10-18 m

84. Sombreado metálico

85. Tinción negativa
Lavado de la muestra
Secado de la muestra
Partícula con pequeños huecos
entre sus macromoléculas
(cápsida de un virus)
Película de carbono
(transparente a los
electrones)
Metal pesado atrapado por tensión
superficial entre los huecos
Solución concentrada de una sal de un
metal pesado (acetato de uranilo)

86. Microscopio electrónico de barrido
(MEB)
Haz de electrones
Lente condensador
Deflector del haz
Lente objetivo
Brazo de soporte de la
muestra
Detector
Pantalla
fluorescente
Generador de
barrido
Ameba vista al MEB

87. Imágenes MEB

88. Imágenes MEB

89. Imágenes MEB

90. Criofractura

91. Resumen comparativo de los tipos de
microscopios
Característica MO MET MEB
Portátil sí no no
Aumento X 2 500 X 500 000 X 20 000
Tamaño mínimo
observable 120 nm 1 nm 10 nm
Fotografía B/N y color B/N B/N
Observación
in vivo
sí no no

92. Protocolo de preparación de muestras para microscopía óptica
Extracción de la muestra y fijación
Deshidratación e inclusión en parafina
La muestra se sumerge en una
serie de etanol de gradación
creciente.
Obtención de cortes y colocación en el
portaobjetos
1
2
3
4 Desparafinado, hidratación y tinción
5 Deshidratación y montaje
Para poder
visualizar la muestra al
microscopio es
necesario teñirla.
Se coloca el
cubreobjetos y
se monta con
resinas
naturales.
Los cortes se
realizan
mediante un
microtomo

93. Material para
MET Obtención de cortes mediante un
ultramicrotomo
Contrastado de los cortes
1 Extracción de la muestra y fijación
2 Deshidratación e inclusión en resinas
La muestra se incluye
en una resina epoxi
para poder realizar
cortes finos.
3
Los cortes son muy
finos, de 50 o 100 nm
de grosor.
Estos cortes se
adhieren a una rejilla
circular.
4
Los cortes se
exponen a sales de
metales pesados
como el uranio o el
plomo.
Las rejillas se
colocan en un
soporte que se
introduce en el
ME.
5 Observación de la muestra

94. Cromatografía
Se basa en la diferente afinidad de las moléculas por un disolvente y por la trama porosa de la matriz a través de la que
fluyen.
Tira de papel
Mezcla de
pigmentos
Cubeta
con
alcohol
En la cromatografía de una
muestra de pigmentos vegetales
el disolvente, al ascender por
capilaridad, arrastrará los
pigmentos que se separarán
dependiendo de su afinidad.
Xantofila
Caroteno
Clorofilas
Resultado de la cromatografía

95. Electroforesis en gel de
poliacrilamida
Ánodo
Recipiente de
plástico
Cátodo
Solución
tampón
Gel de
poliacrilamida
Solución tampón
Bandas correspondientes a la
migración de cada porción
proteica
Las manchas se revelan
mediante un colorante.
La migración depende de la carga eléctrica de
cada porción proteica.

96. Electroforesis
bidimensional
Se basa en separar las proteínas
de una mezcla según dos
propiedades moleculares, una en
cada dimensión. Mediante
isoelectroenfoque (gradiente de
pH) y según peso molecular
mediante electroforesis en
poliacrilamida-SDS
(sodiododecilsulfato).

97. Ultracentrifugación
Mediante una fuerza centrífuga equivalente a miles de veces la fuerza de la gravedad, se separan las partículas de una
mezcla, según sus masas, aunque estas sean muy similares.
Cámara acorazada
Material para
sedimentar
Rotor de brazo basculante
Mezcla de componentes
celulares
Sedimentos a tiempos distintos
de centrifugación

98. GRACIAS…