Texto Atlas de Histología Lesly

1. Introducción a la histología
y técnicas histológicas
básicas

2. La Histología es la rama de la anatomía que estudia los tejidos de
animales y plantas.
En su aspecto amplio , la palabra histología se emplea como sinónimo de
anatomía microscópica ya que su materia incluye no sólo los tejidos si no
la célula, órganos y sistemas.

3. El cuerpo está compuesto de células, matriz intercelular y una
sustancia líquida, el líquido extracelular (líquido tisular), que impregna
estos componentes.
El líquido extracelular, que deriva del plasma sanguíneo, transporta
nutrientes, oxígeno y moléculas de señalamiento a las células del
cuerpo. Por el contrario las moléculas de señalamiento, los productos
de deshecho y el dióxido de carbono que liberan las células del
organismo llegan a la sangre y los vasos sanguíneos a través del
líquido tisular. Este no se observa en preparaciones histológicas pero
es importante reconocer su presencia invisible.

4. El objeto de la histología ya no aborda simplemente la estructura del
cuerpo, si no también su funcionamiento. Esta ciencia guarda una
estrecha relación con la biología celular, la bioquímica, fisiología y,
según sea apropiado, la patología.

5. Métodos aplicados para estudiar
la anatomía microscópica del
cuerpo
•Microscopia de Luz
•Microscopia
electrónica

6. Microscopia de Luz
Preparación de los tejidos
Con el fin de estudiar los tejidos de manera que se asemejen
más a su estado natural en vivo, se han creado diversas
técnicas.
-Fijación
- Deshidratación y aclaramiento
- Inclusión en un medio estable
- Sección en cortes delgados
- Montajes y tinción.

7. FIJACIÓN
Se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que no
sólo retardan las alteraciones tisulares subsecuentes a la muerte si no
que también conservan su configuración normal.
Los agentes para fijación más comunes son formalina y fijador de
Bouin, debido a que ambas permiten el entrecruzamiento de las
proteínas y por lo tanto conservan una imagen del tejido similar al
vivo.

8. DESHIDRATACIÓN
Y ACLARAMIENTO
Debido a la gran parte de a
gua que constituye el tejido, se aplica una serie gradual de alcohol
para deshidratar. A continuación, el tejido se trata con xileno (una
sustancia química que es miscible con parafina fundida) y éste lo
torna transparente.
*La miscibilidad es una propiedad que tienen
algunas sustancias para mezclarse y formar
soluciones.

9. INCLUSIÓN
Se incluyen los tejidos en un medio apropiado (en este caso seria la
parafina) y se seccionan en cortes delgados.
La muestra se recubre con parafina fundida y se deja endurecer y
enfriar para formar un bloque de parafina incluyendo al tejido.

10. SECCIÓN
Se elimina el material de inclusión redundante de los bloques de tejido
y se montan para seccionarlos mediante un micrótomo que es un
aparato equipado con una hoja y un brazo que desciende en el bloque
el tejido en incrementos específicos iguales. Para esta microscopia, el
grosor fluctúa entre 5 y 10 μm.
También es posible realizar el corte en especímenes congelados, ya
sea en nitrógeno líquido o en un porta muestras para congelación
rápida en crióstato.

11. MONTAJE Y
TINICIÓN
Los corten se montan en un portaobjetos con adhesivo y se tiñen,
debido a sus diversas densidades, principalmente con colorantes
hidrosolubles.
Primero es necesario retirar la parafina del tejido,
después rehidratarlo y teñirlo, un vez hecho esto
se deshidrata el corte para fijarlo
permanentemente al cubreobjetos.
Los colorantes pueden agruparse en tres clases:
-Los que diferencian los componentes ácidos y
básicos de la célula.
-Los que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular.
- Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de
metales en ellos.

12. Puesto que casi todos los componentes ácidos son ADN y ARN el
núcleo y las regiones del citoplasma ricas en ribosoma se tiñen de color
azul oscuro; éstos elementos se denominan basofílicos.
La eosina es un ácido que tiñe los componentes básicos de la célula en
color rosado. Debido a que muchos constituyentes del citoplasma se
tiñen de este tono se dice que estos elementos son acidófilos.
Se dice que un tejido o componente celular que se tiñe de color púrpura
es metacromático y que el azul de toluidina muestra metacromasia
(debido a que tiñe de púrpura los tejidos ricos en polianiones.

13. Colorantes y reacciones histológicas comunes
Reactivo Resultado
Hematoxilina Azul: núcleo, regiones del citoplasma;
matriz de cartílago.
Eosina Rosa: Regiones básicas del citoplasma;
fibras de colágeno.
Tricrómica de Masson Azul oscuro: núcleo; Rojo: músculo,
queratina y citoplasma.
Colorante de orceína para fibras elásticas. Pardo: fibras elásticas
Colorante Weigert para fibras elásticas. Azul: fibras elásticas.
Tinciones argénticas. Negro: Fibras reticulares
Hematoxilina férrica Negro: Estriaciones de músculo, núcleos,
eritrocitos
Ácido peryódico de schiff Magenta: moléculas ricas en glucógeno y
carbohidratos
Colorantes de Wright y Giemsa Se utiliza para tinciones deferenciales de
células hemática.
Rosa: eritrocitos, gránulos de eosinofilos.
Púrpura: núcleos de leucocitos, gránulos
basofilos.

14. Los microscopios compuestos están constituidos por una disposición
específica de lentes que permiten una gran amplificación y una buena
resolución de los tejidos observados.

15. Técnicas de imágenes
digitales
Se emplea una computadora para capturar y manipular imágenes
histológicas.
Mediante estas técnicas podemos:
-Observar de manera inmediata la
imagen adquirida
- Modificar digitalmente la imagen
- Realzar la imagen mediante el
uso de programas.
- Guardar la imágenes en un
formato digital
- Transmitir electrónicamente las
imágenes

16. Interpretación de cortes
microscópicos
Aprender a interpretar un corte bidimensional como si fuera
tridimensional.

17. Procedimientos avanzados de
observación
HISTOQUÍMI
CA
La histoquímica es un método de tinción de
tejidos que proporciona información sobre la
presencia y localización de macromoléculas
intracelulares y extracelulares.
.
Con frecuencia se efectúa en tejidos congelados
y se aplica en cualquier microscopía.
Se utiliza regularmente el reactivo ácido
Peryódico Schiff (PAS).

18. INMUNOCITOQUÍMI
CA
Se utilizan anticuerpos marcados con
fluorescencia (fluoresceína o rodamina) y
anticuerpos para identificar una localización
intracelular y extracelular de las macromoléculas
más precisa de la que es posible con la
histoquímica.

19. AUTORRADIOGRAFÍA
Es un método en el que se incorporan isótopos radioactivos en
macromoléculas, que a continuación se observan con el uso de la
película de emulsión superpuesta.
Es un método particularmente útil para localizar e investigar una
secuencia temporal específica de fenómenos

20. Microscopia Confocal
Utiliza un rayo láser como fuente de luz que pasa por un espejo dicroico
para enfocarse en el espécimen y una pantalla con un agujero minúsculo
que permite enfocar la vista al objetivo.
Puede repetirse a mayor profundidad el examen y tendremos una buena
imagen tridimensional.

22. Microscopia electrónica
El uso de electrones como fuente de luz en la microscopia electrónica
permite lograr una ampliación y resolución mucho mayores que las
obtenidas con la microscopia de luz.
Se utiliza un haz de electrones en lugar de fotones como fuente de luz, el
cual se amplía y enfoca por medio de electroimanes.

23. Microscopia electrónica de transmisión (MET)
Se utilizan cortes más delgados para teñir los tejidos y se requieren
técnicas de precipitado de metales pesados en lugar de colorantes
hidrosolubles.

25. Técnica de fractura por congelación (criofractura)
Este método permite mostrar las proteínas transmembranales de
membranas celulares.
Se lleva a cabo mediante el choque de los especímenes congelados
con una hoja de corte muy fría causando así fracturas.
Se crea una réplica del tejido agregando platino y carbono al corte y se
analiza.

26. Microscopia electrónica de barrido
Proporciona una imagen tridimensional del espécimen. Sólo se usa
para observar superficies

28. Texto Atlas de Histología
Leslie P. Gartner
James L. Hiatt
3 Edición
pp. 1-10